海洋酵母Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ　ｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍ　Ｆｅｌｌ＆Ｔａｌｌｍａｎ的真空冷冻干燥制品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种海洋酵母Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ?ｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍ?Ｆｅｌｌ＆Ｔａｌｌｍａｎ的真空冷冻干燥制品的制备方法。按１％～５％的接种量将海洋酵母Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ?ｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍ?Ｆｅｌｌ＆Ｔａｌｌｍａｎ接种于酵母培养基中，在２０～３０℃，１００～３００转／分钟培养２０～５０小时，通过离心收集海洋酵母Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ?ｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍ?Ｆｅｌｌ＆Ｔａｌｌｍａｎ菌体，弃去上清液，用无菌水洗涤２～３次，用血球计数法计数，并用保护剂调整成１×１０９～１×１０１１ｃｅｌｌｓ／ｍｌ细胞悬浮液，将细胞悬浮液孵育０．５－３小时，再进行真空冷冻干燥，得到真空冷冻干燥制品；真空度为０．００５～０．０１ｍｂａｒ，干燥温度为－５５～－６５℃，干燥时间１２～３６小时。本发明专利技术制备的真空冷冻干燥制品，可以保持Ｒ．ｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍ的存活率≥８０％。本发明专利技术生产工艺简单，无污染、安全性高，能明显降低果蔬病害，将在多种果蔬的采后贮藏保鲜以及涉及Ｒ．ｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍ的产品开发中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种海洋酵母Rhodosporidiumpaludigenum Fell & Tallman 的真空 冷冻干燥制品的制备方法。
技术介绍
中国不仅是世界果蔬生产大国，也是农药生产和使用大国。长期频繁、过量的使用 化学杀真菌剂，会严重破坏土壤的微生物环境、污染空气和水质、增强病虫害抗性，从而影 响农业的出口创汇，危害了民众的身体健康，严重制约我国农业的可持续发展。随着食品安 全观念的日益深入人心，越来越多的化学杀菌剂被限制使用。发展更多高效低价、安全无毒 的生物保鲜剂成为当务之急。发达国家目前最常用的非化学保鲜手段是冷链技术。中国地区发展不平衡，冷链 技术对设备、成本都有较高的要求，短时间内在全国普及具有较大难度。拮抗酵母不产生抗 生素，不需要购置特殊设备、操作简便，利于推广应用，是最有潜力替代化学杀菌剂的果蔬 贮藏保鲜方法之一 。已有的研究结果显示，拮抗菌的主要作用机理是细胞与病原菌之间营养和空间的 竞争，拮抗菌的防治效果取决于细胞的使用浓度和生长活性。生物保鲜已经在实验室积 累了很多成功的经验，但是商业化的生防制剂包含了生产、包装、运输、销售和最终在不同 果实上使用等诸多环节。因此，生防菌要真正实现产业化，必须形式适合商品销售的产品形 式。真空冷冻干燥具有很多优点，比如干燥过程中的微生物细胞收缩小，产品溶解性 高和复水后活性强等，较为适合用于制备活性拮抗酵母干粉。微生物在冻干过程中的存 活力受到多种因素的影响，包括起始浓度、保护剂的种类和浓度。此外，冻干的起始浓 度对微生物存活力和生产成本也有很大的影响。研究表明，海洋酵母Rhodosporidium paludigenum对多种果实采后真菌病害具有 显著的抑制效果。考虑到海洋酵母在逆境适应性方面的优势，R. paludigenum极具市场 开发应用的潜力。目前，国内外还没有关于海洋酵母R. paludigenum真空冷冻干燥活性干 粉的报道。参考文献Droby, S. ， ffisniewski, Μ. E. ， Macarisin, D. ， Wilson, C. ,2009. Twenty years ofpostharvest biocontrol research Is it time for a new paradigm ？ PostharvestBiology and Technolpgy 52 :137—145.Janisiewicz, W. J. , Korsten L. ,2002. Biological control of postharvest diseases offruits. Annual Review of Phytopathology 52:4406-4413.Powell, K.A. ,1992. Biocontrol product fermentation, formulation and marketing. In Biological Control of Plant Diseases ed. Tjamos,E. S. pp. 381-387. NewYork :Plenum Press.Bozoglu, T. F. , Ozilgen, Μ. , Bakir, U. , 1987. Survival kinetics of lactic acidstarter cultures during and after freeze drying. Enzyme Microbial Technology 9，531-537.Sinha, R. N. , Shukla, A. K. , Madan Lal and R anganathan, B. , 1982. Rehydrationof freeze—dried cultures of lactic streptococci. Jounal of Food Science 47,668-669.Palmfeldt, J. , Radstrom, P. , Hahn-HSgerdal, B.，2003. Optimisation of initial eel!concentration enhances freeze—drying tolerance of Pseudomonas chlororaphis. Cryobiology 47,21-29. Wang, Y. F.，Bao, Y. H.，Shen, D. H.，Feng, W.，Yu, Τ.，Zhang, J.，Zheng X. D.，2008.Biocontrol of Alternaria alternata on Cherry Tomato Fruit by Use ofmarine yeast Rhodosporidium paludigenum Fell & Tallman, International Journalof Food Microbiology 123,234-239.Wang, Y. F. ， Yu, Τ. , Li, Y. C. ， Cai, D. G, Liu, X. ， Lu, H. P. ， Zheng, X. D.，2009.Postharvestbiocontrol of Alternaria alternata in Chinese winter jujube byRhodosporidium paludigenum. Journal of Applied Microbiology 107,1492-1498.
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种海洋酵母Rhodosporidium paludigenum Fell &Tallman的真空冷冻干燥制品的制备方法。海洋酵母Rhodosporidium paludigenum Fell & Tallman 的真空冷冻干燥制品 的制备方法是按 5%的接种量将海洋酵母Rhodosporidium paludigenumFell & Tallman接种于酵母培养基中，在20 30°C，100 300转/分钟培养20 50小时，通过 离心收集海洋酵母Rhodosporidium paludigenum Fell & TalIman菌体，弃去上清液，用无 菌水洗涤2 3次，用血球计数法计数，并用保护剂调整成1 X IO9 1 X 10ncells/ml细胞 悬浮液，将细胞悬浮液孵育0. 5-3小时，再进行真空冷冻干燥，得到真空冷冻干燥制品；真 空度为0. 005 0. Olmbar，干燥温度为-55 _65°C，干燥时间12 36小时。所述海洋酵母Rhodosporidiumpaludigenum Fell & TalIman在英国国际真菌研 究所(International Mycological Institute)国际农业与生物中心基因资源保藏中心 (CABI Genetic Resource Collection)保藏，保藏号为 IMI 394084。所述酵母培养基的组成为牛肉膏5 10g/L、酵母粉3 6g/L、葡萄糖8 12g/ L，氯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋酵母ＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍＦｅｌｌ＆Ｔａｌｌｍａｎ的真空冷冻干燥制品的制备方法，其特征在于按１％～５％的接种量将海洋酵母ＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍＦｅｌｌ＆Ｔａｌｌｍａｎ接种于酵母培养基中，在２０～３０℃，１００～３００转／分钟培养２０～５０小时，通过离心收集海洋酵母ＲｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｌｕｄｉｇｅｎｕｍＦｅｌｌ＆Ｔａｌｌｍａｎ菌体，弃去上清液，用无菌水洗涤２～３次，用血球计数法计数，并用保护剂调整成１×１０↑［９］～１×１０↑［１１］ｃｅｌｌｓ／ｍｌ细胞悬浮液，将细胞悬浮液孵育０．５－３小时，再进行真空冷冻干燥，得到真空冷冻干燥制品；真空度为０．００５～０．０１ｍｂａｒ，干燥温度为－５５～－６５℃，干燥时间１２～３６小时。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓冬，王一非，唐飞，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]