【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种融合蛋白及其制备方法与应用。
技术介绍
1、蒿甲醚(artemether)是青蒿素的衍生物之一，对治疗脑型疟疾和抗氯喹恶性疟疾具有高效、低毒、速效、复燃率低等显著特点。
2、目前检测蒿甲醚的方法有高效液相色谱法(hplc)、液相色谱-质谱联用法(lc-ms)、气相色谱-质谱联用法(gc-ms)、紫外分光光度法、薄层色谱法(tlc)等，这些方法耗时长，且需要昂贵的仪器和专业人员。也有研究通过elisa检测蒿甲醚，elisa中一般采用化学交联的方法，将辣根过氧化物酶(hrp)或碱性磷酸酶(ap)等标记到抗体上，此方法会降低抗体的特异性和亲和力，并且增加操作步骤和成本。
3、因此，提供一种灵敏度高、特异性好的用于elisa检测蒿甲醚的抗体非常重要。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种融合蛋白，对蒿甲醚具有很高的检测灵敏度和特异性，可应用于蒿甲醚的检测。
2、本专利技术还提供与上述融合蛋白相关的生物材料。
3、本专利技术还提供一种用于检测蒿甲醚的产品。
4、本专利技术还提供上述融合蛋白或上述生物材料或上述产品的应用。
5、本专利技术还提供一种检测蒿甲醚或蒿甲醚含量的方法。
6、本专利技术还提供一种上述融合蛋白的制备方法。
7、根据本专利技术的第一方面实施例的一种融合蛋白，所述融合蛋白包括以下模块：>
8、蒿甲醚单链抗体、fc、荧光素酶。
9、根据本专利技术实施例的融合蛋白，至少具有如下有益效果：
10、本专利技术将fc标签、荧光素酶(nluc)标签与蒿甲醚单链抗体融合，fc标签提高抗体的稳定性，nluc标签可以实现一步法生物发光酶联免疫吸附测定(bleia)，其不仅未降低蒿甲醚单链抗体的特异性和亲和力，还对蒿甲醚具有很高的检测灵敏度和特异性，ic50降低，灵敏度提高，检测限降低28％以上检测性能好，可用于蒿甲醚的定量和定性检测，大大减少了检测方法花费的时间。应用于elisa检测时，不需要酶标二抗，大大简化了操作步骤，具有很好的应用前景。
11、根据本专利技术的一些实施例，所述蒿甲醚单链抗体具有氨基酸序列如seq id no:1第1～118位所示的重链可变区，氨基酸序列如seq id no:1第134～242位所示的轻链可变区。
12、根据本专利技术的一些实施例，所述重链可变区和所述轻链可变区通过连接肽相连。所述连接肽包括柔性连接肽。例如：所述连接肽可以为(ggggs)3、(gggs)3或(gggs)5。
13、根据本专利技术的一些实施例，所述蒿甲醚单链抗体和所述fc通过连接肽相连。所述连接肽包括柔性连接肽。例如：所述连接肽可以如seq id no.1的第243～246位所示。
14、根据本专利技术的一些实施例，所述fc和所述荧光素酶通过连接肽相连。所述连接肽包括柔性连接肽。例如：所述连接肽可以如seq id no.1的第477～485位所示。
15、根据本专利技术的一些实施例，所述fc的氨基酸序列如seq id no:1第247～476位所示。
16、根据本专利技术的一些实施例，所述荧光素酶的氨基酸序列如seq id no:1第486～656位所示。
17、根据本专利技术的一些实施例，所述融合蛋白由蒿甲醚单链抗体、fc、荧光素酶依次串联融合得到。
18、根据本专利技术的一些实施例，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。
19、根据本专利技术的第二方面实施例的与上述融合蛋白相关的生物材料，所述生物材料为a1)至a8)中的任一种：
20、a1)、编码上述融合蛋白的核酸分子；
21、a2)、含有a1)所述核酸分子的表达盒；
22、a3)、含有a1)所述核酸分子的重组载体；
23、a4)、含有a2)所述表达盒的重组载体；
24、a5)、含有a1)所述核酸分子的重组生物细胞；
25、a6)、含有a2)所述表达盒的重组生物细胞；
26、a7)、含有a3)所述重组载体的重组生物细胞；
27、a8)、含有a4)所述重组载体的重组生物细胞。
28、根据本专利技术的一些实施例，a1)所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因组dna或重组dna；所述核酸分子也可以是rna，如mrna或hnrna等。
29、根据本专利技术的一些实施例，a1)所述核酸分子中，编码所述蒿甲醚单链抗体的所述重链可变区的核酸分子的核苷酸序列包含：
30、b11)、如seq id no:2第1～354位所示的核苷酸序列；或
31、b12)、将b11)所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加，且与将b11)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列；或
32、b13)、与b11)所示核苷酸序列具有至少80％以上同源性，且与将b11)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列。
33、根据本专利技术的一些实施例，a1)所述核酸分子中，编码所述蒿甲醚单链抗体的所述轻链可变区的核酸分子的核苷酸序列包含：
34、b21)、如seq id no:2第340～726位所示的核苷酸序列；或
35、b22)、将b21)所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加，且与将b21)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列；或
36、b23)、与b21)所示核苷酸序列具有至少80％以上同源性，且与将b21)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列。
37、根据本专利技术的一些实施例，a1)所述核酸分子中，编码所述fc的核酸分子的核苷酸序列包含：
38、b31)、如seq id no:2第739～1428位所示的核苷酸序列；或
39、b32)、将b31)所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加，且与将b31)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列；或
40、b33)、与b31)所示核苷酸序列具有至少80％以上同源性，且与将b31)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列。
41、根据本专利技术的一些实施例，a1)所述核酸分子中，编码所述荧光素酶的核酸分子的核苷酸序列包含：
42、b41)、如seq id no:2第1456～1968位所示的核苷酸序列；或
43、b42)、将b41)所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加，且与将b41)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列；或
44、b43)、与b41)所示核苷酸序列具有至少80％以上同源性，且与将b41)所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列。
45、根据本专利技术的一些实施例，a1)所述核酸分子中，编码所述融合蛋白的核酸分子的核本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括以下模块：
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述蒿甲醚单链抗体具有氨基酸序列如SEQ ID NO:1第1～118位所示的重链可变区，氨基酸序列如SEQ ID NO:1第134～242位所示的轻链可变区；
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。
4.与权利要求1至3任一所述的融合蛋白相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为A1)至A8)中的任一种：
5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，A1)所述核酸分子中，编码所述融合蛋白的核酸分子的核苷酸序列包含：
6.一种用于检测蒿甲醚的产品，其特征在于，包括权利要求1至3任一所述的融合蛋白。
7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于，所述产品可用于酶联免疫吸附(ELISA)检测、免疫组织化学检测、免疫荧光检测、免疫印迹测定或免疫亲和层析。
8.权利要求1至3任一所述的融合蛋白、或权利要求4至5任一项所述的生物材料、或权利要求6或7
9.一种检测蒿甲醚或蒿甲醚含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.一种权利要求1至3任一所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括以下模块：
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述蒿甲醚单链抗体具有氨基酸序列如seq id no:1第1～118位所示的重链可变区，氨基酸序列如seq id no:1第134～242位所示的轻链可变区；
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq idno:1所示。
4.与权利要求1至3任一所述的融合蛋白相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为a1)至a8)中的任一种：
5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，a1)所述核酸分子中，编码所述融合蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭素琴，谭桂玉，陆芳，张发，吴锡群，陈丽萍，黄婷婷，
申请(专利权)人：五邑大学，
类型：发明
国别省市：
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