一种重组人IV型胶原蛋白及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种重组人IV型胶原蛋白及其制备方法，属于生物工程技术领域；本发明专利技术以人IV型胶原蛋白α2链中的部分序列为基础设计重组人IV型胶原蛋白，将蛋白编码DNA连接入表达载体中，构建重组表达载体；然后将其转化感受态大肠杆菌细胞，提取重组表达质粒；质粒线性化后转化工程菌株HCPB‑PPKEX2得到重组工程菌；培养，诱导表达目的蛋白并纯化、鉴定；进一步通过实验证明了本发明专利技术的胶原蛋白能够被Kex2、Ste13和CPB酶完全切割并高效分泌表达于胞外，并与理论序列完全一致；还通过实验验证了重组胶原蛋白的细胞黏附活性和促进细胞迁移活性；本发明专利技术的方案避免了外源蛋白残留的风险，同时也可以缩短后续纯化工艺流程的时间及成本，具有较高的安全性和应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组人iv型胶原蛋白及其制备方法，属于生物工程。

技术介绍

1、胶原蛋白(collagen)是人体主要的细胞外基质，约占细胞外基质的85％，也是人体组织器官的主要结构蛋白，约占人体蛋白质总量的30％-40％，常见于皮肤、血管、肌腱、筋膜等部位，发挥多种重要的生物学功能。迄今已发现有28种不同类型的胶原蛋白，胶原蛋白家族成员具有独特的三聚体螺旋结构，根据是否可以形成有周期性横纹的胶原原纤维，分为原纤维胶原蛋白(fibrillar collagen)和非原纤维胶原蛋白(nonfibrillarcollagen)。常见的原纤维胶原蛋白包括i、ii、iii、v和xi型胶原蛋白等，常见的非原纤维胶原蛋白包括iv、x型胶原蛋白等。其中，iv型胶原蛋白是组成基底膜的主要结构成分，由α1、α2、α3、α4、α5、α6六型α-肽链组成。六型α-肽链组成三种不同的异源三聚体α1α1α2、α3α4α5、α5α5α6，其中只有α1α1α2和α5α5α6在皮肤内表达。iv型胶原蛋白不仅提供了细胞生长的支架，而且还能和细胞表面的特异受体相互识别和作用，进而激活细胞内本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组人IV型胶原蛋白单体，其特征在于，所述重组人IV型胶原蛋白单体的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示、或在SEQ ID No:1基础上进行一定程度上的氨基酸替换、插入、取代、添加、缺失等修改后的氨基酸序列、或与SEQ ID No:1所示氨基酸序列具有大于80％同一性的氨基酸序列。

2.一种重组人IV型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人IV型胶原蛋白的氨基酸序列包含n个权利要求1所述的单体，n为大于等于3且小于等于20的整数；其中每个单体序列相同或不同并且以单体为基础单元串联重复。

3.根据权利要求2所述的重组人IV型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人IV...

【技术特征摘要】

1.一种重组人iv型胶原蛋白单体，其特征在于，所述重组人iv型胶原蛋白单体的氨基酸序列如seq id no:1所示、或在seq id no:1基础上进行一定程度上的氨基酸替换、插入、取代、添加、缺失等修改后的氨基酸序列、或与seq id no:1所示氨基酸序列具有大于80％同一性的氨基酸序列。

2.一种重组人iv型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人iv型胶原蛋白的氨基酸序列包含n个权利要求1所述的单体，n为大于等于3且小于等于20的整数；其中每个单体序列相同或不同并且以单体为基础单元串联重复。

3.根据权利要求2所述的重组人iv型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人iv型胶原蛋白的氨基酸序列中包含能被kex2酶、cpb酶和ste13酶切割去除的氨基酸序列。

4.根据权利要求3所述的重组人iv型胶原蛋白，其特征在于，所述能被kex2酶、cpb酶和ste 13酶切割去除的氨基酸序列为kkrea。

5.根据权利要求3所述的重组人iv型胶原蛋白，其特征在于，所述能被kex2酶、cpb酶和ste 13酶切割去除的氨基酸序列与所述的基础单元直接连接；所述重组人iv型胶原蛋白中每相邻的2个基础单元之间添加有至少一个能被kex2酶、cpb酶和ste 13酶切割去除的氨基酸序列。

6.根据权利要求2-5任一项所述的重组人iv型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人iv型胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示，或在如seq id no:2所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或修饰1个或多个氨基酸残基并且保留人天然iv型胶原蛋白活性的氨基酸序列。

7.编码权利要求2-6任一项所述重组人iv型胶原蛋白的多核苷酸。

8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸序列如seq id no:5所示或其简并序列。

9.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求7或8所述的多核苷酸。

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【专利技术属性】
技术研发人员：吴晓文，李佳佳，韩蓓，凡孝菊，储筠，钱松，
申请(专利权)人：江苏创健医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：