【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种acmt2a基因及其应用。
技术介绍
1、猕猴桃属猕猴桃科猕猴桃属植物，营养丰富，vc含量甚高，鲜食与加工皆可，经济价值高，素有水果之王的美誉。近年来，猕猴桃产业尽管取得了较快发展，但受土壤重金属污染和非生物胁迫，植物的生长发育受到严重的影响(huang wei,wan mingchang,qiaorong.development status and countermeasures of kiwifruit industry inguizhou.guizhou agricultural sciences,2012,40(4):184-186.)。
2、我们从猕猴桃中鉴定到一个acmt2a基因，其与猕猴桃果实的发育和后熟软化密切相关，且参与了猕猴桃对丁香假单胞菌胁迫应答过程，可作为猕猴桃转基因育种的重要靶基因，而且该基因还可以提高原核菌株在重金属胁迫、氯化钠胁迫、过氧化氢胁迫和高温胁迫下的生长，可作为重要的基因资源，可以在猕猴桃以及其他植物或微生物的抗逆和抗重金属胁迫基因工程中得到应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种acmt2a基因及其应用。
2、本专利技术的第一个方面是提供一种猕猴桃acmt2a基因，其核苷酸序列如seq id no:1所示。
3、本专利技术的第二个方面是提供本专利技术第一个方面所述的猕猴桃acmt2a基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如seq id no:
4、本专利技术的第三个方面是提供含有本专利技术第一个方面所述的猕猴桃acmt2a基因编码区的重组载体或宿主菌。
5、其中，所述原始载体可以采用基因重组领域中常用的载体，例如病毒、质粒等。本专利技术对此不进行限定。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述原始载体采用pet28a载体质粒或pmd18-t载体质粒，但应当理解的是，本专利技术还可以采用其他质粒、或者病毒等。
6、优选地，所述原始载体为pet28a表达载体，猕猴桃acmt2a基因编码区位于pet28a表达载体的ecor i和sali两限制性内切酶位点之间。
7、本专利技术的第四个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的acmt2a基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白质、或者本专利技术第三个方面所述的重组表达载体在提高原核表达菌株抗铜金属胁迫、和/或锌金属胁迫、和/或nacl胁迫、和/或过氧化氢胁迫、和/或高温胁迫中的应用；或者如本专利技术第一个方面所述的acmt2a基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白质、或者本专利技术第三个方面所述的重组表达载体在降低原核表达菌株抗低温胁迫中的应用。
8、其中，所述原核表达菌株可以是基因重组领域中常用的原核表达菌株，本专利技术对此不进行限定，比如e.coli bl21(de3)、e.coli rosetta和e.coli origamib(de3)等。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述原核表达菌株为大肠杆菌e.coli bl21(de3)。
9、本专利技术的第五个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的acmt2a基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白质、或者本专利技术第三个方面所述的重组表达载体或宿主菌在调控猕猴桃果实的发育、和/或后熟软化中的应用。
10、本专利技术的第六个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的acmt2a基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白质、或者本专利技术第三个方面所述的重组表达载体或宿主菌在调控猕猴桃对丁香假单胞菌胁迫应答中的应用。
11、本专利技术的第七个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的acmt2a基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白质、或者本专利技术第三个方面所述的重组表达载体或宿主菌在通过清除活性氧提高植物对逆境的耐受性中的应用。
12、本专利技术的第八个方面是提供一种引物对，所述引物对为：5′-tctctcacaactctctctctctc-3′和5′-tgctttgtagaaggctggtaattag-3′；或者所述引物对为：5'-gaaaaatgtcttgctgcggag-3'和r:5'-tacatctggcaccacaacgac-3'；或者所述引物对为：5'-ccggaattcatgtcttgctgcggagg-3'和5'-acgcgtcgactcatttgcaggtgcaag-3'。
13、本专利技术首次从猕猴桃中克隆了acmt2a基因的全长cdna，基因表达分析显示acmt2a基因在树皮、雌花、根、雄花和果实中表达丰度高，丁香假单胞菌侵染猕猴桃能够调控acmt2a基因的表达，且acmt2a基因表达变化与猕猴桃果实的发育和后熟软化密切相关，表明该基因参与对丁香假单胞菌胁迫应答过程，且能影响猕猴桃果实的发育和后熟软化，可作为猕猴桃转基因育种的重要靶基因。将该基因转入原核表达菌株，转基因菌株在重金属离子(cu2+、zn2+)、nacl胁迫、过氧化氢胁迫以及高温胁迫下的生长得到明显提高，在低温胁迫下的生长得到明显抑制，说明acmt2a基因编码的蛋白可通过清除活性氧提高植物(比如猕猴桃等)对逆境的耐受性。所以，该基因可作为重要的基因资源，可以在猕猴桃以及其他植物或微生物的抗逆和抗重金属胁迫基因工程中得到应用。
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1.一种猕猴桃AcMT2a基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.权利要求1所述猕猴桃AcMT2a基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.含有权利要求1所述猕猴桃AcMT2a基因编码区的重组载体或宿主菌。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述原始载体为PET28a表达载体，猕猴桃AcMT2a基因编码区位于PET28a表达载体的EcoR I和SalI两限制性内切酶位点之间。
5.如权利要求1所述的猕猴桃AcMT2a基因、或者权利要求2所述的蛋白质、或者权利要求3或4所述的重组表达载体在提高原核表达菌株抗铜金属胁迫、和/或锌金属胁迫、和/或NaCl胁迫、和/或过氧化氢胁迫、和/或高温胁迫中的应用；或者
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述原核表达菌株为大肠杆菌E.coliBL21(DE3)、E.coli Rosetta或E.coli OrigamiB(DE3)。
7.如权利要求1所述的猕猴桃AcMT2a基因、或者权利要求2所述的蛋白质
8.如权利要求1所述的猕猴桃AcMT2a基因、或者权利要求2所述的蛋白质、或者权利要求3或4所述的重组表达载体或宿主菌在调控猕猴桃对丁香假单胞菌胁迫应答中的应用。
9.如权利要求1所述的猕猴桃AcMT2a基因、或者权利要求2所述的蛋白质、或者权利要求3或4所述的重组表达载体或宿主菌在通过清除活性氧提高植物对逆境的耐受性中的应用。
10.一种引物对，其特征在于，所述引物对为：5′-TCTCTCACAACTCTCTCTCTCTC-3′和5′-TGCTTTGTAGAAGGCTGGTAATTAG-3′；或者
...【技术特征摘要】
1.一种猕猴桃acmt2a基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no:1所示。
2.权利要求1所述猕猴桃acmt2a基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如seq id no:2所示。
3.含有权利要求1所述猕猴桃acmt2a基因编码区的重组载体或宿主菌。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述原始载体为pet28a表达载体，猕猴桃acmt2a基因编码区位于pet28a表达载体的ecor i和sali两限制性内切酶位点之间。
5.如权利要求1所述的猕猴桃acmt2a基因、或者权利要求2所述的蛋白质、或者权利要求3或4所述的重组表达载体在提高原核表达菌株抗铜金属胁迫、和/或锌金属胁迫、和/或nacl胁迫、和/或过氧化氢胁迫、和/或高温胁迫中的应用；或者
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述原核表达菌株为大肠杆菌e.coli...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘林娅，何斌，杨那，赵艳妹，宋书熠，黄亚成，
申请(专利权)人：六盘水师范学院，
类型：发明
国别省市：
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