【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药品分析检测，尤其涉及一种他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法。
技术介绍
1、本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、体外透皮试验时皮肤外用制剂的评价指标之一，是为了模拟外用药物在生理条件下的透皮过程，以部分地反映外用制剂的质量与临床治疗的有效性，是目前评价半固体制剂(如乳膏剂、软膏剂、凝胶剂等)剂型与处方的重要手段。体外透皮试验所用的离体皮肤一般为大鼠、小鼠或猪的腹部或背部皮肤，其中猪皮最为常用。
3、皮内滞留量是体外透皮试验需要考察的指标之一，为了测定药物在皮肤中的滞留量，需要将猪皮进行一定的处理，来将猪皮中滞留的药物提取出来以供测定。目前常规的猪皮处理方式有液氮捣碎、组织匀浆及离心等，这些方法首先需要将猪皮剪碎，然后进行研磨或者匀浆，进一步将猪皮打碎以提取猪皮中滞留的药物。
4、例如，专利cn 114965722a(公开日：2022.08.30)公开了一种他克莫司软膏透皮试验中他克莫司的皮内滞留量的前处理方法，包括如下步骤：将皮肤剪碎至西林瓶中，加入适量溶剂，用乳化均质机打碎，使皮肤全部呈松散絮状，将该混合溶液转移至离心管中，超声，离心，取上清液加溶剂定容，过滤，加入内标溶液混匀，得皮内滞留量待测溶液。该专利采用了乳化均质机，通过溶媒用量和破碎时间等参数，使破碎完全彻底。
5、然而，专利技术人发现，仅仅是将猪皮剪碎这一步就
6、目前常规的猪皮处理方法操作麻烦，流程需重复数次，耗时耗力。因此，使用一种不需购置液氮研磨器、匀浆机或乳化均质机，使用实验室常用设备就能完成的操作简单、省时省力同时具有优异提取回收率的他克莫司软膏透皮试验用猪皮处理方法，以提高试验效率，又快又好地完成皮内药物滞留量的检测，是亟待解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，该检测方法的样品前处理阶段无需将猪皮剪碎及进行更进一步的匀浆处理，通过对完整猪皮进行特定溶剂浸泡、超声提取，即可实现高药物回收率，设备要求低、检测速度快且检测结果准确，适合大批量样品的检测。
2、本专利技术提供了一种他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，包括如下步骤：
3、将进行完体外透皮试验的猪皮整体取出，除去猪皮表面粘附的药物，置于容器中；
4、向盛放猪皮的容器中加入正己烷，没过猪皮，浸泡20～40min；然后加入乙腈，在40～50℃下加热超声提取20～40min；正己烷与乙腈的体积比为1～3:1；
5、静置分层后取乙腈层，滤过，滤液通过高效液相色谱-质谱联用检测猪皮中的皮内药物滞留量。
6、本专利技术针对现有技术中测定他克莫司软膏透皮实验用猪皮中皮内药物滞留量时耗时长、设备要求高的问题，采用了正己烷浸泡以破坏猪皮皮肤屏障、超声加热及乙腈提取的方法，无需经过剪碎或离心等耗时较长的步骤，且无需使用研磨机、匀浆机或均质机等设备，设备要求低，并显著缩短了检测时间，且药物回收率高达98％以上。
7、优选的，用乙醇洗涤以除去猪皮表面粘附的药物。
8、优选的，所述猪皮和正己烷的体积比为1：3～5，所述浸泡的温度为20～30℃。
9、优选的，所述超声的频率为30～50khz；超声的功率为130～180w。
10、优选的，所述浸泡时间为30min，所述加热温度为45℃，所述超声提取的时间为30min，所述正己烷与乙腈的体积比为2:1。
11、优选的，所述滤过采用0.45μm滤膜。
12、优选的，所述液相色谱的流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为含0.2％甲酸的10mmol/l乙酸铵溶液，流动相b为乙腈。
13、进一步的，所述液相色谱的洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～0.5min，50％a，50％b；0.5～1.5min，15％a，85％b；1.5～3min，5％a，95％b；3～5min，50％a，50％b。
14、优选的，所述液相色谱的色谱柱为agilent sb-c18(2.1*50mm，1.8μm)；柱温为60～70℃；流速为0.3～0.8ml/min；进样体积为2～8μl。
15、优选的，所述质谱条件为：离子源为apci源；离子极性为正离子模式；鞘气为45～60；辅助气为8～16；离子传输管温度为340～360℃；蒸发温度为390～410℃；扫描模式为srm：821.588→768.571、碰撞能19.7；821.588→786.583、碰撞能15.78。
16、进一步的，所述鞘气为55；辅助气为12；离子传输管温度为350℃；蒸发温度为400℃。
17、与现有技术相比，本专利技术取得了以下有益效果：
18、(1)本专利技术优化了他克莫司软膏透皮试验用猪皮的处理方法，无需将猪皮剪碎或进行均质、匀浆、研磨等处理，仅通过正己烷浸泡以破坏皮肤屏障，在加热超声条件下能达到提取完全的效果，回收率高达98％以上，最高可达99.64％，操作简单，省时省力，设备要求低，因此具有更低的检测成本；
19、(2)本专利技术的检测方法具有良好的精密度，重复性高，结果稳定、准确，检测限低，灵敏度高，适合大批量样品的检测。
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1.一种他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，用乙醇洗涤以除去猪皮表面粘附的药物。
3.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述猪皮和正己烷的体积比为1：3～5，所述浸泡的温度为20～30℃。
4.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述超声的频率为30～50kHz；超声的功率为130～180W。
5.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述浸泡时间为30min，所述加热温度为45℃，所述超声提取的时间为30min，所述正己烷与乙腈的体积比为2:1；所述滤过采用0.45μm滤膜。
6.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述液相色谱的流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为含0.2％甲酸的10mmol/L乙酸铵溶液
7.如权利要求6所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述液相色谱的洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～0.5min，50％A，50％B；0.5～1.5min，15％A，85％B；1.5～3min，5％A，95％B；3～5min，50％A，50％B。
8.如权利要求6所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述液相色谱的色谱柱为Agilent SB-C18(2.1*50mm，1.8μm)；柱温为60～70℃；流速为0.3～0.8mL/min；进样体积为2～8μL。
9.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述质谱条件为：离子源为APCI源；离子极性为正离子模式；鞘气为45～60；辅助气为8～16；离子传输管温度为340～360℃；蒸发温度为390～410℃；扫描模式为SRM：821.588→768.571、碰撞能19.7；821.588→786.583、碰撞能15.78。
10.如权利要求9所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述鞘气为55；辅助气为12；离子传输管温度为350℃；蒸发温度为400℃。
...【技术特征摘要】
1.一种他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，用乙醇洗涤以除去猪皮表面粘附的药物。
3.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述猪皮和正己烷的体积比为1：3～5，所述浸泡的温度为20～30℃。
4.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述超声的频率为30～50khz；超声的功率为130～180w。
5.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述浸泡时间为30min，所述加热温度为45℃，所述超声提取的时间为30min，所述正己烷与乙腈的体积比为2:1；所述滤过采用0.45μm滤膜。
6.如权利要求1所述的他克莫司软膏透皮试验用猪皮的皮内药物滞留量检测方法，其特征在于，所述液相色谱的流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为含0.2％甲酸的10mmol/l乙酸铵溶液，流动相b为乙腈。
7.如权利要求6所述的他克莫司软膏透...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘燕，段连帅，廖俊，
申请(专利权)人：山东创新药物研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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