【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及tama在制备预防和治疗肺炎克雷伯菌感染的产品中的应用。
技术介绍
1、肺炎克雷伯菌(klebsiellapneumoniae，kp)属于肠杆菌目革兰阴性杆菌，主要存在于人体的胃肠道、呼吸道和皮肤，是一种条件致病菌，也是临床检出率最高的致病菌之一。kp是导致院内呼吸道感染最常见的细菌，在革兰阴性菌(g-)导致的菌血症、泌尿系统感染中位居第二位。kp主要定植于人和动物的消化道、呼吸道、泌尿生殖道。当机体免疫力降低或长期大量使用抗生素导致菌群失调时引起感染，可引起肺炎、脑膜炎、肝脓肿、泌尿系统炎症、伤口感染与败血症等，给临床治疗带来了很大困难。kp感染的发病率和死亡率较高。根据2022年中国细菌耐药监测网显示，kp的临床检出率呈持续上升趋势，现已位于临床最常见分离菌株的第二位，仅次于大肠埃希菌。
2、近些年来由于临床抗生素滥用，抗生素抗性基因在kp中持续积累，导致具有“超级耐药组”的广泛耐药和泛耐药菌株的出现，它们可以保护kp免受几乎所有抗生素的攻击。抗生素耐药菌的出现，使得目前每年全球约有近100万人死于无法用普通抗生素治疗的细菌感染，世界卫生组织明确指出如果不加大抗生素的研发力度，未来10年内，面对耐药菌感染，人类将“无药可医”。但现有的新抗生素开发力度严重滞后于超级耐药菌的产生速度，进入21世纪以来，总共只有36个抗生素成功上市，其中半合成抗生素31个，占绝对的主导地位，而直接来源于微生物代谢产物的只有达托霉素和非达霉素。面对耐药菌株的出现和泛滥，以及缺乏有效手段治疗严重多重耐药kp
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了tama在制备预防和治疗肺炎克雷伯菌感染的产品中的应用。
2、tama在制备预防和治疗肺炎克雷伯菌感染的产品中的应用，tama的核苷酸序列如seq id no.3所示。
3、优选的，所述产品为重组质粒pet-28a-tama，是将pet-28a(+)线性质粒与tama基因连接后得到的。
4、优选的，连接体系如下：seamless cloning mastermix为5μl，pet-28a(+)线性质粒为1μl，tama基因为4μl。
5、优选的，所述产品为tama蛋白抗原。
6、优选的，所述tama蛋白抗原由所述重组质粒pet-28a-tama制得。
7、优选的，所述tama蛋白抗原的制备方法包括以下步骤：
8、将鉴定正确的重组质粒pet-28a-tama转化感受态大肠杆菌bl21，获得工程菌pet28a-tama/bl21。
9、将所述工程菌进行放大培养以获取tama蛋白抗原。
10、优选的，tama蛋白抗原进行亲和柱层析纯化，得到纯化的tama蛋白抗原。
11、优选的，所述亲和柱层析纯化为镍柱亲和层析纯化。
12、优选的，纯化的tama蛋白抗原的使用量为0.0025-0.01mg/g体重。
13、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
14、tama一种omp85家族蛋白，本专利技术提供的蛋白tama能够诱导动物产生特异性的抗体：利用本专利技术重组tama蛋白制备的亚单位疫苗可通过腹腔注射途径进行免疫接种，能够激发机体产生高滴度igg抗体，证实其具有良好的免疫原性。
15、本专利技术提供的蛋白tama可在原核表达系统-大肠杆菌中表达，成本低，产量高；
16、本专利技术提供的蛋白tama纯化条件温和、步骤简单、复性简单，纯度高，容易放大、重复性好，回收率较好。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.TamA在制备预防和治疗肺炎克雷伯菌感染的产品中的应用，TamA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为重组质粒pET-28a-TamA，是将pET-28a(+)线性质粒与TamA基因连接后得到的。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，连接的体系如下：Seamless cloningMasterMix为5μL，pET-28a(+)线性质粒为1μL，TamA基因为4μL。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为TamA蛋白抗原。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述TamA蛋白抗原由所述重组质粒pET-28a-TamA制得。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述TamA蛋白抗原的制备方法包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，TamA蛋白抗原进行亲和柱层析纯化，得到纯化的TamA蛋白抗原。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述亲和柱层析纯化为镍柱亲和层析纯化。
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【技术特征摘要】
1.tama在制备预防和治疗肺炎克雷伯菌感染的产品中的应用，tama的核苷酸序列如seq id no.3所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为重组质粒pet-28a-tama，是将pet-28a(+)线性质粒与tama基因连接后得到的。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，连接的体系如下：seamless cloningmastermix为5μl，pet-28a(+)线性质粒为1μl，tama基因为4μl。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为tama蛋白抗原。
【专利技术属性】
技术研发人员：刘亮，张诗琦，曹焱振，杨帆，赵化杰，李端，赵林静，邓保国，苏琳，乔思月，吴法宪，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：
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