【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于确定抗体与补体成分1q(c1q)的结合的新型方法。根据本专利技术的过程使得可以在均相邻近测定(has)中测量抗体与c1q的结合。
技术介绍
1、抗体是结合特定抗原的免疫蛋白。在大多数哺乳动物(包括人和小鼠)中，抗体由成对的重多肽链和轻多肽链构建。每条链由两个不同的区域组成，称为可变(fv)区和恒定(fc)区。轻链和重链fv区含有分子的抗原结合决定簇，并负责结合靶标抗原。fc区定义了抗体的类别(或同种型)(例如igg)。
2、fc区与许多天然蛋白(如fcγ受体或补体成分1q(c1q))相互作用，以引发重要的生物化学事件，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)。fc与c1q的结合激活免疫系统的补体级联反应，这反映了抗体介导cdc的能力。
3、igg上的c1q结合位点是fc区的ch2结构域。ch2结构域上的三个带电残基glu-318、lys-320和lys-322对c1q与igg的结合至关重要。igm上的c1q结合位点是fc区的ch3结构域。
4、c1q具有六个球状头，每个球状头可以结合单个igg分子(经由其fc区)。因此，c1q能够结合六个抗体，尽管与两个抗体(例如两个igg)结合足以激活补体途径。c1q与c1r和c1s丝氨酸蛋白酶形成复合物，以形成补体途径的c1复合物。
5、c1q必须结合至少两个抗体(例如两个igg)以激活补体途径。因此，在现有技术中，总是使用固相以将igg组装成能够以高亲和力结合c1q的适当簇，并由此测量
6、然而，现有的固相方法并不完全令人满意，因为六聚体igg/c1q结合模型具有几何限制，并且难以预测以高亲和力结合c1q的正确的igg聚簇[参考文献4]。因此，结果并不总是可重复的，并且通常需要对每个数据进行归一化。
7、因此，需要开发一种用于确定抗体(测试抗体)与补体成分1q(c1q)的结合的有效、易于实施且可重复的方法。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提出一种用于确定抗体(测试抗体)与补体成分1q(c1q)的结合的新型体外方法，即一种用于评估抗体(测试抗体)介导cdc的能力的体外方法。
2、根据第一方面，本专利技术涉及一种用于确定抗体(测试抗体)与补体成分1q(c1q)的结合的体外方法，其包括以下步骤：
3、a)在测量介质中使以下接触：
4、-测试抗体，
5、-生物素化抗fab配体，所述生物素化抗fab配体能够结合测试抗体的fab区，
6、-用一对hpa(均相邻近测定)配偶体的第一成员直接或间接标记的链霉亲和素，和
7、-用一对hpa配偶体的第二成员直接或间接标记的c1q；
8、b)测量测量介质中的hpa信号，hpa信号的存在代表测试抗体与c1q的结合。
9、根据第二方面，本专利技术涉及一种用于进行本专利技术的方法的试剂盒，其包含：
10、(i)生物素化抗fab配体，和
11、(ii)链霉亲和素或用一对hpa配偶体的第一成员直接标记的链霉亲和素，和
12、(iii)c1q或用一对hpa配偶体的第二成员直接标记的c1q，和
13、(iv)(如果链霉亲和素未用一对hpa配偶体的第一成员直接标记)用一对hpa配偶体的第一成员直接标记的抗链霉亲和素配体，和
14、(v)(如果c1q未用一对hpa配偶体的第二成员直接标记)用一对hpa配偶体的第二成员直接标记的抗c1q配体。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于确定抗体(测试抗体)与补体成分1q(C1q)的结合的体外方法，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述HPA选自(i)扩增发光氧通道免疫测定(LOCI)，如扩增发光邻近均相测定(ALPHA)，(ii)共振能量转移(RET)以及(iii)空间邻近分析物试剂捕获发光(SPARCL)。
3.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述测试抗体是IgG，如IgG1、IgG2或IgG4，优选IgG1或IgG2。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述生物素化抗Fab配体是生物素化抗Fab抗体或抗体片段，如生物素化抗Fab鼠抗体或抗体片段，如生物素化抗Fab小鼠抗体或抗体片段。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述生物素化抗Fab配体是生物素的抗原或抗原片段。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中用一对HPA配偶体的第一成员直接标记所述链霉亲和素，所述一对HPA配偶体的第一成员如一对RET配偶体的第一成员或一对LOCI配偶体的第一成员。
7.根据权利要求1
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中：
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述HPA是RET，并且所述供体选自发光供体化合物或荧光供体化合物，如：
10.根据权利要求8和9中任一项所述的方法，其中所述HPA是RET，并且所述受体选自荧光受体化合物或非荧光受体化合物(淬灭剂)，如：
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述HPA是LOCI，并且所述供体是酞菁。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述HPA是LOCI，并且所述受体包括(i)二甲基噻吩、蒽和红荧烯，或(ii)二甲基噻吩和铕螯合物。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中用不同浓度的测试抗体重复步骤(a)和(b)，并且优选地，所述方法包括确定测试抗体与C1q的结合的解离常数(Kd)和/或EC50的额外步骤(c)。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述测量介质的渗透压为250mOsm/L至500mOsm/L。
15.用于进行权利要求1至14中任一项所述的方法的试剂盒，其包含：
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于确定抗体(测试抗体)与补体成分1q(c1q)的结合的体外方法，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述hpa选自(i)扩增发光氧通道免疫测定(loci)，如扩增发光邻近均相测定(alpha)，(ii)共振能量转移(ret)以及(iii)空间邻近分析物试剂捕获发光(sparcl)。
3.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述测试抗体是igg，如igg1、igg2或igg4，优选igg1或igg2。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述生物素化抗fab配体是生物素化抗fab抗体或抗体片段，如生物素化抗fab鼠抗体或抗体片段，如生物素化抗fab小鼠抗体或抗体片段。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述生物素化抗fab配体是生物素的抗原或抗原片段。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中用一对hpa配偶体的第一成员直接标记所述链霉亲和素，所述一对hpa配偶体的第一成员如一对ret配偶体的第一成员或一对loci配偶体的第一成员。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中用一对hpa配偶体的第二成员标记的抗c1q配体间接标记所述c...
【专利技术属性】
技术研发人员：N·多瑞，P·门萨特，T·鲁克斯，J·瓦拉赫，E·特兰凯，
申请(专利权)人：CISBIO生物试验公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。