【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体公开了一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr探针组及其试剂盒和应用。
技术介绍
1、呼吸道感染分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，前者是鼻腔、咽或喉部急性炎症的总称，后者包括急性气管—支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等。本类疾病发病率高，人群普遍易感，特别是儿童、老人、营养不良及患有慢性病者更易患病，以冬春季发病较多。呼吸道感染病原学复杂，包括细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等，其中80％以上是病毒性的，各年龄段患者病原类型分布可能不同。该病不分季节、任何年龄均可发病，通过含有病原体的飞沫、雾滴，或经污染的器具进行传播。患者常由于机体抵抗力降低时，如受寒、劳累、淋雨等情况，原已存在或由外界侵入的病原体迅速生长繁殖，导致感染。手术后病人免疫力下降，呼吸道感染风险增加，在住院患者中，肺炎链球菌、肺炎支原体和肺炎衣原体更常见，而铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和gas在门诊患者中更常见。感染可导致多种严重并发症，包括肺炎、脑膜炎、急性心肌炎、中耳炎、急性肾炎等，还可诱发慢性疾病急性加重，严重威胁患者的生命健康。现阶段我国市面上缺乏同时检测细菌+病毒的检测手段，临床常用的抗原检测种类少，灵敏度不高，且需要专业技术人员的支持。而病原培养耗时较长，一般需要3-5天，给临床上的诊断与治疗带来不便。mngs检测灵敏快捷，一天便可得到结果，但测序费用高昂，加之目前未获批，只能以医学实验的形式送至相关公司检测，无法大规模应用。呼吸道病原体多联检测成本较低，且可以大大缩短检测时间，扩大检测范围，提高
2、虽然多重pcr技术虽然目前已经较为成熟，但是在临床使用中仍有部分局限性：当多对引物同时扩增时，若试验设计和靶向序列选择不当，则容易交叉干扰，导致扩增失败、特异性降低等问题。因此，在实验设计时不能简单地增加引物种类，需要选择合适的引物并设计实验流程。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术公开了一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr探针组及其试剂盒和应用。
2、本专利技术包括以下技术方案：
3、一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr探针组，包括以下探针：
4、肺炎链球菌的检测探针,其核苷酸序列如seq id no.3所示；
5、甲型流感病毒的检测探针，其核苷酸序列如seq id no.6所示；
6、乙型流感病毒的检测探针，其核苷酸序列如seq id no.9所示
7、人冠状病毒的检测探针，其核苷酸序列如seq id no.12所示；
8、铜绿假单胞菌的检测探针，其核苷酸序列如seq id no.15；
9、人呼吸道合胞病毒的检测探针，其核苷酸序列如seq id no.18所示；
10、金黄色葡萄球菌的检测探针，其核苷酸序列如seq id no.21所示。
11、进一步的，上述一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr探针组，
12、所述肺炎链球菌的检测探针序列5’端标记有fam发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq1；
13、所述甲型流感病毒的检测探针序列5’端标记有rox发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq2；
14、所述乙型流感病毒的检测探针序列5’端标记有vic发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq1；
15、所述人冠状病毒的检测探针序列5’端标记有fam发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq1；
16、所述铜绿假单胞菌的检测探针序列5’端标记有rox发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq2；
17、所述人呼吸道合胞病毒的检测探针序列5’端标记有vic发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq1；
18、所述金黄色葡萄球菌的检测探针序列5’端标记有fam发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq1。
19、本专利技术还公开了一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，包括上述的探针组。
20、进一步的，上述一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，还包括以下引物对：
21、肺炎链球菌的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物；
22、甲型流感病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物；
23、乙型流感病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物；
24、人冠状病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物；
25、铜绿假单胞菌的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物；
26、人呼吸道合胞病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物；
27、金黄色葡萄球菌的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物。
28、进一步的，上述一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，
29、所述肺炎链球菌的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物的核苷酸序列如seq idno.1-2所示；
30、所述甲型流感病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物的核苷酸序列如seq idno.4-5所示；
31、所述乙型流感病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物的核苷酸序列如seq idno.7-8所示；
32、所述人冠状病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物的核苷酸序列如seq idno.10-11所示；
33、所述铜绿假单胞菌的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物的核苷酸序列如seq idno.13-14所示；
34、所述人呼吸道合胞病毒的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物的核苷酸序列如seq id no.16-17所示；
35、所述金黄色葡萄球菌的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物的核苷酸序列如seqid no.19-20所示。
36、进一步的，上述一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，还包括：
37、人dna内参的检测探针，其核苷酸序列如seq id no.24所示；所述人dna内参的检测探针序列5’端标记有cy5发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团bhq2。
38、进一步的，上述一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，还包括：
39、人dna内参的正向pcr扩增引物、反向pcr扩增引物，其核苷酸序列如seq idno.22-23所示。
40、进一步的，上述一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，还包括pcr引物探针缓冲液和taq酶；
41、所述pcr引物探针缓冲液中保存有检测探针和引物；
42、所述pcr引物探针缓冲液还包括以下成分：150mm tris-hcl，30mm kcl，10mmmgcl2，35mm硫酸铵，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR探针组，其特征在于，包括以下探针：
2.根据权利要求1所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR探针组，其特征在于，
3.一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2所述的探针组。
4.根据权利要求3所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR的试剂盒，其特征在于，还包括以下引物对：
5.根据权利要求4所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR的试剂盒，其特征在于，
6.根据权利要求5所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR的试剂盒，其特征在于，还包括：
7.根据权利要求6所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR的试剂盒，其特征在于，还包括：
8.根据权利要求4所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重RT-PCR的试剂盒，其特征在于，还包括PCR引物探针缓冲液和Taq酶；
9.如权利要求1-2任一项所述的探针组或权利要求3-8任一
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述样品选自咽拭子样本和痰液样本中的一种或者两种。
...【技术特征摘要】
1.一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr探针组，其特征在于，包括以下探针：
2.根据权利要求1所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr探针组，其特征在于，
3.一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2所述的探针组。
4.根据权利要求3所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，其特征在于，还包括以下引物对：
5.根据权利要求4所述的一种同时检测多种术后感染病原体的多重rt-pcr的试剂盒，其特征在于，
6.根据权利要求5所述的一种同时...
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