【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程领域，涉及巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因及其重组表达载体与应用，具体涉及从原核表达、巯基化修饰位点确定到一个参与梨果皮花青苷生物合成相关的pymyb10基因及其应用。
技术介绍
1、梨(pyrus l.)是世界上最常见和最受欢迎的水果之一，红梨因其美丽的外观和丰富的花青素而深受消费者喜爱(wang et al.,2017)。在植物组织中，花青素被广泛发现为具有多种生理功能的重要黄酮类化合物，有助于授粉，种子传播和抵抗恶劣的环境条件(winkel-shirley,2001)。此外，花青素具有显著的抗氧化活性，对人类健康具有潜在益处，如降低癌症，炎症和冠状动脉硬化的风险(gonzali et al.,2009；sun et al.,2014)。
2、目前研究表明转录因子myb10是调控花青苷合成的关键基因。peng等人通过研究紫色猕猴桃花青素谱发现猕猴桃花青素通路的核心基因为myb10等myb tfs(peng et al.,2019)。chen等人将fvmyb10的r2结构域中的单个核苷酸突变，发现突变后fvmyb10使草莓果实色泽受到抑制，这为草莓果实中myb10调控的花青素生物合成的分子机制提供了新的见解(chen et al.,2020)。等人分离了类黄酮途径酶及调节因子myb10、bhlh3和wd40的编码序列，并分析了它们在4个不同醋栗属果实品种中花青素的表达水平，并发现rrmyb10促进花青苷的积累(et al.,2020)。zhou等人研究了多种r2r3-
3、h2s作为一种新型的气体信号分子，具有重要的生理功能，如根形成、花朵开放时间、胁迫反应和果实成熟期间的颜色变化(luo et al.,2021；zhang et al.,2021；zhanget al.,2020)。在番茄中，h2s可以通过h2s产生酶sllcd1抑制果实成熟过程和颜色变化(huet al.,2020)。h2s介导的靶蛋白过硫化被认为是一种新型的翻译后蛋白修饰。据报道，在拟南芥中，近5％的蛋白质通过用过硫基(-ssh)取代半胱氨酸残基上的巯基(-sh)而被修饰，大多数过硫化蛋白的活性或亚细胞定位改变了其结构和功能。累积证据表明，h2s通过过硫化修饰控制自噬、气孔关闭和应激反应(zhang et al.,2021；laureano marín etal.,2020；shen et al.,2020；zhou et al.,2021)；在园艺作物中，h2s过硫化braflc1/3以抑制其与下游靶基因启动子的结合活性，导致大白菜开花进程的改变(ma et al.,2021)。因此，h2s介导的蛋白巯基化修饰参与了植物发育的许多方面，但翻译后修饰是否调节了红皮梨花青素的积累仍不清楚。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因及其重组表达载体与应用。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因，所述巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因包括：巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因；所述巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的核苷酸序列如seq id no.11所示。
3、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种由巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因编码的蛋白，包括由巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因编码的蛋白，该蛋白的氨基酸序列如seq id no.8所示；或由巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因编码的蛋白，该蛋白的氨基酸序列如seq id no.12所示。
4、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种含有巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因的宿主菌，包括：含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的宿主菌；或含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的宿主菌。
5、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种克隆权利要求1所述的促进花青苷合成的pymyb10基因的引物，包括：克隆巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的引物对，上游引物pymyb10-f1序列如seq id no.9所示，下游引物pymyb10-r1序列如seq id no.10所示；或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的引物对，上游引物pymyb10-f2序列如seq id no.13所示，下游引物pymyb10-r2序列如seq id no.14所示。
6、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因在促进梨果皮花青苷合成中的应用，所述巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因包括：巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因；巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的核苷酸序列如seq id no.7所示；巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的核苷酸序列如seq idno.11所示。
7、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种含有巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因的重组表达载体，包括含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的重组表达载体，或含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的重组表达载体，促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的核苷酸序列如s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因，其特征在于：所述促进花青苷合成的PyMYB10基因包括：巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因；所述巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示。
2.一种由权利要求1所述的巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因编码的蛋白，其特征在于：包括由巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因编码的蛋白，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示；或由巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因编码的蛋白，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.12所示。
3.一种含有权利要求1所述的巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因的宿主菌，
4.一种克隆权利要求1所述的巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因的引物，其特征在于：包括：克隆巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因的引物对，上游引物PyMYB10-F1序列如SEQ ID No.9所示，下游引物PyMYB10-R1序列如SEQ ID No.10所示；或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因的引物对，上游引物PyMYB10-F2序列如SEQ ID No.13所示，下游引物PyMYB10-R2序列如SEQ IDNo.14所示。
5.一种巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因在促进草莓果实中花青苷合成中的应用，其特征在于：所述促进花青苷合成的PyMYB10基因包括：巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因；巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示。
6.一种含有巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因的重组表达载体，其特征在于：包括含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因的重组表达载体，或含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因的重组表达载体，促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示。
7.根据权利要求6所述的巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因的重组表达载体，其特征在于：以pSAK277为出发载体，将巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因插入EcoR I和Xbal I位点之间所得，或以pSAK277为出发载体，将巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因插入EcoR I和Xbal I位点之间所得。
8.一种含有巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的PyMYB10基因的重组表达载体在促进草莓果实中花青苷合成中的应用，其特征在于：含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因的重组表达载体在促进草莓果实中花青苷合成中的应用，或含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因的重组表达载体在促进草莓果实中花青苷合成中的应用；巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys194Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的PyMYB10Cys218Ala基因的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示。
...【技术特征摘要】
1.一种巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因，其特征在于：所述促进花青苷合成的pymyb10基因包括：巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因；所述巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的核苷酸序列如seq id no.11所示。
2.一种由权利要求1所述的巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因编码的蛋白，其特征在于：包括由巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因编码的蛋白，该蛋白的氨基酸序列如seq id no.8所示；或由巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因编码的蛋白，该蛋白的氨基酸序列如seq id no.12所示。
3.一种含有权利要求1所述的巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因的宿主菌，其特征在于：包括：含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的宿主菌；或含有巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的宿主菌。
4.一种克隆权利要求1所述的巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因的引物，其特征在于：包括：克隆巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys194ala基因的引物对，上游引物pymyb10-f1序列如seq id no.9所示，下游引物pymyb10-r1序列如seq id no.10所示；或巯基化修饰位点突变促进花青苷积累的pymyb10cys218ala基因的引物对，上游引物pymyb10-f2序列如seq id no.13所示，下游引物pymyb10-r2序列如seq idno.14所示。
5.一种巯基化修饰位点突变后促进花青苷合成的pymyb10基因在促进草莓果实中花青苷合成中的应用，其特征在于：所述促进花青苷合成的pymyb10基因包...
【专利技术属性】
技术研发人员：张华，孙红叶，姚改芳，苟莎莎，张从合，胡康棣，钟婷颖，孙忱，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：
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