牡蛎酶解物的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种制备具有抗氧化和延缓衰老活性的牡蛎酶解物的方法及应用，包括以下步骤：以干燥的牡蛎粉为原料，配成蛋白质量分数为２％的水溶液，５２．５－５５℃水浴浸泡３０分钟，然后以组合蛋白酶先后或同时水解；各蛋白酶的加酶量为６０００－８０００Ｕ／ｇ底物蛋白，调ｐＨ?６．０－７．０，温度为５２．５－５５℃下水解２小时，酶解液离心后，上清液用截留分子量为１ｋＤａ的超滤膜超滤；截留液进行喷雾干燥，获得牡蛎酶解物。可以用来制备具有抗氧化活性的食品添加剂或者具有延缓衰老的营养食品。本发明专利技术具有原料来源广泛、制备工艺简单、效率高、无污染等优点；酶解物具有较强的抗氧化活性及明显的延缓衰老作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及制备一种具备延缓衰老活性的牡蛎蛋白酶解物的方法，可以作为抗氧 化、延缓衰老营养素或药物添加，属于海洋生物技术应用领域。
技术介绍
牡蛎，俗称海蛎子、蚝，是世界上第一大养殖贝类，也是我国四大养殖贝类之一，广 泛分布于我国辽宁、山东、福建及广东沿海等地。牡蛎肉嫩味鲜，药食兼用，在我国已有几百 年的历史，素有“海中牛奶”的美称，是我国首批列为药食同源的保健疗效食品之一。牡蛎 的蛋白质含量可高达50 %，且氨基酸组成完全。牡蛎肉中还含有丰富的糖原、二十二碳六烯 酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等不饱和脂肪酸、维生素以及硒和锌等矿物质。近十年来， 酶制剂在海洋贝类资源加工过程中得到了普遍的应用，贝类蛋白酶解工艺及其酶解物功效 的研究不断进展。目前，酶解技术已经成为海洋贝类蛋白资源高值化、资源化、生态化开发 利用的重要手段。但是，如何借鉴和突破传统酶解技术与工艺，对海洋贝类蛋白资源的绿色 高值化开发，仍是我国贝类资源综合利用中一个重要的研究领域。
技术实现思路
本专利技术以牡蛎粉为原料，采用组合酶解技术获得牡蛎酶解物，显著优于各种单一 酶水解的效果。通过各种抗氧化检测体系确证了牡蛎组合酶解物具有显著的抗氧化活性； 并采用果蝇生存实验、小鼠肝组织中过氧化脂质含量和抗氧化酶活性等指标的测定，确证 牡蛎组合酶解物具有显著的延缓衰老活性。选择此新工艺制备的酶解物具有的显著生物活 性，可实现牡蛎的高值化利用。本专利技术是通过以下技术手段实现的，组合酶解工艺以牡蛎粉于水中配成蛋白质 量分数为2%的水溶液，反应器中52. 5°C _55°C水浴浸泡30分钟，然后先后或同时加入组 合蛋白酶进行水解；各蛋白酶的加酶量为6000-8000U/g底物蛋白，用磷酸缓冲液调节pH 6. 0-7. 0，反应温度为52. 5-55°C的条件下水解2小时，煮沸IOmin灭酶；离心各酶解液，取 上清液用截留分子量为IkDa的超滤膜超滤，截留液进行喷雾干燥，获得牡蛎酶解物；其中 所述的组合蛋白酶为中性蛋白酶与复合风味酶。优选在温度55°C，pH6. 0，同时加入两种酶 量为6000U/g底物蛋白的中性蛋白酶与复合风味酶。上述牡蛎酶解物的应用之一，以其清除DPPH ·、· 0H、超氧阴离子自由基作用及其 还原能力为依据，结合小鼠肝勻浆检测体系测定，证明了牡蛎酶解物具有较强的体外抗氧 化活性，可以制备具有抗氧化活性的食品、食品配料或保健品。上述牡蛎酶解物的应用之二，经延缓衰老评价，以果蝇的生存试验、过氧化脂质含 量测定和抗氧化酶活力测定三个方面为评价指标，确证了牡蛎酶解物提高果蝇的平均寿命 及最高寿命；提高小鼠体内SOD活性，降低小鼠体内MDA的含量，具有延缓衰老的作用，可以 制备具有延缓衰老作用的营养食品。本专利技术的有益效果牡蛎粉经组合蛋白酶酶解后，其肽得率与抗氧化活性都得以提高，并具备明显的延缓衰老的作用。本专利技术具有原料来源广泛、制作成本低、制备工艺简单、效率高、无污染等优点，符 合大规模生产要求，容易实施。所制牡蛎酶解物既可以作为具有延缓衰老的营养食品直接 食用，也可以作为食品配料或保健品。附图说明图1是本专利技术的工艺流程图。 具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术做进一步阐述本专利技术中使用的蛋白酶，包括中性蛋白酶(酶活力为16.0万U/g)、碱性蛋白酶 (酶活力为154. 64万U/mL)、复合风味酶(酶活力为6. 9万U/g)由无锡杰能科酶制剂有限 公司提供；胰蛋白酶(酶活力为26. 