【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及let-7a在cho细胞重组蛋白表达中的应用、表达系统。
技术介绍
1、重组抗体药物因其靶向性强、副作用小等特点已经成为药物研发的热点。利用中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary,cho)细胞表达治疗性重组蛋白药物(抗体)是目前生物制药研发和生产的重要平台。然而，表达量低一直是影响重组蛋白药物规模化生产的重要因素之一，细胞培养过程中面临营养物耗竭、有害代谢物累积以及渗透压增高等导致细胞凋亡，严重影响活细胞密度及目的产物的产量和质量。通过构建高效表达载体、改造宿主细胞系、优化生产工艺等方法能够有效提高重组蛋白的表达水平，实现细胞产能的提升并在较长时间内维持较高的活细胞密度。
2、微小rna(microrna,mirna)是一类进化保守的单链非编码rna，通过与靶基因mrna结合引起靶基因mrna降解或翻译抑制进而参与转录后基因表达调控。目前mirna在cho细胞中的表达及其生物学功能受到广泛关注，可作为潜在的细胞治疗或工程靶点提高细胞的生产能力和应激能力。与大多数依赖于基因过表达或基因敲除的方法相比，mirna可以同时调控多条不同的细胞通路以保持细胞内稳态。通过过表达或者抑制特定的mirna可以同时调控蛋白质合成和分泌、细胞代谢等多个途径，从而达到提高产量的目的。
3、let-7家族是最早发现于秀丽隐杆线虫的mirna之一，参与调控细胞增殖、分化、凋亡、免疫应答、肿瘤发生及转移等多种生理病理过程。let-7调控靶基因的方式有两种：let-7与靶基因mrna
4、尽管目前重组蛋白的产量已经达到较高水平，但随着生物制药产业的不断发展，对哺乳动物细胞生产的重组蛋白需求量越来越高，进一步提高哺乳动物细胞的产量成为亟待解决的问题。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的之一在于提供let-7a在cho细胞重组蛋白表达中的应用，通过增加mirna let-7a的量提高重组蛋白表达量。
2、本专利技术的目的之二在于提供重组蛋白表达系统，通过构建高表达let-7a的cho细胞，提高重组蛋白表达量。
3、为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
4、let-7a在cho细胞重组蛋白表达中的应用，增加cho细胞重组蛋白表达系统中mirna let-7a的量，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
5、可选的，通过在cho细胞重组蛋白表达系统中转染let-7a mimics增加cho细胞重组蛋白表达系统中所述mirna的量。
6、具体的，所述let-7a mimics的转染量为30nm。
7、可选的，通过在cho细胞重组蛋白表达系统中转染let-7a过表达载体增加cho细胞重组蛋白表达系统中所述mirna的量。
8、可选的，所述let-7a过表达载体为包含let-7a mimics编码序列的表达载体，所述let-7a mimics编码序列如seq id no.2所示。
9、一种重组蛋白表达系统，通过将let-7a mimics转染至cho细胞重组蛋白表达系统构建而成；
10、或者通过将let-7a过表达载体转染至cho细胞重组蛋白表达系统构建而成；
11、let-7a mimics、let-7a过表达载体增加重组蛋白表达系统中mirna的量，所述mirna为cgr-let-7a，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
12、具体的，所述let-7a mimics的转染量为30nm；
13、或者所述let-7a过表达载体为包含let-7a mimics编码序列的表达载体，所述let-7amimics编码序列如seq id no.2所示。
14、可选的，上述重组蛋白表达系统用于制备包含目的蛋白的制剂；
15、所述制剂选自蛋白检测试剂、治疗或预防疾病的目的蛋白药物、带有目的蛋白的基因药物。
16、作为举例说明，在本专利技术的具体实施例中，所述重组蛋白为阿达木抗体。
17、需要说明的是，本专利技术所述let-7a为cgr-let-7a。
18、本专利技术的有益效果：
19、本专利技术通过在cho细胞重组蛋白表达系统中增加mirna let-7a的量提高重组蛋白表达量，并且设计试验验证在cho细胞重组蛋白表达系统中直接转染let-7a mimics能够提高目的蛋白，例如阿达木抗体，表达量；同时，通过试验验证，将let-7a mimics编码核酸序列插入出发载体构建let-7a过表达载体，将let-7a过表达载体转染至cho细胞重组蛋白表达系统，增加mirna let-7a的量，更高效提高目的蛋白表达量。
20、本专利技术为提高cho细胞重组蛋白表达提供新的策略。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.let-7a在CHO细胞重组蛋白表达中的应用，其特征在于，增加CHO细胞重组蛋白表达系统中miRNA let-7a的量，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述应用，其特征在于，通过在CHO细胞重组蛋白表达系统中转染let-7a mimics增加CHO细胞重组蛋白表达系统中所述miRNA的量。
3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述let-7a mimics的转染量为30nM。
4.如权利要求1所述应用，其特征在于，通过在CHO细胞重组蛋白表达系统中转染let-7a过表达载体增加CHO细胞重组蛋白表达系统中所述miRNA的量。
5.如权利要求4所述应用，其特征在于，所述let-7a过表达载体为包含let-7a mimics编码序列的表达载体，所述let-7a mimics编码序列如SEQ ID NO.2所示。
6.一种重组蛋白表达系统，其特征在于，通过将let-7a mimics转染至CHO细胞重组蛋白表达系统构建而成；
7.如权利要求6所述重组蛋白表达系统，其特征在于，所述l
8.如权利要求6～7所述表达系统的应用，其特征在于，用于制备包含目的蛋白的制剂；
9.如权利要求8所述应用，其特征在于，所述目的蛋白为阿达木抗体。
...【技术特征摘要】
1.let-7a在cho细胞重组蛋白表达中的应用，其特征在于，增加cho细胞重组蛋白表达系统中mirna let-7a的量，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.如权利要求1所述应用，其特征在于，通过在cho细胞重组蛋白表达系统中转染let-7a mimics增加cho细胞重组蛋白表达系统中所述mirna的量。
3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述let-7a mimics的转染量为30nm。
4.如权利要求1所述应用，其特征在于，通过在cho细胞重组蛋白表达系统中转染let-7a过表达载体增加cho细胞重组蛋白表达系统中所述mirna的量。
【专利技术属性】
技术研发人员：张玺，王耀坤，王天云，林艳，孙秋丽，宁彬环，贾岩龙，王小引，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：
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