胶体金检测二噁英所需胶体金探针的制备方法技术

胶体金检测二噁英所需胶体金探针的制备方法，包括缓冲液配制与预处理

【技术实现步骤摘要】
胶体金检测二噁英所需胶体金探针的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物学方法检测二噁英
，具体涉及一种胶体金检测二噁英所需胶体金探针的制备方法
。
技术背景
[0002]二噁英是一种被称为持久性有机污染物
(Persistent organic pollutants,
简称
POPs)
的危险化学物质
。
持久性有机污染物环境中非常难降解，同时可以通过食物链富集和放大，也可以通过大气进行远距离传输，是一类毒性很高的污染物
。
因为这些污染物难降解
、
难挥发或半挥发
、
且易于生物蓄积且毒性高，可以通过环境介质远距离迁移，实验证明二噁英可以损害多种器官和系统，二噁英类化合物化学性质稳定，脂溶性强，进入人体后很难代谢，在人体内富集停留长达十几年之久，在环境中，二噁英可以通过食物链富集，在食物链中的位置越高，二噁英聚积的程度就越高，所以也会对全球人类健康和环境造成风险，
POPs
污染问题备受各国科学家和政府关注
。
二噁英化学名二氧杂芑，这类化合物有明显的结构特征，属于氯代化合物
。
其化学结构中含有两个苯环，或者是一个氧键连结两个苯环
。
由于氯原子可以在不同的取代位点发生取代反应，同时氯原子的个数也是不确定的，导致二噁英有上百种同分异构体
。
其中多氯代二苯
(PCDDs)75
种，多氯二苯并呋喃
(PCDFs)135
种，还有一些结构与二噁英相似的多氯联苯
(PCBs)
，这类化合物统称为二噁英
(Dioxin)。
具体的，有
17
种
(2、3、7、8
位被氯取代的
)
同分异构体被认为对人类和生物危害最为严重
。
[0003]为了减少二噁英带来的危害，所以在很多行业都会对相应样品内是否含有二噁英
、
或者含量多少进行检测
。
目前，现有的检测技术，一般是通过仪器分析法，主要是是采用高分辨气相色谱与高分辨质谱联用技术
(HRGC—HRMS)
，仪器分析法设备昂贵，操作繁琐，检测成本高，检测周期长，不具备快速高效的特点
。
随着生物技术的发展，酶联免疫技术
(ELISA)
应用于检测二噁英类化学污染物，目前美国容金有试剂盒售卖，但试剂盒售价昂贵，万元起步
。
其他检测方法如放射性同位素标记法，其检测过程会采用该种方法由于技术限制，检测成本高
、
速度相对慢
、
检测不方便，且检测稳定性不好，并存在检测重复性差的问题，对二噁英的有效检测带来了不利影响
。
胶体金免疫层析技术
(Gold immunochromatography assay
，
GICA)
是利用抗原抗体特异性结合与胶体金的显色组合的检测技术
。
以硝酸纤维素膜为固相载体，在毛细作用下，样品液沿着
NC
膜方向缓慢移动，当样品中待测物移动至
T
线区域时，发生特异性结合截留在材料表面，同时由于胶体金本身颜色效应，出现红色条带，从而判断检测结果
。
胶体金层析试纸技术的简单快捷
、
经济
、
高特异性，使其在体外诊断方面迅速发展，应用领域涉及临床诊断
、
农药兽药残留
、
细菌病等生物学检测
。
但是胶体金层析试纸技术还没有应用于样品中二噁英的检测，提供一种基于胶体金层析试纸技术检测样品中二噁英的探针显得尤为必要
。

