一种检测地美硝唑的试纸条及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种检测地美硝唑的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫

【技术实现步骤摘要】
一种检测地美硝唑的试纸条及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及地美硝唑的检测，具体涉及一种用于检测地美硝唑的胶体金试纸条，其特别适用于禽蛋中地美硝唑残留的检测
。

技术介绍

[0002]地美硝唑是硝基咪唑类药物，对滴虫
、
原虫病和厌氧菌有良好的预防和治疗作用，同时还具有抗结核
、
抗病毒
、
抗病毒肿瘤等作用，常作为兽药用于畜禽类疾病的预防和治疗
。
但是，地美硝唑作为药物在动物体内会有一定的残留，会引起人体致突变和致癌等副作用，对人体的健康造成影响
。
[0003]目前已报道的检测地美硝唑的方法主要是液相色谱法
、
液相色谱
‑
质谱
/
质谱法等仪器方法
。
这些方法均须在实验室条件下操作，样品前处理繁琐费时，还需配备昂贵的仪器设备，检测成本较高
、
耗时长
、
操作复杂，在实际应用过程中有很大的限制性，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要
。
因此，开发一种简单快速
、
适用于禽蛋中地美硝唑残留的胶体金试纸条，可满足大量样品现场筛选和监控
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有的检测地美硝唑的方法存在的对设备依赖性高，并且不能够实现对大批量样品的快速检测的特点，提供一种操作简单
、
灵敏度高
、
检测速度快r/>、
成本低
、
不受检测设备限制的试纸条及其制备方法和应用，以实现对大批量的地美硝唑样品进行快速检测和现场监控
。
[0005]为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供了一种检测地美硝唑的试纸条，该试纸条包括样品吸收垫
、
结合物释放垫
、
反应膜
、
吸水垫和底板；所述反应膜上具有包被有地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线；所述结合物释放垫上喷涂有地美硝唑单克隆抗体
‑
胶体金标记物
。
[0006]所述地美硝唑单克隆抗体是以地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得
。
[0007]所述地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物由地美硝唑半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白
、
卵清蛋白
、
血蓝蛋白
、
甲状腺蛋白或人血清白蛋白；
[0008]所述地美硝唑半抗原的合成方法为：取
1.96g 1
‑
(2
‑
叠氮乙基
)
‑2‑
甲基
‑5‑
硝基
‑
1H
‑
咪唑加
20mL N,N
‑
二甲基甲酰胺溶解，加入
0.36g
无水硫酸铜和
0.51g
抗坏血酸钠充分搅拌后，加入
2.56g
炔丙基
‑
琥珀酰亚胺酯微波辐照
1min
，停止反应；加
200mL
水充分搅拌，以乙酸乙酯为溶剂萃取三次，每次
100mL
，合并有机相蒸干，上硅胶柱，用体积比为
5:1
的石油醚
‑
乙酸乙酯混合溶液洗脱分离，得到地美硝唑半抗原，其分子结构式为：
[0009][0010]所述样品吸收垫
、
结合物释放垫
、
反应膜
、
吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫
1/3
～
1/2
被覆盖于样品吸收垫下
。
[0011]所述底板可为
PVC
底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜
。
[0012]本专利技术还提供了一种制备上述试纸条的方法，其包括以下步骤：
[0013]1)
制备喷涂有地美硝唑单克隆抗体
‑
胶体金标记物的结合物释放垫；
[0014]2)
制备具有包被有地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；
[0015]3)
将
1)
和
2)
制备好的结合物释放垫
、
反应膜与样品吸收垫
、
吸水垫和底板组装成试纸条
。
[0016]具体地说，步骤包括：
[0017]1)
以1‑
(2
‑
叠氮乙基
)
‑2‑
甲基
‑5‑
硝基
‑
1H
‑
咪唑为起始原料，与炔丙基
‑
琥珀酰亚胺酯，经叠氮化物与末端炔基加成反应，制备地美硝唑半抗原；
[0018]2)
将地美硝唑半抗原与载体蛋白偶联，制备地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物；
[0019]3)
用地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合
、
筛选，得到分泌地美硝唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
[0020]4)
提取小鼠
IgG
免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；
[0021]5)
分别将地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物和羊抗鼠抗抗体包被于反应膜的检测线
(T)
和质控线
(C)
上；
[0022]6)
用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；
[0023]7)
将制备的地美硝唑单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到地美硝唑单克隆抗体
‑
胶体金标记物；
[0024]8)
将地美硝唑单克隆抗体
‑
胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，
37℃
烘干
2h
后取出，置于干燥环境中保存备用；
[0025]9)
将样品吸收垫用含1％牛血清白蛋白
、pH
为
7.2
的
0.02mol/L
磷酸盐缓冲液浸泡
2h
，
37℃
烘干
2h
备用；
[0026]10)
在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫
、
结合物释放垫
、
反应膜
、
吸水垫，结合物释放垫从起始端有
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测地美硝唑的试纸条，包括样品吸收垫
、
结合物释放垫
、
反应膜
、
吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有地美硝唑单克隆抗体
‑
胶体金标记物；所述地美硝唑单克隆抗体是以地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述地美硝唑半抗原
‑
载体蛋白偶联物由地美硝唑半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白
、
卵清蛋白
、
血蓝蛋白
、
甲状腺蛋白或人血清白蛋白，其特征在于，所述地美硝唑半抗原的合成方法为：取
1.96g 1
‑
(2
‑
叠氮乙基
)
‑2‑
甲基
‑5‑
硝基
‑
1H
‑
咪唑加
20mL N,N
‑
二甲基甲酰胺溶解，加入
0.36g
无水硫酸铜和
0.51g
抗坏血酸钠充分搅拌后，加入
2.56g
炔丙基
‑
琥珀酰亚胺酯微波辐照
1min
，停止反应；加
200mL
水充分搅拌，以乙酸乙酯为溶剂萃取三次，每次
100mL

【专利技术属性】
技术研发人员：万宇平，田洪芸，崔海霞，吴希文，姚佳，罗旭轲，魏力杰，李晓芳，
申请(专利权)人：北京勤邦科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：