【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种抗cd9单域抗体及其应用。
技术介绍
1、外泌体是由多泡体与细胞膜融合后释放到细胞外的直径在30-150nm的细胞外囊泡，其天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等。自外泌体被发现的50年间，其被报道参与了各种生理病理功能的细胞间通讯，是目前生物医药研究的热点之一，也是未来极具前景的细胞疗法和精准医疗的“潜力新秀”。当前，外泌体在多种疾病的诊断和治疗中被证明具有良好的应用前景，例如，血液循环中的外泌体携带的microrna可用于心血管疾病的诊断、预后甚至治疗；中枢神经系统衍生的外泌体能够穿过血脑屏障并在细胞之间携带生物分子，可用于神经退行性疾病的早期诊断；在人类免疫缺陷病毒(hiv)中，外泌体也作为潜在生物标志物的载体，并显示出潜在的药物递送途径。
2、外泌体的鉴定工作是其广泛应用的必要基础，确保外泌体的质量对于充分发挥其作为疾病生物标志物和治疗剂的潜力至关重要。根据国际细胞外囊泡学会(internationalsociety for extracellularvesicles，isev)在2014年的提议及2018年的补充建议，对于分离获得的外泌体需要从大小、形态、表面标志物三个层面进行鉴定，其中表面标志物的鉴定需要三个外泌体特异性表达蛋白和一个外泌体阴性的指标综合判断所提取到的外泌体蛋白特异性。按misev2018建议，在外泌体特异性表达的蛋白中，为了证明分析材料中存在脂质双层，必须显示至少一种跨膜或糖基磷脂酰肌醇锚蛋白；为了证明所分析的材料包含的不仅仅是开放细胞片段，必须显
3、cd9作为四次跨膜蛋白超家族的成员之一，是当前最常使用的特异性外泌体标志物，并被用作提高外泌体提取效率的特定工具。在结构上，cd9由四个跨膜结构域、一个细胞内末端和两个细胞外环组成。cd9存在于质膜、内吞室、细胞核、细胞外囊泡，并释放入各种体液中。cd9的表征揭示了其在多种造血和非造血细胞上的表达，例如基质细胞、巨核细胞、血小板、b和t淋巴细胞、树突状细胞、内皮细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞等。根据细胞类型和相关分子，cd9具有多种生物学功能，其在细胞黏附、细胞运动、激活、分化、肿瘤转移以及精卵融合等方面都发挥着重要的作用。在癌症领域，靶向cd9作为一种潜在的临床工具被广泛研究。
4、当前外泌体表面标志物最常用的鉴定方法包括westernblot、elisa，这些方法均采用抗原抗体特异性结合的原理。换而言之，抗体识别的特异性和灵敏度是外泌体表面标志物鉴定质量的关键要素。然而，目前市场上开发的抗cd9抗体多是鼠源/兔源抗体，抗体特异性差、灵敏度低，使用过程中易出现“假阳性”和“假阴性”，这使得外泌体的分离和鉴定难度增加。此外，cd9抗体及其功能域在外泌体研究、诊断和治疗中也起着关键作用。高特异性和高灵敏度抗体的开发是外泌体行业的普遍且十分迫切的需求。
5、单域抗体(single-domain antibody，sdab)，也称为纳米抗体(nanobody，nb)，是一种天然存在的仅含有重链而完全缺乏轻链的抗体类型，主要来源于骆驼类，如单峰驼、亚州双峰驼、南美洲大羊驼、原驼、羊驼等，在普通双峰骆驼血液抗体中的占比高达50％–80％。对于典型的抗体，抗原结合由其重链(vh)和轻链(vl/vk)的可变结构域共同决定，而这种非常规的重链抗体(heavy chain antibody，hcab)，仅基于其重链的可变结构域vhh结构域与抗原结合。与传统的抗体相比，单域抗体具有其独特的理化特性。具体表现在：1)运输能力强。由于无轻链，单域抗体的分子量较小(约15kda)因此很容易将靶向药物运载到细胞内，甚至能穿过血脑屏障。2)溶解度和稳定性好。常规抗体的骨架2区具有多个疏水作用的保守氨基酸，而单域抗体的骨架2区经过进化后疏水氨基酸被亲水氨基酸取代，因此单域抗体具备了更好的可逆折叠能力和抗蛋白质降解能力。此外，单域抗体的变性温度往往可以达到60℃～80℃，一些单域抗体对2.3～3.3摩尔/升的盐酸胍有较好的耐受性。同时，单域抗体中额外的二硫键增强了vhh构象结构的稳定性，使其不被胃蛋白酶和糜蛋白酶降解，因此一些单域抗体可作为口服药物。3)抗原识别更灵敏。单域抗体的长互补决定区(complementarity-determining region，cdr)较长，使其与抗原的结合方式更加灵活，暴露出的凸形互补位可以进入传统抗体难以接近的抗原表面空洞或裂缝，由此抗原可以很容易地被nb的长互补决定区cdr3识别。4)免疫原性小。传统的鼠单克隆抗体与人源抗体的差异较大，免疫原性强，通常都要进行一个复杂的人源化过程才能进行更进一步的应用，而骆驼抗体的vh和人抗体的vh相似度高，骆驼单域抗体的免疫原性更小，因而更易于进行人源化改造和临床应用。