【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及流感病毒疫苗，特别涉及一种流感病毒裂解疫苗的制备方法。
技术介绍
1、流感是导致人类生病和死亡的一个重要原因，并可能会在世界范围内产生重大的社会和经济影响。流感大流行时许多人需要医生治疗或者住院。流感大流行往往导致很高的死亡率，受影响的绝大多数是老年人。目前很多国家随着人口老龄化，老人所占国家人口比例也在快速增高，流感大流行对国家所造成的影响可想而知。现在，通常可用的预防流感的唯一方法是疫苗接种。流感病毒裂解疫苗是在流感全病毒灭活疫苗的基础上，通过选择适当的裂解剂和裂解条件裂解流感病毒，以去除病毒核酸和大分子蛋白，保留抗原有效成分ha和na以及部分m蛋白和np蛋白，经过不同的生产工艺去除裂解剂和纯化有效抗原成分制备而成的。
2、尽管疫苗可及，受种者却因缺乏对疫苗安全性、有效性，以及对所防疾病的认知，而导致延迟接种或拒绝接种疫苗，从而使自身暴露于本可以预防的疾病风险之下，导致“疫苗犹豫”。对疫苗安全性的担忧主要是接种存在不良反应。在流感病毒疫苗的制备工艺中，通常需要去除疫苗中的杂蛋白和杂质，仅保留ha和na抗原成分，提高疫苗纯度，从而降低不良反应，提升疫苗安全性。但是目前国内生产的流感病毒裂解疫苗在经过裂解及纯化后，还有部分非必要成分尚未去除，容易引发接种后的不良反应，并带来一定的安全隐患。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术旨在提出一种流感病毒裂解疫苗的制备方法，以解决流感病毒裂解疫苗制备时杂蛋白不能完全去除、疫苗纯度较低的问题。
2、以为
3、一种流感病毒裂解疫苗的制备方法，包括如下步骤：
4、s1.流感病毒株接种鸡胚，经培养后收获病毒液；
5、s2.病毒灭活；
6、s3.超滤浓缩；
7、s4.病毒纯化；
8、s5.病毒液裂解；
9、s6.超滤去除大分子杂质；
10、使用截留分子量为300kd或500kd的超滤膜包对所述步骤s5获得的病毒裂解液a进行超滤，收集透过液b；
11、s7.超滤去除小分子杂质；
12、使用截留分子量为30kd或50kd的超滤膜包对所述透过液b进行超滤，收集回流液c；
13、s8.除菌过滤；
14、使用0.45+0.2μm的除菌滤器对所述回流液c进行除菌过滤，得到流感病毒裂解原液d。
15、进一步的，所述步骤s6中，在超滤期间，保持膜包进液压力不高于0.15mpa，回流压力不高于0.06mpa。
16、进一步的，所述步骤s6中，超滤使用溶液为0.01mol/l ph为7.2的pbs缓冲溶液，洗滤倍数为10～20倍。
17、进一步的，所述步骤s7中，超滤使用溶液为0.01mol/l ph为7.2的pbs缓冲溶液，洗滤倍数为5～10倍。
18、进一步的，所述步骤s7中，在超滤期间，保持膜包进液压力不高于0.15mpa，回流压力不高于0.06mpa。
19、进一步的，所述步骤s7中，浓缩倍数为20～40倍。
20、进一步的，所述步骤s2中，收获的含有病毒的尿囊液加入100～200μg/ml、终浓度为0.01％～0.02％的甲醛，置于2～8℃灭活120～240h。
21、进一步的，所述步骤s3中，灭活后的尿囊液经澄清处理后，用截留分子量为300kd或750kd的超滤膜包超滤浓缩不超过20倍。
22、进一步的，所述步骤s5中，使用终浓度为0.5％的tritonx-100对步骤s4获得的初步浓缩纯化的病毒液进行裂解，裂解时间为1.5～2h，得到病毒裂解液a。
23、相对于现有技术，本专利技术所述的一种流感病毒裂解疫苗的制备方法具有以下优势：在保留抗原的基础上，进一步去除流感病毒裂解原液中更多的蛋白质，提高流感病毒裂解疫苗的纯度，可有效降低疫苗接种后的不良反应发生率。同时操作更简单便捷，适合工业化大规模生产。
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1.一种流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S6中，在超滤期间，保持膜包进液压力不高于0.15Mpa，回流压力不高于0.06Mpa。
3.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S6中，超滤使用溶液为0.01mol/LpH为7.2的PBS缓冲溶液，洗滤倍数为10～20倍。
4.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S7中，超滤使用溶液为0.01mol/LpH为7.2的PBS缓冲溶液，洗滤倍数为5～10倍。
5.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S7中，在超滤期间，保持膜包进液压力不高于0.15Mpa，回流压力不高于0.06Mpa。
6.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S7中，浓缩倍数为20～40倍。
7.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，收获的含有病毒
8.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，灭活后的尿囊液经澄清处理后，用截留分子量为300KD或750KD的超滤膜包超滤浓缩不超过20倍。
9.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中，使用终浓度为0.5％的Triton X-100对步骤S4获得的初步浓缩纯化的病毒液进行裂解，裂解时间为1.5～2h，得到病毒裂解液A。
...【技术特征摘要】
1.一种流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤s6中，在超滤期间，保持膜包进液压力不高于0.15mpa，回流压力不高于0.06mpa。
3.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤s6中，超滤使用溶液为0.01mol/lph为7.2的pbs缓冲溶液，洗滤倍数为10～20倍。
4.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤s7中，超滤使用溶液为0.01mol/lph为7.2的pbs缓冲溶液，洗滤倍数为5～10倍。
5.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤s7中，在超滤期间，保持膜包进液压力不高于0.15mpa，回流压力不高于0.06m...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘明波，张伟，郭习勤，崔艳霞，安文珏，董洁，潘若文，
申请(专利权)人：华兰生物疫苗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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