一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法技术

本发明专利技术涉及一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，属于生物催化反应技术领域，包括步骤S1：载体构建与克隆；取磷酸化酶(PNP)核苷酸序列用无缝克隆方式将其与载体pET28a连接得到磷酸化酶‑pET28a SEQ ID NO.1‑pET28a；步骤S2：培养取种；步骤S3：验证；步骤S4：酶的表达和提取；步骤S5：纯化；步骤S6：反应；步骤S7：测量。解决了化学方法合成烟酰胺核糖分为好几个步骤，会产生很多中间体，存在中间体分离困难的问题，导致产率不高，生产效率低下的技术问题，主要应用于生物催化合成烟酰胺核糖方面。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及属于生物催化反应，特别涉及一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法。

技术介绍

1、烟酰胺核糖(nr)是维生素b3的衍生物，也被称为维生素b3。是一种重要辅酶的前体，是诺加因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)的前体底物。摄入后可以增加nad+水平。为白色或淡黄色结晶粉末，无臭、味苦，略有引湿性。这个辅酶就是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+，也称辅酶ⅰ)，是一种转递质子(更准确来说是氢离子)的辅酶，它出现在细胞很多代谢反应中。参与蛋白质、碳水化合物和脂肪等化合物的分解，人体的生命活动离不开这个辅酶。随着细胞的衰老或者病变，它的数量就会减少。所以，补充烟酰胺核糖，就能提高这个辅酶(nad+)的含量，提高细胞的基本代谢活动，从而显著提高细胞活力，提高人体各方面的生理机能。

2、烟酰胺核糖第一次被人类记载是在1944年，当时被称为流感嗜血杆菌(haemophilu步骤sinfluenza)的生长因子，也被称为生长因子v。流感嗜血杆菌是生活在血液中并依赖血液生活的细菌。从血液中纯化出来的生长因子v有三种结构：nad+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸),nmn(本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，步骤S1中，所述磷酸化酶(PNP)核苷酸序列为磷酸化酶(PNP)P 01核苷酸序列、磷酸化酶(PNP)P 02核苷酸序列、磷酸化酶(PNP)P 03核苷酸序列中任意一种。

3.根据权利要求1所述的一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，步骤S1中，连接载体进行培育具体为取10μl连接产物加入冰浴的100μl大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞，随后冰浴30min，42℃热激60S，再冰浴5min，向管中加入37...

【技术特征摘要】

1.一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，步骤s1中，所述磷酸化酶(pnp)核苷酸序列为磷酸化酶(pnp)p 01核苷酸序列、磷酸化酶(pnp)p 02核苷酸序列、磷酸化酶(pnp)p 03核苷酸序列中任意一种。

3.根据权利要求1所述的一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，步骤s1中，连接载体进行培育具体为取10μl连接产物加入冰浴的100μl大肠杆菌e.coli bl21(de3)感受态细胞，随后冰浴30min，42℃热激60s，再冰浴5min，向管中加入37℃无抗lb培养液300μl，37℃、200r摇床修复1h，随后涂在卡那霉素抗性的固体lb平板上37℃培育。

4.根据权利要求1所述的一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，步骤s3中，所述pcr反应条件为：95℃、15min，94℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸1min，进行30个循环，最后72℃保温5min。

5.根据权利要求2所述的一种生物催化合成烟酰胺核糖的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张坤晓，王兆俊，叶蕾，吉利，王海，
申请(专利权)人：连云港冠昕医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：