提高粘红酵母对水果采后病害生物防治效力的方法技术

本发明专利技术公开了提高粘红酵母对水果采后病害生物防治效力的方法。将粘红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ?ｇｌｕｔｉｎｉｓ）活化，接种到添加有０．０１％－１％壳聚糖的ＮＹＤＢ（酵母膏５ｇ，牛肉浸膏８ｇ，葡萄糖１０ｇ，纯化水１０００ｍｌ，ｐＨ自然）培养基中进行诱导培养，离心得到菌体；将菌体用无菌水稀释制备成１×１０６个／ｍＬ－１×１０９个／ｍＬ的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡３０ｓ后马上取出，自然风干；放在塑料筐中，用保鲜膜密封后，放在室温或冷藏条件下存放。本发明专利技术使用壳聚糖诱导培养后的粘红酵母可以代替化学杀菌剂防治水果采后病害，避免使用化学杀菌剂对人的危害，具有显著的经济效益和社会效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种粘红酵母菌种(Rhodotorula glutinis)以及利用壳聚糖(chitosan)诱导培养提高该菌种对水果采后病害防治效力的方法。
技术介绍
水果在采摘、运销、储藏过程中因腐烂造成的损失是巨大的，已成为全球关注的问题。据报道，发达国家由此造成的损失为10％-25％，而在缺乏冷藏设施的发展中国家则高达40％-50％，我国水果采后损失为20％-25％左右。2007年3月国家统计局发布的《中华人民共和国2006年国民经济和社会发展统计公报》显示，2006年我国水果总产量达17050万吨。据此估算，我国水果采后的损失每年将达到数百亿元人民币的水平。病原微生物侵染造成的腐烂是水果采后损失的主要原因，这些病原微生物主要有灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、葡枝根霉(Rhizopus stoloniger)、青霉(Penicillium spp.)、毛霉(Mucor spp.)、链格孢(Alternaria spp.)和曲霉(Aspergillus spp.)等。病原微生物对采后水果的危害不仅在于其导致水果在数量上造成的严重损失，而且由于许多病原真菌能分泌产生许多次生代谢产物从而引起严重的食品安全问题，如扩展青霉(P.expansum)产生的棒曲霉素(patulin)、灰葡萄孢(B.cinerea)产生的葡双醛霉素(botrydial)等。目前最常用的控制水果采后腐烂的方法是低温贮藏和化学杀菌剂处理。近年来低温贮藏技术在我国得到了广泛的发展和应用，但已有的冷藏设备往往不能满足大多数水果的需要。同时，在低温条件下仍有相当数量的致病菌能够在水果上生长，并造成水果腐烂。而那些对低温敏感的水果只能在不低于使产品受冷害的温度下贮藏。长期以来，控制水果采后病害的主要措施是使用杀菌剂。化学杀菌剂对防治病害可以起到立竿见影的效果，但是，长期和大量的使用，不仅导致病原微生物产生抗药性，同时严重污染环境，有损于人类健康。美国国家科学院(National Academy of Scinces)的一份报告显示，在用于处理食品的全部农药中，杀菌剂构成60％的致瘤危险。随着国家经济发展和消费水平的提高，人们对食品安全和环境保护意识的日益增强，目前多种化学杀菌剂(如Captan、Benomyl等)已被明令禁止使用或者在部分水果产品上限制使用，其直接的后果是目前许多水果采后病害已经没有杀菌剂能予以控制。因此，各国科学家都在积极地探索能代替化学杀菌剂的安全、高效的新型水果采后病害防治方法。当前国际上对用拮抗微生物进行水果采后病害的生物防治的研究已经取得了阶段性的成果，并认为这是最有希望取代化学杀菌剂的方法之一。随着酵母分类、生态、生理、生物化学和分子生物学的研究取得进展，人们对果蔬贮藏中利用酵母的兴趣日益提高。国内外的研究表明，许多酵母菌应用于水果表面，可以防治水果由致病霉菌引起的病害，这些酵母被称为拮抗酵母。酵母菌遗传稳定，抑菌谱广、效价高，一般不产生对人和寄主植物有害的代谢产物，安全性高，且对营养要求低，生长快，并对多种胁迫、逆境具有较强的耐受力，对大多数杀菌剂不敏感，对其它化学和物理处理能够-->相容。因此近年来拮抗酵母作为水果采后病害生防菌，受到国际上的广泛关注。其中粘红酵母已被证明能有效控制水果采后病害。国外方面，Sansone等从苹果表面分离得到的粘红酵母对由Botrytis cinerea引起的灰霉病有显著的防治效果，在实验室条件下，其腐烂率与对照相比降低了54％。Calvente等的研究也发现粘红酵母对水果采后青霉病害有显著的抑制效果。国内方面，郑晓冬等在体外和体内抑菌试验中研究了粘红酵母对由指状青霉引起的柑桔青霉腐烂的抑制效果，发现粘红酵母在控制由指状青霉引起的柑桔腐烂中显示出了很高的抑菌活性，在25℃条件下，对照的发病率为100％，而使用1×108个/mL的菌悬液的发病率仅为45％，而且随着酵母浓度的提高，发病率也有逐渐下降的趋势。