【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种空肠弯曲菌表面三糖缀合物及其制备方法与应用，属于生物医药。
技术介绍
1、空肠弯曲菌(campylobacter jejuni)是弯曲杆菌属的一种微需氧的革兰氏阴性细菌，是人类胃肠炎的常见病因。与其他肠道致病菌不同的是，空肠弯曲菌的表面包被cps，并在结构上显示出特殊的meopn化学修饰以及差向异构化庚糖。penner血清分型方案就是根据荚膜多糖(cps)的不同，将空肠弯曲菌分为多种血清型，目前全球范围内较为流行的菌株有hs2、hs4、hs1/44等血清型，在发展中国家还显示出hs3、hs5、hs15、hs8/17、hs53、hs23/36菌株的高致病性。针对这些高流行性和致病性的空肠弯曲菌菌株，科学家们对其cps进行了分离纯化和结构鉴定，期望开发出基于cps的疫苗来抵御空肠弯曲菌感染，但分离的cps存在杂质以及结构不均一等问题。
2、目前已经有多种空肠弯曲菌菌株cps的结构被报道，例如，2007年gilbert等人从空肠弯曲菌rm1221(hs53)菌株中分离出了cps并明确其结构，发现该cps抗原结构中含有三种结构的三糖重复单元，其中6-脱氧-d-甘露庚糖是三种重复单元中共有的糖砌块。本课题组猜测该结构可能是cps发挥毒力因子作用的关键，现有技术中尚未有以该结构为抗原的糖缀合物疫苗被研究和开发。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于解决现有技术的不足，提供一种空肠弯曲菌表面三糖缀合物。
2、本专利技术的另一目的还在于，提供上述空肠弯曲
3、本专利技术的第三目的是提供上述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的应用。
4、技术方案
5、本专利技术利用一种简单高效的制备方法，将空肠弯曲菌rm1221表面6-脱氧-d-甘露庚糖三糖片段3a与载体蛋白crm197偶联形成完整的糖缀合物抗原crm197-3a，通过免疫实验证实，该三糖缀合物抗原能够激发小鼠体内的免疫反应，引发强烈的抗体水平，抗体能够与空肠弯曲菌表面显著结合，可开发成空肠弯曲菌病原体检测试剂或空肠弯曲菌疫苗。具体方案如下：
6、一种空肠弯曲菌表面三糖缀合物，其结构通式如式(i)所示：
7、
8、其中，所述r为载体蛋白crm197。
9、上述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，包括如下步骤：
10、(1)将双琥珀酰亚胺戊二酸酯(dsg)溶解于有机溶剂中，再加入三乙胺，搅拌混合均匀，得到双琥珀酰亚胺戊二酸酯溶液；
11、(2)将6-脱氧-d-甘露庚糖三糖溶解于有机溶剂中，然后滴加到步骤(1)的双琥珀酰亚胺戊二酸酯溶液中，室温下反应，得到反应液；
12、(3)向反应液中加入ph值为7.4的pbs缓冲液和氯仿进行萃取，保留上层水相；
13、(4)将crm197载体蛋白溶于ph值为7.4的pbs缓冲液，再加入到步骤(3)的上层水相中，搅拌反应，得到空肠弯曲菌表面三糖缀合物粗品；
14、(5)采用超滤离心法对空肠弯曲菌表面三糖缀合物粗品进行浓缩纯化，得到空肠弯曲菌表面三糖缀合物。
15、进一步，步骤(1)和(2)中，所述有机溶剂为dmso(二甲亚砜)。
16、进一步，步骤(2)中，所述6-脱氧-d-甘露庚糖三糖与双琥珀酰亚胺戊二酸酯的摩尔比为1：(8-12)。
17、进一步，步骤(4)中，所述crm197载体蛋白与6-脱氧-d-甘露庚糖三糖的摩尔比为1：(140-160)。
18、进一步，步骤(4)中，所述搅拌反应的时长为15-24h。
19、本专利技术的反应原理如下：
20、
21、上述空肠弯曲菌表面三糖缀合物在制备预防或治疗抗空肠弯曲菌感染的药物中的应用。
22、上述空肠弯曲菌表面三糖缀合物在制备抗空肠弯曲菌感染的疫苗中的应用。
23、上述空肠弯曲菌表面三糖缀合物在制备空肠弯曲菌病原体检测试剂中的应用。
24、本专利技术的有益效果：
25、本专利技术公开了一种空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，将空肠弯曲菌rm1221表面6-脱氧-d-甘露庚糖三糖片段3a与载体蛋白crm197偶联形成完整的糖缀合物抗原crm197-3a，该方法简单高效，通过免疫实验证实，该三糖缀合物抗原能够激发小鼠体内的免疫反应，引发强烈的抗体水平，抗体能够与空肠弯曲菌表面显著结合，可开发成空肠弯曲菌病原体检测试剂或空肠弯曲菌疫苗，为开发空肠弯曲菌病原体检测试剂及空肠弯曲菌疫苗提供了理论基础。
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1.一种空肠弯曲菌表面三糖缀合物，其特征在于，所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的结构通式如式(I)所示：
2.权利要求1所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，所述有机溶剂为DMSO。
4.如权利要求2所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述6-脱氧-D-甘露庚糖三糖与双琥珀酰亚胺戊二酸酯的摩尔比为1：(8-12)。
5.如权利要求2所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述CRM197载体蛋白与6-脱氧-D-甘露庚糖三糖的摩尔比为1：(140-160)。
6.如权利要求2至5任一项所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述搅拌反应的时长为15-24h。
7.权利要求1所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物在制备预防或治疗抗空肠弯曲菌感染的药物中的应用。
8.权利要求1所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物在制备抗空肠弯
9.权利要求1所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物在制备空肠弯曲菌病原体检测试剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种空肠弯曲菌表面三糖缀合物，其特征在于，所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的结构通式如式(i)所示：
2.权利要求1所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，所述有机溶剂为dmso。
4.如权利要求2所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述6-脱氧-d-甘露庚糖三糖与双琥珀酰亚胺戊二酸酯的摩尔比为1：(8-12)。
5.如权利要求2所述空肠弯曲菌表面三糖缀合物的...
【专利技术属性】
技术研发人员：张依玥，张馨允，李轩，董泱，苏楠，
申请(专利权)人：江苏食品药品职业技术学院，
类型：发明
国别省市：
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