【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸检测，具体为一种用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒及检测方法。
技术介绍
1、在流行性感冒病例日益增多的现在，国内针对新型冠状病毒的检测方法常见有病毒分离培养、抗原检测和核酸检测。其中病毒分离培养准确性高但是成本高，操作复杂，检测时间久，很难在临床大规模的展开。抗原检测时间短，设备要求低，操作简单，但是灵敏度较低，容易出现漏检情况。核酸检测灵敏度和特异性高，但是设备要求高，需要在实验室专业人员操作。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒及检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、一种用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，由以下材料组成：用于拭子采样的裂解液、环介导等温扩增反应体系和核酸金标试纸条，所述环介导等温扩增反应体系包括有10x引物组，所述10x引物组包括有新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物组，所述新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物组包括：
3、上游引物n7-f3，5’-accccaaaatcagcgaa-3’；
4、下游引物n7-b3，5’-gccatgttgagtgagag-3’；
5、上游内引物n7-fip，
6、5’-ggttactgccagttgaatcttgcaccccgcattacg-3’；
7、下游内引物n7-bip，
8、5’-atggagaacgcagtggggcggtgaaccaagacgc-3’
9、上游环状引物n7-lf，5’-tttggtggaccctc-3’；
10、下游环状引物n7-lb，5’-cgcgatcaaaacaacgtc-3’。
11、作为本专利技术的进一步改进，所述10x引物组还包括有人源内参18s rrna基因的环介导等温扩增检测引物组，所述人源内参18s rrna基因的环介导等温扩增检测引物组包括有：
12、上游引物18s rrna-f3，5’-gttcaaagcaggcccgag-3’；
13、下游引物18s rrna-b3，5’-cctccgactttcgttcttga-3’；
14、上游内引物18s rrna-fip，
15、5’-tggcctcagttccgaaaaccaacctggataccgcagctagg-3’；
16、下游内引物18s rrna-bip，
17、5’-ggcattcgtattgcgccgctggcaaatgctttcgctctg-3’；
18、上游环状引物18s rrna-lf，5’-aaccgcggtcctattccattatt-3’；
19、下游环状引物18s rrna-lb，5’-attcttggaccggcgcaag-3’。
20、作为本专利技术的进一步改进，所述新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物中上游内引物n7-fip的5'端修饰有fam基团，在上游环状引物n7-lf的5'端修饰有biotin基团。
21、作为本专利技术的进一步改进，所述人源内参18s rrna基因的环介导等温扩增检测引物组中上游环状引物18s rrna-lf的5'端修饰有fam基团，在下游环状引物18s rrna-lb的5'端修饰有digoxigenin基团。
22、作为本专利技术的进一步改进，所述环介导等温扩增反应体系还包括有mgso4，50-150nm；kcl，300-700mm；(nh4)2so4，60-120mm；模板；dntp mix，700pm-1000pm；酶mix；甜菜碱，50pm-200pm；nuclease-free water。
23、作为本专利技术的进一步改进，所述酶mix包括有10u-20u bst聚合酶，50u-150u rt逆转录酶，20u-50u mri酶。
24、作为本专利技术的进一步改进，所述裂解液包括有100-300nm tris-hcl(ph7-10),0.1％—3.0％triton x-100，余量为nuclease-free water。
25、作为本专利技术的进一步改进，所述核酸金标试纸条包括有底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。
26、作为本专利技术的进一步改进，本专利技术核酸快检试剂盒应用于新型冠状病毒的筛查。
27、本专利技术还提供了用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒的检测方法，本检测方法包括以下步骤：
28、s1、咽和鼻拭子采样裂解：
29、咽拭子采集，用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含0.3—0.5ml提取液中，旋转15秒取出，将取出的拭子放回其包装中，并将提取管中的液体左右摇晃充分混匀用于后期样本扩增；
30、鼻拭子采样步骤，将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻处，停留片刻后缓慢转动退出，取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔，确保拭子与鼻孔内部保持完全接触，上述两根拭子浸入同一含0.3—0.5ml提取液的管中旋转15秒取出，将取出的拭子放回其包装中，并将提取管中的液体左右摇晃充分混匀用于后期样本扩增；
31、s2、将s1中含有核酸混合液滴3-5滴到冻干微球中，并上下颠倒，以确保充分混匀，将混匀后的pcr反应液放入已接通电源温度升至60-65℃的恒温加热器中加热5—60min，取出扩增后的扩增产物；
32、s3、将s2的扩增产物直接滴加到核酸金标试纸条样品垫上，2—10min通过观察核酸金标试纸条显色确认结果。
33、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
34、本专利技术中包含裂解液，可以在短时间内有效释放核酸，同时兼容后续检测体系，新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒基于环介导等温扩增技术具有快速，特异，灵敏，操作简便等特点，非专业人员也可以操作，核酸金标试纸条结果判读简单准确。
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1.一种用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：由以下材料组成：用于拭子采样的裂解液、环介导等温扩增反应体系和核酸金标试纸条，所述环介导等温扩增反应体系包括有10X引物组，所述10X引物组包括有新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物组，所述新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物组包括：
2.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述10X引物组还包括有人源内参18S rRNA基因的环介导等温扩增检测引物组，所述人源内参18S rRNA基因的环介导等温扩增检测引物组包括有：
3.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物中上游内引物N7-FIP的5'端修饰有FAM基团，在上游环状引物N7-LF的5'端修饰有Biotin基团。
4.根据权利要求2所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述人源内参18S rRNA基因的环介导等温扩增检测引物组中上游环状引物18S rRNA-LF的5'端修饰有FAM基团，在下游环状引物18S rR
5.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述环介导等温扩增反应体系还包括有MgSO4，50-150nM；KCl，300-700mM；(NH4)2SO4，60-120mM；模板；dNTP mix，700pM-1000pM；酶mix；甜菜碱，50pM-200pM；Nuclease-Free Water。
6.根据权利要求5所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述酶mix包括有10U-20U Bst聚合酶，50U-150U Rt逆转录酶，20U-50U MRI酶。
7.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述裂解液包括有100-300nM Tris-HCl(pH7-10),0.1％—3.0％Triton X-100，余量为Nuclease-Free Water。
8.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述核酸金标试纸条包括有底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。
9.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述核酸快检试剂盒应用于新型冠状病毒的筛查。
10.根据权利要求1-8任一项所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述核酸快检试剂盒的检测方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：由以下材料组成：用于拭子采样的裂解液、环介导等温扩增反应体系和核酸金标试纸条，所述环介导等温扩增反应体系包括有10x引物组，所述10x引物组包括有新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物组，所述新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物组包括：
2.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述10x引物组还包括有人源内参18s rrna基因的环介导等温扩增检测引物组，所述人源内参18s rrna基因的环介导等温扩增检测引物组包括有：
3.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述新型冠状病毒的环介导等温扩增检测引物中上游内引物n7-fip的5'端修饰有fam基团，在上游环状引物n7-lf的5'端修饰有biotin基团。
4.根据权利要求2所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：所述人源内参18s rrna基因的环介导等温扩增检测引物组中上游环状引物18s rrna-lf的5'端修饰有fam基团，在下游环状引物18s rrna-lb的5'端修饰有digoxigenin基团。
5.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒筛查的核酸快检试剂盒，其特征在于：...
【专利技术属性】
技术研发人员：何伟，韩思超，陈世兴，薛良，
申请(专利权)人：江苏格诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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