【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及pet探针，尤其涉及预靶向肿瘤免疫探针、生物正交制剂、试剂盒及应用。
技术介绍
1、肿瘤免疫治疗是目前最有前景的肿瘤治疗方案之一，与传统化学治疗的作用机制不同，免疫治疗作用于人体的免疫系统，诱导调节机体对肿瘤的免疫应答，监控并杀伤肿瘤细胞。肿瘤组织微环境中程序性死亡因子1（programmed cell death-1，pd-1）及其配体（programmed cell death ligand-1，pd-l1）结合形成的免疫检查点可抑制肿瘤免疫应答和产生免疫耐受，促使肿瘤发生免疫逃逸。因此阻断pd-1/pd-l1信号通路可以活化效应t细胞和抑制肿瘤免疫逃逸，从而增强机体抗肿瘤免疫应答。pd-1/pd-l1免疫检查点抑制剂已应用于多种类型肿瘤治疗，但由于pd-1/pd-l1的表达水平存在个体差异，pd-1/pd-l1免疫检查点抑制剂仅对10~30%的实体瘤患者有效。因此对患者肿瘤微环境中pd-1/pd-l1表达水平的评估具有重要临床意义，可对肿瘤患者免疫治疗响应进行预测，作为患者是否适合pd-1/pd-l1免疫治疗的筛选手段。
2、目前对pd-1/pd-l1表达水平的评估尚无标准检测手段，主要是通过免疫组化检验、循环肿瘤细胞或相关生物标志物血检等侵入性方法。由于肿瘤异质性及pd-1/pd-l1表达水平的定量难以标准化等因素，现阶段pd-1/pd-l1的评估往往需要结合多种检测手段，才可以实现全面动态监测。而目前基于组织活检的疗效预测手段存在预测准确性差、侵入性强、无法多次取样等问题。免疫pet技术将pe
3、生物正交化学（bioorthogonal chemistry）体系广泛应用于蛋白质标记和分子影像等领域，具有快速、高选择性和高亲和力等优点，能够在活体细胞发生并且不影响生物体自身生物化学过程，已经成为预靶向显像的重要手段。生物正交化学体系的建立是将可以进行特异性结合的两个功能分子通过化学修饰的手段分别标记在功能性生物大分子（蛋白、抗体、纳米粒子等）和报告分子（荧光基团、放射性核素等）上，然后利用标记报告分子的特征（荧光、放射性等）监测被标记功能性生物大分子在细胞或活体内的实时状态。基于生物正交化学的免疫pet影像技术的研究受到广泛关注，短半衰期核素如f-18、ga-68、cu-64等标记的基于生物正交化学的预靶向免疫pet影像探针，可以实现对抗体的体内标记和实时的功能监测，且对生物体产生的辐射损伤明显低于长半衰期核素直接标记抗体的pet探针。
4、目前生物正交化学反应体系主要有无催化剂的四嗪（tetrazine）-桥环烯烃的逆电子需求的狄尔斯-阿尔德反应（inverse electron demand diels-alder reaction，ied-dar）、金属催化的叠氮-炔键点击化学体系等，其中基于四嗪和反式环辛烯（tco）的ied-dar反应是当前应用较为广泛的一种生物正交化学反应。然而反式环辛烯立体构象不稳定，会影响与四嗪在体内的结合效果，且目前将生物正交化学反应体系进行预靶向免疫pet显像进而用于评估肿瘤中pd-1/pd-l1表达水平的研究尚未见报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供预靶向肿瘤免疫探针、生物正交制剂、试剂盒及应用，本专利技术提供的预靶向肿瘤免疫探针可以基于四嗪-瑞珀酸酐生物正交反应体系构建pd-1/pd-l1靶向的pet探针，可实现肿瘤的特异性显像，同时可评估肿瘤中pd-1/pd-l1表达水平。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种预靶向肿瘤免疫探针，为标记有放射性核素的nota-瑞珀酸酐，所述nota-瑞珀酸酐具有式i所示结构：
4、式i。
5、本专利技术提供了一种生物正交制剂，包括分装的单抗-四嗪偶联物与pet显像探针；所述单抗-四嗪偶联物中单抗为pd-1单克隆抗体抑制剂或pd-l1单克隆抗体抑制剂；所述pet显像探针为标记有放射性核素的nota-瑞珀酸酐，所述nota-瑞珀酸酐具有式ii所示结构：
6、式ii；
7、式ii中r为，n=0~4。
8、优选地，所述pd-1单克隆抗体抑制剂为纳武利尤单抗或帕博利珠单抗。
9、优选地，所述pd-l1单克隆抗体抑制剂为阿特珠单抗或德瓦鲁单抗。
10、优选地，所述放射性核素包括18f、68ga或64cu。
11、本专利技术提供了上述技术方案所述预靶向肿瘤免疫探针或上述技术方案所述生物正交制剂在制备肿瘤微环境中pd-1或pd-l1表达水平检测试剂中的应用。
