【技术实现步骤摘要】
本专利技术申请涉及生物免疫，具体涉及一种抗prv gc蛋白单克隆抗体、其制备方法及应用。
技术介绍
1、伪狂犬病（pr）是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，prv）引起的，它是一种多动物共病的传染病，分布遍及全球。猪是prv的天然宿主和主要储存宿主，它也可以感染许多哺乳动物和一些灵长类动物。在中国，prv最早于1957年在猫中被发现，然后在牛，猪和其它家畜中也被发现。1979年后，随着进口疫苗和本地疫苗在中国养猪场的迅速推广，到80年代末，prv得到了有效控制，不再随意爆发。然而，2011年底，prv突然在全国各地的养猪场爆发。中国高致病性prv变异株的出现引起了全球生猪健康的关注，且生猪产业是经济发展和日常生活的一个组成部分，在这种情况下，prv监测是必要的，因而快速检测prv对农场消除prv是非常重要的。
2、对感染猪的鉴定和快速根除与疫苗接种是目前控制猪伪狂犬病的关键措施。目前，临床上常用的prv诊断方法主要包括分子生物学和血清学检测。分子生物学检测方法包括逆转录pcr（rt-pcr）和荧光定量pcr。虽然pcr常用于诊断猪伪狂犬病病毒感染，但一些因素，如熟练的工作人员，需要专门的人员在实验室操作，限制了这些技术的使用。prv的血清学检测方法主要有微中和法（mn）、间接酶联免疫吸附法（i-elisa）、竞争elisa（c-elisa）和间接免疫荧光法（ifa）。目前，blocks elisa更常用，它具有很强的特异性和敏感性，但耗时费力。
3、由 ul44 基因编码的gc，是 p
4、公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在加深对本专利技术申请总体
技术介绍
的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种抗prv gc蛋白单克隆抗体，该抗体能够应用于免疫学检测，也可为基于prv gc蛋白的疫苗研制提供便利；同时公开了一种简单便捷的制备抗prvgc蛋白单克隆抗体的方法。
2、根据本公开的一个方面，筛选得到一种抗prv gc蛋白单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示，其轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，或
3、编码其重链可变区的dna序列如seq id no.3所示，编码其轻链可变区的dna序列如seqid no.4所示。
4、在本公开的一些实施例中，所述重链可变区氨基酸排列结构如下：
5、。
6、在本公开的一些实施例中，所述轻链可变区氨基酸排列结构如下：
7、。
8、在本公开的一些实施例中，所述单克隆抗体细胞上清elisa效价≥1: 51200。
9、在本公开的一些实施例中，所述单克隆抗体的轻链型为lambda，亚型为igm。
10、根据本公开的再一个方面，提供一种抗原或抗体检测试剂盒，含所述抗prv gc蛋白单克隆抗体。
11、根据本公开的另一个方面，将所述抗prv gc蛋白单克隆抗体应用于制备抗体药物、免疫学检测（如elisa、ifa、western blot等）或疫苗制备当中；所述抗prv gc蛋白单克隆抗体还可应用于抗原或抗体检测试剂盒中。
12、根据本公开的又一个方面，提供一种抗prv gc蛋白单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
13、（1）以纯化后的prv gc蛋白做抗原免疫小鼠；
14、（2）融合所述小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞，获得杂交瘤细胞；
15、（3）采用多次elisa检测结合及亚克隆的方法得阳性杂交瘤细胞；
16、（4）提取阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株rna反转录成cdna，经过pcr扩增出单克隆抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列；
17、（5）对阳性克隆进行多次克隆化培养，得prv gc单克隆抗体杂交瘤细胞株；
18、（6）将所述杂交瘤细胞株注射于小鼠腹腔生产单克隆抗体。
19、本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
20、1. 本申请抗prv gc蛋白单克隆抗体能快速特异的识别prv及其gc蛋白，为prv gc蛋白快速检测技术的解决奠定基础，在prv相关的免疫检测中具有广泛的研究应用价值和商业使用价值。
21、2. 本申请抗prv gc蛋白单克隆抗体具有高特异性和极高灵敏度，不识别其它疱疹病毒。
22、3. 本申请抗体制备方法是利用从哺乳动物细胞获得的prv gc蛋白免疫balb/c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗prv gc蛋白单克隆抗体，能为基于prv gc蛋白的疫苗研制提供材料。
23、4.本申请所公开的单克隆抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列的基础上，可以通过常规基因工程和蛋白质工程进行一个或多个氨基酸的添加、删除、替换等修饰，获得其活性片段或保守性变异体，但仍能够与prv gc蛋白特异性结合，为进一步改造其抗体可变区序列制备不同组合形式的基因工程抗体打下基础，以进一步提升抗体的特异性和亲和力。
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1.一种抗PRV gC蛋白单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种抗PRV gC蛋白单克隆抗体，编码其重链可变区的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，编码其轻链可变区的DNA序列如SEQ ID NO.4所示。
3.根据权利要求1或2所述的抗PRV gC蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区氨基酸排列结构如下：
4.根据权利要求1或2所述的抗PRV gC蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区氨基酸排列结构如下：
5.根据权利要求1或2所述的抗PRV gC蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的ELISA效价≥1: 51200。
6.根据权利要求1或2所述的抗PRV gC蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的轻链型为Lambda，亚型为IgM。
7.权利要求1或2所述抗PRV gC蛋白单克隆抗体在制备PRV检测试剂中的应用。
8.一种抗原或抗体检测试剂盒，含有权利要求1或2所述的抗PRV g
9.权利要求1或2所述抗PRV gC蛋白单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种抗prv gc蛋白单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示，其轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.一种抗prv gc蛋白单克隆抗体，编码其重链可变区的dna序列如seq id no.3所示，编码其轻链可变区的dna序列如seq id no.4所示。
3.根据权利要求1或2所述的抗prv gc蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区氨基酸排列结构如下：
4.根据权利要求1或2所述的抗prv gc蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区氨基酸排列结构如下：<...
【专利技术属性】
技术研发人员：王爱萍，张改平，周景明，陈玉梅，刘燕凯，王娜，朱习芳，刘红亮，
申请(专利权)人：龙湖现代免疫实验室，
类型：发明
国别省市：
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