26万U/g)、木瓜蛋白酶(酶活力为4. 96万U/g)和胃 蛋白酶(酶活力为1.6万U/g)由上海化学试剂公司提供。对比例1牡蛎中性蛋白酶酶解物的制备准确称取干燥的牡蛎粉，加水配成蛋白质量分数为2%的水溶液，放入反应器中， 55°C水浴浸泡30分钟，按照酶与底物蛋白质量比为8000U/g的量加入中性蛋白酶，用磷酸 缓冲液调节溶液pH至7. 0 ；置于恒温水浴锅中55°C下酶解2小时，酶解物加热煮沸10分 钟灭酶，6000r/min离心15分钟，上清液用截留分子量IkDa的超滤膜超滤、脱盐，截留液 进行浓缩、喷雾干燥，获牡蛎酶解物。水解牡蛎粉的肽得率为46. 8%，羟自由基清除率为 90. 9%。对比例2牡蛎复合风味酶酶解物的制备准确称取干燥的牡蛎粉，加水配成蛋白质量分数为2%的水溶液，放入反应器中， 50°C水浴浸泡30分钟，按照酶与底物蛋白质量比为8000U/g的量加入复合风味酶，用磷酸 缓冲液调节溶液pH至6. 0 ；置于恒温水浴锅中50°C下酶解2小时，酶解液加热煮沸10分 钟灭酶，6000r/min离心15分钟，上清液用截留分子量IkDa的超滤膜超滤、脱盐，截留液 进行浓缩、喷雾干燥，获得牡蛎酶解物。水解牡蛎粉的肽得率为42.2%，羟自由基清除率为 88. 6%。实施例3牡蛎组合酶解物的制备准确称取干燥的牡蛎粉，加水配成蛋白质量浓度为2%水溶液，55°C水浴浸泡30 分钟，先按酶与底物蛋白质量比为8000U/g加入中性蛋白酶，用磷酸缓冲液调节pH 7.0，置 于恒温水浴锅中55°C下酶解水解120min ；再加入8000U/g的复合风味酶，在温度50°C、pH 6. 0，水解120min。酶解物加热煮沸10分钟灭酶，6000r/min离心15分钟，上清液用截留分 子量IkDa的超滤膜超滤、脱盐，截留液进行浓缩、喷雾干燥，获得牡蛎酶解物。水解牡蛎粉 的肽得率为53. 6%，羟自由基清除率为98. 2%。实施例44牡蛎组合酶解物的制备准确称取干燥的牡蛎粉，加水配成蛋白质量浓度为2%水溶液，55°C水浴浸泡30 分钟，先按酶与底物蛋白质量比为8000U/g加入复合风味酶，用磷酸缓冲液调节pH 6.0，置 于恒温水浴锅中50°C下酶解水解120min ；再加入8000U/g的中性蛋白酶，在温度55°C、pH 7. 0，水解120min。酶解物加热煮沸10分钟灭酶，6000r/min离心15分钟，上清液用截留分 子量IkDa的超滤膜超滤、脱盐，截留液进行浓缩、喷雾干燥，获得牡蛎酶解物。水解牡蛎粉 的肽得率为49. 1 %，羟自由基清除率为98. 4%。实施例5牡蛎组合酶解物的制备准确称取干燥的牡蛎粉，加水配成蛋白质量浓度2%水溶液，放入反应器中， 52. 5°C水浴浸泡30分钟，按每种酶与底物蛋白质量比为6000U/g底物蛋白的加酶量，同 时加入中性蛋白酶和复合风味酶，用磷酸缓冲液调节溶液PH至6.0;置于恒温水浴锅中 52. 5°C下酶解2小时，酶解物煮沸10分钟灭酶活，6000r/min离心15分钟，上清液用截留分 子量IkDa的超滤膜超滤、脱盐，截留液进行浓缩、喷雾干燥，获牡蛎酶解物。水解牡蛎粉的 肽得率为92. 7%，羟自由基清除率为99. 8%。实施例6牡蛎组合酶解物的制备准确称取干燥的牡蛎粉，加水配成浓度2%水溶液，放入反应器中，52. 5°C水浴浸 泡30分钟，按每种酶与底物蛋白质量比为6000U/g底物蛋白的加酶量，同时加入中性蛋白 酶和复合风味酶，用磷酸缓冲液调节溶液pH至7. 0 ；置于恒温水浴锅中52. 5°C下酶解2小 时，酶解物煮沸10分钟灭酶活，6000r/min离心15分钟，上清液用截留分子量IkDa的超滤 膜超滤、脱盐，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
牡蛎酶解物的制备方法，其特征在于采用组合酶解工艺，包括以下步骤以牡蛎粉于水中配成蛋白质量分数为2％的水溶液，反应器中52.5℃ 55℃水浴浸泡30分钟，然后先后或同时加入组合蛋白酶进行水解；各蛋白酶的加酶量为6000 8000U/g底物蛋白，用磷酸缓冲液调节pH 6.0 7.0，反应温度为52.5 55℃的条件下水解2小时，煮沸10min灭酶；离心各酶解液，取上清液用截留分子量为1kDa的超滤膜超滤，截留...

【专利技术属性】
技术研发人员：董英，周越，孙芳芳，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：32