12、本专利技术提供了上述技术方案所述预靶向肿瘤免疫探针或上述技术方案所述生物正交制剂在制备用于检测肿瘤微环境中pd-1或pd-l1表达水平的pet显像剂中的应用。
13、优选地，所述肿瘤包括人脑胶质瘤、结直肠癌、卵巢癌或非小细胞肺癌。
14、本专利技术提供了一种检测肿瘤微环境中pd-1或pd-l1表达水平的试剂盒，包括分装的单抗-四嗪偶联物与pet显像探针；所述单抗-四嗪偶联物中单抗为pd-1单克隆抗体抑制剂或pd-l1单克隆抗体抑制剂；所述pet显像探针为标记有放射性核素的nota-瑞珀酸酐，所述nota-瑞珀酸酐具有式ii所示结构：
15、式ii；
16、式ii中r为，n=0~4。
17、优选地，所述单抗-四嗪偶联物的给药剂量为0.5~2mg/kg，所述pet显像探针的给药剂量为37~74mbq/kg。
18、有益效果：本专利技术提供的预靶向肿瘤免疫探针可以基于四嗪-瑞珀酸酐生物正交反应体系构建pd-1/pd-l1靶向的pet探针，可实现肿瘤的特异性显像，同时可评估肿瘤中pd-1/pd-l1表达水平。具体来说，瑞珀酸酐作为一种新型桥环烯烃，相比较四嗪-环辛烯生物正交反应体系，瑞珀酸酐具有更高的立体构象稳定性，与四嗪具有更高的反应速率，是更为理想的构建生物正交化学反应的功能分子。其中引入长链peg（n=4）的探针可实现更长的体内循环半衰期，同时减少与本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种预靶向肿瘤免疫探针，其特征在于，为标记有放射性核素的NOTA-瑞珀酸酐，所述NOTA-瑞珀酸酐具有式I所示结构：
2.一种生物正交制剂，其特征在于，包括分装的单抗-四嗪偶联物与PET显像探针；所述单抗-四嗪偶联物中单抗为PD-1单克隆抗体抑制剂或PD-L1单克隆抗体抑制剂；所述PET显像探针为标记有放射性核素的NOTA-瑞珀酸酐，所述NOTA-瑞珀酸酐具有式II所示结构：
3.根据权利要求2所述的生物正交制剂，其特征在于，所述PD-1单克隆抗体抑制剂为纳武利尤单抗或帕博利珠单抗。
4.根据权利要求2所述的生物正交制剂，其特征在于，所述PD-L1单克隆抗体抑制剂为阿特珠单抗或德瓦鲁单抗。
5.根据权利要求2~4任一项所述的生物正交制剂，其特征在于，所述放射性核素包括18F、68Ga或64Cu。
6.权利要求1所述预靶向肿瘤免疫探针或权利要求2~5任一项所述生物正交制剂在制备肿瘤微环境中PD-1或PD-L1表达水平检测试剂中的应用。
7.权利要求1所述预靶向肿瘤免疫探针或权利要求2~5任一项所述生物正交制
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括人脑胶质瘤、结直肠癌、卵巢癌或非小细胞肺癌。
9.一种检测肿瘤微环境中PD-1或PD-L1表达水平的试剂盒，其特征在于，包括分装的单抗-四嗪偶联物与PET显像探针；所述单抗-四嗪偶联物中单抗为PD-1单克隆抗体抑制剂或PD-L1单克隆抗体抑制剂；所述PET显像探针为标记有放射性核素的NOTA-瑞珀酸酐，所述NOTA-瑞珀酸酐具有式II所示结构：
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述单抗-四嗪偶联物的给药剂量为0.5~2mg/kg，所述PET显像探针的给药剂量为37~74MBq/kg。
...【技术特征摘要】
1.一种预靶向肿瘤免疫探针，其特征在于，为标记有放射性核素的nota-瑞珀酸酐，所述nota-瑞珀酸酐具有式i所示结构：
2.一种生物正交制剂，其特征在于，包括分装的单抗-四嗪偶联物与pet显像探针；所述单抗-四嗪偶联物中单抗为pd-1单克隆抗体抑制剂或pd-l1单克隆抗体抑制剂；所述pet显像探针为标记有放射性核素的nota-瑞珀酸酐，所述nota-瑞珀酸酐具有式ii所示结构：
3.根据权利要求2所述的生物正交制剂，其特征在于，所述pd-1单克隆抗体抑制剂为纳武利尤单抗或帕博利珠单抗。
4.根据权利要求2所述的生物正交制剂，其特征在于，所述pd-l1单克隆抗体抑制剂为阿特珠单抗或德瓦鲁单抗。
5.根据权利要求2~4任一项所述的生物正交制剂，其特征在于，所述放射性核素包括18f、68ga或64cu。
6.权利要求1所述预靶向肿瘤免疫探针或权利要求2~5任一项所述生物...
【专利技术属性】
技术研发人员：史旭东，汤懿斯，高苒，朱瑞敏，马铖延，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学实验动物研究所，
类型：发明
国别省市：
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