【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种啶酰菌胺半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用技术，具体涉及一种啶酰菌胺人工抗原分子结构以及用于检测啶酰菌胺的酶联免疫试剂盒，可定性、定量检测韭菜、黄瓜、葡萄、杧果等蔬菜水果中啶酰菌胺药物的残留量。
技术介绍
1、啶酰菌胺是由德国巴斯夫公司开发的新型烟酰胺类杀菌剂，化学名为2-氯-n-(4'-氯二苯-2-基)烟酰胺，主要用于防治白粉病、灰霉病、各种腐烂病、褐腐病和根腐病等，杀菌谱较广，几乎对所有类型的真菌病害都有活性，并且对其他药剂的抗性菌亦有效，主要用于包括油菜、葡萄、果树、蔬菜和大田作物等病害的防治。该药物已于2004年在英国、德国和瑞士登记。
2、啶酰菌胺会给人类健康造成严重的危害，因此，为保证消费者利益和动物源性食品的安全，一些国家和地区规定了啶酰菌胺的最大残留限量(mrls)，gb 2763-2021食品安全国家标准《食品中农药最大残留限量》规定：生乳中啶酰菌胺的最大残留限量为0.1mg/kg，蔬菜、水果中啶酰菌胺的最大残留限量范围为0.1mg/kg-50mg/kg。我国也制定了相应的国家标准用于检测食品中啶酰菌胺的残留量。我国gb 23200.68-2016食品安全国家标准《食品中啶酰菌胺残留量的测定气相色谱-质谱法》对菠菜、胡萝卜、草莓、花生、板栗、茶叶、葱、鸡肉、鳕鱼和蜂蜜中啶酰菌胺的定量限为0.01mg/kg。gb/t 22979-2008《牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的测定气相色谱-质谱法》对牛奶中啶酰菌胺的检出限为0.01mg/kg，对奶粉中啶酰菌胺的检出限为0.08mg/kg
3、检测啶酰菌胺的方法有气相色谱-质谱法、高效液相色谱法、超高效液相色谱-质谱/质谱法等。与上述方法相比，免疫化学检测法对药物检测具有快速、特异、灵敏、准确、可以批量监测、样品处理简单、能实现自动化操作等优点。而免疫化学法检测啶酰菌胺的前提是需要具备针对啶酰菌胺的抗体，本申请专利技术了啶酰菌胺人工抗原制备方法，并将其应用于酶联免疫试剂盒中，用时短，操作简单，成本较低，适用于基层单位大批量地检测样品。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种能够检测蔬菜水果(韭菜、黄瓜、葡萄、杧果)中啶酰菌胺药物残留量的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法。
2、本专利技术试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、啶酰菌胺标准品溶液、啶酰菌胺抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原为啶酰菌胺偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的啶酰菌胺抗体。
3、所述啶酰菌胺特异性抗体是以一种啶酰菌胺人工抗原作为免疫原制备获得，所述啶酰菌胺特异性抗体为啶酰菌胺单克隆抗体或啶酰菌胺多克隆抗体。
4、所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶结合物是由酶和啶酰菌胺抗体偶联得到的。
5、为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括啶酰菌胺标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液。
6、所述啶酰菌胺标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/l，0.2μg/l，0.6μg/l，1.8μg/l，5.4μg/l，16.2μg/l。
7、当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液a液和底物液b液组成，a为过氧化氢或过氧化脲，b液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/l的硫酸溶液或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1～2mol/l氢氧化钠溶液。
8、所述洗涤液优选为ph值为7.4，含有0.5％～1.0％吐温-20、0.01‰～0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1～0.3mol/l的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
9、其中在酶标板制备过程中所用到的包被缓冲液为ph值为9.6，0.05mol/l的碳酸盐缓冲液，封闭液为ph值为7.1～7.5，含有1％～3％酪蛋白、0.1～0.3mol/l的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
10、本专利技术中酶标板的制备过程为：用包被缓冲液将包被原稀释成30μg/ml，每孔加入100μl，25℃避光孵育2h或4℃过夜，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤2次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入150～200μl封闭液，25℃避光孵育1～2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。
11、本专利技术的检测原理为：
12、本试剂盒采用elisa方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的啶酰菌胺和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗啶酰菌胺的酶结合物，用tmb底物显色，样本吸光度值与其所含残留物啶酰菌胺的含量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中啶酰菌胺的残留量。
13、本专利技术还提供了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测啶酰菌胺的方法，它包括步骤：
14、(1)用试剂盒进行检测；
15、(2)分析检测结果。
16、本专利技术检测啶酰菌胺的酶联免疫试剂盒主要采用elisa方法定性或定量检测样品中啶酰菌胺的含量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批量样品；主要试剂以工作液的形式提供，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点。本专利技术的酶联免疫试剂盒，结构简单、使用方便、价格便宜、携带便利、检测方法高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量。
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1.一种蔬菜水果中啶酰菌胺检测用半抗原，其特征在于，结构式如下：
2.一种含如权利要求1中所述蔬菜水果中啶酰菌胺检测用半抗原的酶联免疫试剂盒。
3.根据权利要求2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括：包被有包被原的酶标板、啶酰菌胺标准品溶液、啶酰菌胺抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液。
4.根据权利要求3所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述包被原为啶酰菌胺偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的啶酰菌胺抗体，所述啶酰菌胺抗体是由免疫原免疫动物得到的，所述啶酰菌胺偶联抗原是由啶酰菌胺半抗原与载体蛋白偶联得到，所述啶酰菌胺半抗原是由4'-氯-2-氨基联苯与2-氯-5-醛基-烟酰氯经过一系列化学反应得到的。
5.根据权利要求3所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述免疫原的制备方法如下：
6.一种检测样品中啶酰菌胺含量的方法，包括步骤：
【技术特征摘要】
1.一种蔬菜水果中啶酰菌胺检测用半抗原，其特征在于，结构式如下：
2.一种含如权利要求1中所述蔬菜水果中啶酰菌胺检测用半抗原的酶联免疫试剂盒。
3.根据权利要求2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括：包被有包被原的酶标板、啶酰菌胺标准品溶液、啶酰菌胺抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液。
4.根据权利要求3所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：万宇平，惠光朋，吴广，王蔚蔚，冯才伟，万六龙，谷振方，王丹，
申请(专利权)人：北京勤邦科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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