鉴于以上优势，cd9单域抗体的研究和开发在外泌体鉴定、诊断和治疗等方面都具有十分广阔的前景。。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于设计出一种抗cd9单域抗体及其应用，本专利技术使用cd9蛋白免疫羊驼细胞，通过噬菌体表面展示获得anti-cd9抗体。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种抗cd9单域抗体，包括框架区和互补决定区cdr，所述互补决定区cdr包括cdr1、cdr2和cdr3，其中,所述的cdr1序列如seq id no:2所示，所述的cdr2序列如seqidno:4所示，所述的cdr3序列如seq id no:6所示。
4、序列表
5、 seq id no:2 cdr1 gpfldlya seq id no:4 cdr2 isgsdrntd seq id no:6 cdr3 aavfqgggsycpsdvrlfrt
6、所述的互补决定区cdr被四个框架区fr1、fr2、fr3和fr4所分隔，其中，seq id no:1所示的fr1，seq id no:3所示的fr2，seq id no:5所示的fr3，seq id no:7所示的fr4。
7、序列表
8、
9、所述抗cd9单域抗体是特异性结合cd9的抗体，具有seq id no:8所示氨基酸序列。
10、序列表
11、
12、其序列中有至少80％的氨基酸序列与seq本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗CD9单域抗体，包括框架区和互补决定区CDR，其特征在于：所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3，其中，所述的CDR1序列如SEQ ID NO:2所示，所述的CDR2序列如SEQ ID NO:4所示，所述的CDR3序列如SEQ ID NO:6所示。
2.根据权利要求1所述的一种抗CD9单域抗体，其特征在于：所述的互补决定区CDR被四个框架区FR1、FR2、FR3和FR4所分隔，其中，SEQ ID NO:1所示的FR1，SEQ ID NO:3所示的FR2，SEQ ID NO:5所示的FR3，SEQ ID NO:7所示的FR4。
3.根据权利要求1所述的一种抗CD9单域抗体，其特征在于：所述抗CD9单域抗体是特异性结合CD9的抗体，具有SEQ ID NO:8所示氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的一种抗CD9单域抗体，其特征在于：其序列中有至少80％的氨基酸序列与SEQ ID NO:8所示氨基酸序列相同或形似。
5.一种抗CD9单域抗体的融合蛋白，其特征在于：其包含权利要求1所述的抗CD9单域抗体以及免疫球蛋白
6.一种核酸，其特征在于：编码权利要求1所述抗CD9单域抗体的核酸。
7.一种表达载体，其特征在于：其包含权利要求6所述的核酸。
8.一种宿主细胞，其特征在于：其包含有权利要求7所述的表达载体。
9.权利要求1或2所述单域抗体或权利要求5至8中的任一种所述生物材料的应用，其特征在于，所述应用具有如下任意一种：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：抗CD9单域抗体是结合CD9表位的且可以阻断与CD9相互作用的抗体。
...【技术特征摘要】
1.一种抗cd9单域抗体，包括框架区和互补决定区cdr，其特征在于：所述互补决定区cdr包括cdr1、cdr2和cdr3，其中，所述的cdr1序列如seq id no:2所示，所述的cdr2序列如seq id no:4所示，所述的cdr3序列如seq id no:6所示。
2.根据权利要求1所述的一种抗cd9单域抗体，其特征在于：所述的互补决定区cdr被四个框架区fr1、fr2、fr3和fr4所分隔，其中，seq id no:1所示的fr1，seq id no:3所示的fr2，seq id no:5所示的fr3，seq id no:7所示的fr4。
3.根据权利要求1所述的一种抗cd9单域抗体，其特征在于：所述抗cd9单域抗体是特异性结合cd9的抗体，具有seq id no:8所示氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的一...
【专利技术属性】
技术研发人员：李亚楠，吴超，宋银萍，高博，
申请(专利权)人：苏州志恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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