一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的引物组、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的引物组、试剂盒及其应用。属于基因检测技术领域。本发明专利技术针对ORSV、CyMV、WCMV、YaVX和PoVX五种病毒的小RNA测序的核苷酸序列，分别设计了五对相应的特异性引物，并利用该五对特异性引物同时对蝴蝶兰叶片中的ORSV、CyMV、WCMV、YaVX和PoVX进行检测，且待检测WCMV、YaVX和PoVX与现有病毒的序列同源性低至52‑76％，与现有技术序列差异很大，在这种情况下，本发明专利技术引物组仍然可以实现一次反应就能同时检测出5种蝴蝶兰病毒的目标，快速便捷，检测效率高，且本发明专利技术所用试剂为分子生物学常用试剂，成本低，即使样本中蝴蝶兰病毒的RNA含量很低，仍然可以检测出来，具有很高的检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因检测，更具体的说是一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的引物组、试剂盒及其应用。

技术介绍

1、蝴蝶兰植物有重要的观赏价值和经济价值，但是近年来随着蝴蝶兰植物贸易的增加，加速了病毒病等的发生和蔓延。建兰花叶病毒(cymbidiummosaic virus,cymv)、齿兰环斑病毒(odontoglossumringspotvirus,orsv)、白三叶草花叶病毒(white clovermosaicvirus,wcmv)、淮山药x病毒(yammosaic virus,yavx)和马铃薯x病毒(potato virus x,povx)是危害蝴蝶兰的五种主要病毒。病毒病能使叶片形成褪色斑、坏死斑、花叶斑等症状，致使蝴蝶兰植株生长不良、叶片无光泽、花朵质量下降，甚至植株死亡，降低了蝴蝶兰的观赏价值和经济价值，给蝴蝶兰的生产企业带来严重的经济损失。

2、目前国际上对蝴蝶兰病毒病还未有防治的有效药剂，因此在蝴蝶兰病毒病的防治过程中，多采用早发现，早隔离的防治措施，但蝴蝶兰病株早期通常只有轻微的症状表现，或根本不表现病症，通过单纯的症状观察已经无法本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的引物组，其特征在于，包括如下5组引物对：

2.权利要求1所述引物组在制备鉴定蝴蝶兰病毒基因产品中的应用。

3.一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括Taq酶、Taq酶buffer、dNTPs。

5.一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物组或权利要求3-4任一所述试剂盒，对待检测病毒进行mRT-PCR扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，根据条带的大小判断病毒的有无。

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【技术特征摘要】

1.一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的引物组，其特征在于，包括如下5组引物对：

2.权利要求1所述引物组在制备鉴定蝴蝶兰病毒基因产品中的应用。

3.一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括taq酶、taq酶buffer、dntps。

5.一种同时检测多种蝴蝶兰病毒的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物组或权利要求3-4任一所述试剂盒，对待检测病毒进行mrt-pcr扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，根据条带的大小判断病毒的有无。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述mrt-pcr反应体系组成如下：

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述mrt-pcr反应体系中所有正向引物和反向引物加入反应体系前的初始浓度均为10μmol/l，且反应体系中每对引物中的正向引物和反向引物的浓度均相等。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述mrt-pcr反应体系中建兰...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊荣辉，钟淮钦，冯子楠，吴建设，钟声远，
申请(专利权)人：福建省农业科学院作物研究所福建省种质资源中心，
类型：发明
国别省市：