张红印等研究了粘红酵母对草莓采后灰霉病的抑制效果，对草莓进行了前期的预处理后，接种1×109个/mL的菌悬液和1×105个/mL的病原菌孢子菌悬液分别在4℃下贮藏7d和20℃下贮藏2d后，发现接种粘红酵母的草莓，其腐烂率与对照相比分别降低了95％和94.7％，。然而大量的研究也表明，粘红酵母对果实病害的防治效力与化学杀菌剂相比仍有较大的差距。因此进一步提高粘红酵母的拮抗效力，是提高其对水果采后病害控制水平，并将其应用于水果贮藏保鲜的重要策略之一。壳聚糖是β-(1，4)-葡糖胺的多聚体，是几丁质脱乙酰产物。作为一种可生物降解的天然物质，壳聚糖不仅资源丰富，而且价格低廉、无毒安全。因其具有众多独特的生物学特性，在食品和水果采后保鲜等领域都有着广泛的研究和应用。在水果采后保鲜领域，壳聚糖被作为理想的水果涂层，用来延缓果实成熟衰老，维持水果采后品质。研究表明壳聚糖对多种病原菌有直接的拮抗活性，如，桃果实的Monilinia fructicola、葡萄果实的B.cinerea、柑橘果实的P.digitatum和P.italicum。近年来，如何将壳聚糖与其它安全的非杀菌剂方法有效整合，以获得对水果采后真菌病害更高水平的控制，已成为国际上非常受关注的一个研究热点。El-Ghaouth等(2000)报道，采后拮抗酵母Candida saitoana与壳聚糖衍生物联合处理能对苹果青霉病和灰霉病及柑橘绿霉病产生协同增效的控制效果。Yu等(2007)也报道拮抗酵母C.laurentii与壳聚糖联合处理能对苹果青霉病产生协同增效的控制效应。但国内外对壳聚糖培养能否影响采后拮抗酵母生物防治效力尚无相关报道。
技术实现思路
本专利技术为了克服上述现有技术中的不足，在培养基中添加不同浓度的壳聚糖，对粘红酵母进行诱导培养，提供了一种提高粘红酵母生物防治效力的方法。经壳聚糖诱导培养的粘红酵母，可以明显地抑制水果病原菌，防止水果采后腐烂。本专利技术具有安全、高效、成本低等优点，可以广泛地用于水果采后病害的生物防治过程中，减少水果采后病害造成的损失。本专利技术同时提供了一种利用壳聚糖诱导培养粘红酵母，进行水果采后病害防治及贮藏保鲜的方法。步骤如下：将粘红酵母活化，接种到添加有以质量计为0.01％-1％壳聚糖的NYDB(酵母膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，纯化水1000ml，pH自然)培养基中进行诱导培养，离心得到菌体；将菌体用无菌水稀释制备成1×106个/mL-1×109个/mL的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡30s后马上取出，自然风干；放在塑料筐中，用保鲜膜密封后，放在室温或冷藏条件下存放。-->本专利技术利用壳聚糖诱导培养粘红酵母进行水果采后病害防治及贮藏保鲜的方法。适合于梨果、桃果、草莓、苹果的采后病害防治及贮藏保鲜通过借助以下实施实例将更加详细的说明本专利技术。以下实施例仅是说明性的，本专利技术并不受这些实施实例的限制。附图说明图1为不同浓度壳聚糖诱导后的粘红酵母对草莓灰霉病的抑制效果，注：CK：对照；0：NYDB；0.01-1：添加0.01％-1％壳聚糖的培养基。发病率及病斑直径是20℃放置3d后测定的结果。不同字母代表差异显著性(p＝0.05)。图2不同浓度壳聚糖诱导后的粘红酵母对草莓根霉本文档来自技高网...

【技术保护点】
提高粘红酵母对水果采后病害生物防治效力的方法，其特征在于步骤如下：将粘红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｌｕｔｉｎｉｓ）活化，接种到添加有以质量计０．０１％－１％壳聚糖的ＮＹＤＢ培养基中进行诱导培养，离心得到菌体；将菌体用无菌水稀释制备成１×１０↑［６］个／ｍＬ－１×１０↑［９］个／ｍＬ的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡３０ｓ后马上取出，自然风干；放在塑料筐中，用保鲜膜密封后，放在室温或冷藏条件下存放。

【技术特征摘要】
1.提高粘红酵母对水果采后病害生物防治效力的方法，其特征在于步骤如下：将粘红酵母(Rhodotorula glutinis)活化，接种到添加有以质量计0.01％-1％壳聚糖的NYDB培养基中进行诱导培养，离心得到菌体；将菌体用无菌水稀释制备成1×106个/mL-1×109个/mL的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡30s后马上取出，自然风干；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张红印，葛玲玲，陈克平，任晓锋，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]