【技术实现步骤摘要】
本申请属于罕见病的靶向治疗研究领域，涉及用于治疗成骨不全症的重组基因表达载体、包含其的药物组合物及其用于治疗成骨不全症的用途。
技术介绍
1、成骨不全症(osteogenesis imperfecta，oi)是一种较常见的骨骼系统发育不良，主要表现为骨量降低、骨折及肢体残疾，并累及其他器官。
2、oi是一种先天性骨骼疾病，其主要遗传方式为常染色体显性遗传(autosomaldominant oi，ad-oi)，部分患者为常染色体隐性遗传(autosomal recessive oi，ar-oi)和x连锁隐性遗传(forlino等人，2011；marini等人，2017)。oi患者临床表现存在广泛异质性，重者肢体畸形、高度残疾，甚至在婴幼儿或胎儿期死亡(palomo等人，2017)。
3、oi的治疗在于促进骨骼生长、增加骨密度、减少骨折发生、矫正骨骼畸形、提高患者生活质量，增强患者独立运动和生活能力。oi临床治疗可分为以下四个方面：i型患者临床表现最轻，除骨密度低下，身体状况和正常人基本相近，通过药物增加骨密度，平时注意防护避免骨折即可；ii型患者多在胚胎期或围产期死亡，一般流产和死产，不需要治疗；iii型和iv型患者表型较严重，表现为中重度的骨骼畸形，现有oi治疗主要集中在这两种类型，以药物治疗和手术矫形为主(sillence等人，1979)。
4、目前临床上使用的oi治疗药物在不同基因变异oi患者中的疗效差异显著。这是因为非胶原基因致病的ar-oi与i型胶原变异致病的ad-oi发病机制不同。
5、目前针对oi治疗的研究主要集中在i型胶原编码基因突变相关的ad-oi上，包括细胞治疗、靶基因特异性沉默和基因编辑等的实验研究(chamberlain等人，2004；millington-ward等人，2005；panaroni等人，2009)；基因治疗研究尚处于患者体外细胞或动物模型研究阶段，目前尚无临床应用。在ar-oi的靶向基因治疗研究方面尚无报道。
6、xv型成骨不全症(以下简称oi15)由wnt1基因的纯合或杂合变异导致的严重oi表现，临床上缺乏有效治疗方法，严重影响患者生活质量。专利技术人开展了国际上单中心最大规模的oi致病基因研究，发现中国人ar-oi以wnt1纯合或复合杂合突变的oi15为主(li等人，2019)。wnt1是一种分泌型信号蛋白，是调节骨信号通路的重要因子，影响骨细胞活性(wang等人，2019)。通过与受体低密度脂蛋白受体-相关蛋白5/6(lrp5/6)和卷曲蛋白相互作用于成骨细胞前体细胞，介导β-catenin信号通路，刺激成骨细胞分化相关基因的转录，调控骨的形成。wnt1信号通路激活导致骨量和骨密度增加，相反wnt1信号通路失活则抑制骨的形成(rauch，2017)。
7、因此，本领域仍需要提供一种安全有效的oi治疗策略。
技术实现思路
1、鉴于上述需求，提供一种用于治疗成骨不全症的重组基因表达载体、包含其的药物组合物及其用途。
2、在本申请的第一方面，提供了一种用于治疗成骨不全症的重组基因表达载体。
3、在一个实施方案中，所述成骨不全症是wnt1突变导致的xv型成骨不全症。
4、在一个实施方案中，所述重组基因表达载体是raav载体。
5、在优选的实施方案中，所述raav选自以下任一项：aav1、aav2、aav2tyf、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aavrh10、aav.rh20、aav.rh39、aav.rh74、aav.rhm4-1、aav.hu37、aav.anc80、aav.anc80l65、raav.7m8、aav.php.b、aav.php.eb、aav2.5、aav2tyf、aav3b、aav.lk03、aav.hsc1、aav.hsc2、aav.hsc3、aav.hsc4、aav.hsc5、aav.hsc6、aav.hsc7、aav.hsc8、aav.hsc9、aav.hsc10、aav.hsc11、aav.hsc12、aav.hsc13、aav.hsc14、aav.hsc15和aav.hsc16。
6、在具体的实施方案中，所述raav是raav9。
7、在一个实施方案中，所述治疗基因是人的wnt1。
8、本申请还提供了一种药物组合物，其包含如先前所定义的重组基因表达载体，以及药学上可接受的载剂或赋形剂。
9、在本申请的另一方面，提供了试剂在制备用于治疗成骨不全症的药物中的用途，其中所述试剂是能够提高野生型wnt1含量的试剂。在一个实施方案中，所述试剂选自以下的任一项：wnt1前体蛋白或其编码核酸、wnt1成熟蛋白或其编码核酸、表达wnt1的载体、表达wnt1的重组病毒。
10、在一个实施方案中，所述成骨不全症是大鼠模型中的wnt1突变所致。人wnt1蛋白与大鼠wnt1蛋白高度同源，二者存在5个氨基酸(第9、20、27、40、263位)残基的差异(其中前四个差异出现在非功能区)。
11、人wnt1的cdna数据库登录号是nm_005430.3。人wnt1的数据库登录号为np_005421.1。大鼠wnt1的数据库登录号为np_001099184。尽管此处给出了具体的登录号所示的氨基酸序列，但是技术人员知晓，根据数据库或文献可以获得其他物种中同源wnt1的核苷酸和氨基酸信息。
12、在一个实施方案中，所述成骨不全症是wnt1突变导致的xv型成骨不全症。
13、在具体的实施方案中，所述病毒选自：腺相关病毒、腺病毒、慢病毒。在另一些实施方案中，所述试剂是如先前所定义的重组基因表达载体或药物组合物。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种重组基因表达载体，其中插入有或携带有人或非人动物WNT1的编码核酸；
2.根据权利要求1所述的重组基因表达载体，其中所述重组基因表达载体是重组腺相关病毒载体(rAAV)，其选自以下的任一项：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15和AAV.HSC16；
3.根据权利要求1所述的重组基因表达载体，其还包含选自以下的元
4.根据权利要求3所述的重组基因表达载体，所述WNT1的编码核酸插入EcoR I和Sal I酶切位点之间。
5.根据权利要求4所述的重组基因表达载体，其是SEQ ID No.8或9所示。
6.一种药物组合物，其包含：
7.权利要求1至5中任一项所述的重组基因表达载体在制备用于治疗成骨不全症的药物中的用途；优选地，所述成骨不全症是XV型成骨不全症。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述治疗体现为选自以下的任一项：
9.WNT1的靶向试剂在制备XV型成骨不全症的动物模型中的用途，其中：
10.一种构建XV型成骨不全症的动物模型的方法，包括步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种重组基因表达载体，其中插入有或携带有人或非人动物wnt1的编码核酸；
2.根据权利要求1所述的重组基因表达载体，其中所述重组基因表达载体是重组腺相关病毒载体(raav)，其选自以下的任一项：aav1、aav2、aav2tyf、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aavrh10、aav.rh20、aav.rh39、aav.rh74、aav.rhm4-1、aav.hu37、aav.anc80、aav.anc80l65、raav.7m8、aav.php.b、aav.php.eb、aav2.5、aav2tyf、aav3b、aav.lk03、aav.hsc1、aav.hsc2、aav.hsc3、aav.hsc4、aav.hsc5、aav.hsc6、aav.hsc7、aav.hsc8、aav.hsc9、aav.hsc10、aav.hsc11、a...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵秀丽，李闪，陈秀敏，韩明辰，曹一璇，杨涛，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。