重组人乳铁蛋白在酵母中的异源表达及其制备方法技术

技术编号:44899563 阅读:20 留言:0更新日期:2025-04-08 18:47
本发明专利技术公开了重组人乳铁蛋白在酵母中的异源表达及其制备方法,涉及生物技术领域。本发明专利技术以HLF基因为模板,按照毕赤氏酵母的密码子偏好性进行密码子优化,将优化后的基因克隆至pPICZαA载体,采用杂合信号肽编码序列OST‑pro‑αfactor或SUC‑pro‑αfactor替换α‑factor信号肽的编码序列,构建重组表达载体,电击转化到毕赤氏酵母X‑33中,获得重组酵母工程菌。通过色谱柱纯化结合SDS‑PAGE分析BLF蛋白表达情况,结果表明HLF在重组酵母工程菌中实现了可溶性高效表达,发酵产量达到1200mg/L,分子量为80kDa左右,与其理论分子量一致。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物,特别是涉及重组人乳铁蛋白在酵母中的异源表达及其制备方法


技术介绍

1、人乳铁蛋白(human lactoferrin,hlf)是一种分子量约为80kda铁结合蛋白,属于转铁蛋白家族。hlf在人乳中有较高的含量,人初乳中hif的含量高达7mg/ml,人常乳中的浓度也有1mg/ml。hlf含有691个氨基酸,每个乳铁蛋白的分子包含两个同源结构域,分别在n端和c端。每个结构域分别包含两个亚结构域,两个亚结构域形成一个缝隙,缝隙中fe3+离子与两个羧基结合,这些亚结构域分别叫n1、n2,c1、c2。在自然状态下,牛乳铁蛋白只有15-20%的铁饱和度,颜色为粉红色。色泽的深浅取决于铁饱和状态,小于5%铁饱和度的乳铁蛋白通常称为脱铁乳铁蛋白(apolactoferrin),而铁饱和的乳铁蛋白通常称为全乳铁蛋白(hololactoferrin)。人乳中的乳铁蛋白主要是脱铁乳铁蛋白。

2、乳铁蛋白主要存在于消化道、呼吸道、生殖系统等外分泌腺体密集的器官,还存在于血液中,中性粒细胞中也发现有乳铁蛋白,在发炎的部位,将加速合成并释放储存的乳铁本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可溶性表达重组人乳铁蛋白的重组酵母工程菌OH的构建方法,其特征在于,包括重组表达载体OST-pro-αf-pPICZαA-HLF转化至酵母菌宿主细胞,制备得到所述重组酵母工程菌OH的步骤;

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述酵母菌宿主细胞为毕赤氏酵母X-33。

3.一种根据权利要求1或2所述的构建方法构建得到的可溶性表达重组人乳铁蛋白的重组酵母工程菌OH。

4.根据权利要求3所述的重组酵母工程菌OH,其特征在于,所述重组酵母工程菌OH为巴斯德毕赤酵母(Komagataellaphaffii)OH10,其于2024年11月7日保藏...

【技术特征摘要】

1.一种可溶性表达重组人乳铁蛋白的重组酵母工程菌oh的构建方法,其特征在于,包括重组表达载体ost-pro-αf-ppiczαa-hlf转化至酵母菌宿主细胞,制备得到所述重组酵母工程菌oh的步骤;

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述酵母菌宿主细胞为毕赤氏酵母x-33。

3.一种根据权利要求1或2所述的构建方法构建得到的可溶性表达重组人乳铁蛋白的重组酵母工程菌oh。

4.根据权利要求3所述的重组酵母工程菌oh,其特征在于,所述重组酵母工程菌oh为巴斯德毕赤酵母(komagataellaphaffii)oh10,其于2024年11月7日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为cgmcc no.32533。

5.一种可溶性表达重组人乳铁蛋白的重组酵母工程菌sh的构...

【专利技术属性】
技术研发人员:李佳佳吴晓文韩蓓钱晨明程鹏飞钱松
申请(专利权)人:江苏创健医疗科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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