技术实现思路

[0004]为了克服现有采用酶联免疫技术检测二噁英类化学物，因技术所限存在如背景所
述弊端，本专利技术提供了以二噁英为检测目标物，利用现有技术实验室制备的二噁英单链抗体和包被原
(TCDD
‑
BSA)
为基础，通过相关流程制备出胶体金探针和优化
pH、
抗体量
、
探针量等条件后，进行胶体金试纸条组装，用于检测样品中的二噁英，为有效检测二噁英起到了有利技术支持的胶体金检测二噁英所需胶体金探针的制备方法
。
[0005]本专利技术解决起技术问题所采用的技术方案是：
[0006]胶体金检测二噁英所需胶体金探针的制备方法，其特征在于，包括缓冲液配制与预处理
、
胶体金制备
、
胶体金标记探针制备
、
胶体金免疫层析试纸条组装四个步骤；所述缓冲液配制与预处理包括如下分步骤，
(1)
制备样品垫处理液，
(2)
制备金标垫封闭液，
(3)
制备碳酸钾溶液，
(4)
制备四氯金酸浓缩液，
(5)
制备柠檬酸三钠液，
(6)
制备
BSA
溶液，
(7)
制备硼酸盐缓冲液，
(8)
玻璃器皿预处理，
(9)
金标垫和样品垫处理；所述胶体金的制备中，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，包括如下流程，
(1)
稀释四氯金酸溶液，
(2)
取部分稀释液于烧杯中于磁力搅拌器煮沸
、
加入柠檬酸三纳溶液搅拌
、
加热沸腾，室温避光冷却备用，
(3)
通过透射电子显微镜
(TEM)
和紫外分光光度计进行表征；所述胶体金标记探针的制备包括如下流程，
(1)
取二噁英单链抗体室温下反应
、
并加入
BSA
溶液进行封闭，
(2)
室温磁力搅拌并离心吸取上清
、
再离心弃上清，
(3)
用硼酸盐缓冲液复溶，即得到二噁英胶体金探针
、
并避光保存；所述胶体金免疫层析试纸条由
PVC
底板
、
样品垫
、
金标垫
、
检测线
、
质控线
、
硝酸纤维素膜和吸水垫组成，其中检测线和控制线分别采用
TCDD
‑
BSA
和羊抗鼠
IgG
抗体喷涂于
NC
膜，于
37℃
下烘干，具体生产流程如下，首先将
NC
膜贴在
PVC
底板中间，样品垫
、
金标垫
、
吸水垫依次贴于
NC
膜上，最后采用试纸条自动切割仪切成试纸条，干燥装入密封袋储存备用
。
[0007]进一步地，所述制备样品垫处理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
胶体金检测二噁英所需胶体金探针的制备方法，其特征在于，包括缓冲液配制与预处理
、
胶体金制备
、
胶体金标记探针制备
、
胶体金免疫层析试纸条组装四个步骤；所述缓冲液配制与预处理包括如下分步骤，
(1)
制备样品垫处理液，
(2)
制备金标垫封闭液，
(3)
制备碳酸钾溶液，
(4)
制备四氯金酸浓缩液，
(5)
制备柠檬酸三钠液，
(6)
制备
BSA
溶液，
(7)
制备硼酸盐缓冲液，
(8)
玻璃器皿预处理，
(9)
金标垫和样品垫处理；所述胶体金的制备中，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，包括如下流程，
(1)
稀释四氯金酸溶液，
(2)
取部分稀释液于烧杯中于磁力搅拌器煮沸
、
加入柠檬酸三纳溶液搅拌
、
加热沸腾，室温避光冷却备用，
(3)
通过透射电子显微镜
(TEM)
和紫外分光光度计进行表征；所述胶体金标记探针的制备包括如下流程，
(1)
取二噁英单链抗体室温下反应
、
并加入
BSA
溶液进行封闭，
(2)
室温磁力搅拌并离心吸取上清
、
再离心弃上清，
(3)
用硼酸盐缓冲液复溶，即得到二噁英胶体金探针
、
并避光保存；所述胶体金免疫层析试纸条由
PVC
底板
、
样品垫
、
金标垫
、
检测线
、
质控线
、
硝酸纤维素膜和吸水垫组成，其中检测线和控制线分别采用
TCDD
‑
BSA
和羊抗鼠
IgG
抗体喷涂于
NC
膜，于
37℃
下烘干，具体生产流程如下，首先将
NC
膜贴在
PVC
底板中间，样品垫
、
金标垫
、
吸水垫依次贴于
NC
膜上，最后采用试纸条自动切割仪切成试纸条，干燥...

【专利技术属性】
技术研发人员：高璐，朱学东，薛永来，吴桂竹，杜道林，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：