一株高效生产微菌素Y的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株制造技术

本发明专利技术公开了一株高效生产微菌素Y的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株。本发明专利技术通过对mcyABCD基因序列和表达原件的改造，并将其同时插入至枯草芽孢杆菌基因组Amye和SigF两个基因中，得到高效生产MccY的枯草芽孢杆菌工程菌株。本发明专利技术同时插入Amye和SigF基因，能够使MccY的共表达量上升，相比单个基因或者质粒表达量显著提升；其表达产物对鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌具有良好的杀伤性。同时得到的工程菌株不会产生芽孢，减少芽孢污染，在高温下可以失活，更有利于灭活菌。本发明专利技术提供的工程菌株可以低成本，能更安全的生产MccY，能够通过活菌或灭活菌的方式直接添加，作为良好的治疗细菌性疾病产品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物。更具体地，涉及一株高效生产微菌素y的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株。

技术介绍

1、抗生素是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质，具有很好的抗菌作用。但是，随着抗生素的广泛应用，抗生素耐药成为药物使用时应重点关注的问题。抗生素耐药指微生物阻止抗生素等药物对其产生作用的能力，致使标准治疗方法失去效力的现象。抗生素耐药已经成为严重的问题，同时也使得抗生素新药的开发存在着诸多挑战。

2、微菌素y(mccy)是一种来源于肠道菌的小分子抗菌肽，其通过与铁载体受体蛋白(fhua)结合进入细菌，对细菌进行内部瓦解，进而杀死细菌。mccy的发现极大地弥补了微菌素j25(部分大肠杆菌、肠炎沙门氏菌和志贺氏菌)的抑菌谱，其主要针对鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和婴儿沙门氏菌等血清型以及部分志贺氏菌和大肠杆菌。mccy的生物合成主要由mcyabcd四个基因参与，其中mcya编码mccy的线性氨基酸前体，mcyb、mcyc和mcyd编码翻译本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一株高效生产微菌素Y的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株，其特征在于，所述工程菌株通过在枯草芽孢杆菌野生型菌株上的α-淀粉酶基因Amye和RNA聚合酶σ-因子基因SigF中同时插入改造后的mcyABCD基因得到，所述改造后的mcyABCD基因中mcyA和mcyBCD的基因序列方向相同，分别由不同的启动子启动表达，mcyA基因采用终止子终止转录。

2.根据权利要求1所述工程菌株，其特征在于，所述mcyA的序列如SEQ ID NO：4所示，mcyBCD的序列如SEQ ID NO：5所示。

3.根据权利要求1所述工程菌株，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌野生型菌株为枯草芽孢杆...

【技术特征摘要】

1.一株高效生产微菌素y的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株，其特征在于，所述工程菌株通过在枯草芽孢杆菌野生型菌株上的α-淀粉酶基因amye和rna聚合酶σ-因子基因sigf中同时插入改造后的mcyabcd基因得到，所述改造后的mcyabcd基因中mcya和mcybcd的基因序列方向相同，分别由不同的启动子启动表达，mcya基因采用终止子终止转录。

2.根据权利要求1所述工程菌株，其特征在于，所述mcya的序列如seq id no：4所示，mcybcd的序列如seq id no：5所示。

3.根据权利要求1所述工程菌株，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌野生型菌株为枯草芽孢杆菌bs168菌株。

4.权利要求1所述工程菌株的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤s1中所述p43启动子的序列如seq id no：1所示，pveg启动子的序列如seq id no：2所示，终止子的序列如seq id no：...

【专利技术属性】
技术研发人员：张广文，冯赛详，廖明，江金飞，谢倩梅，代绘琳，许斯祺，刘宇彤，孙娟，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：