本文提供了生物工程化的免疫调节融合蛋白及其用于调节免疫应答的用途，以及改善受试者对疫苗的反应的用途或治疗疾病或病症诸如癌症或病原体感染的用途。本文提供了一种单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个CD40配体CD40L亚基(CD40L三聚体)；和(b)Fc单体肽。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
1.在一些实施方案中，本文提供了用于生物工程化的免疫调节融合蛋白的材料和方法及其用于检测、调节免疫应答和/或免疫相关病状的用途，以及用于筛选、诊断、影响、改善受试者对病原体或疫苗的反应或治疗疾病或病症诸如瘤形成、增生、癌症或病原体感染的材料和方法。
技术介绍
0、2.
技术介绍
1、免疫是涉及多种分子的多方面宿主应答。manzoor ahmad mir，第1章-共刺激和共刺激分子简介，编辑：manzoor ahmad mir，developing costimulatory molecules forimmunotherapy of diseases，academic press，2015，第1-43页，isbn 9780128025857。参与免疫应答的一种此类分子是cd40配体(cd40l)(cd154)，一种肿瘤坏死因子(tnf)超家族成员，其存在于各种细胞和组织类型中并在cd4+t细胞上高度表达并与cd40受体多肽相互作用以增强共刺激信号传导。cd40受体多肽在多种先天性和适应性细胞(包括树突状细胞和b细胞)上表达。adv drug deliv rev.2019,15；141:92-103；immunol rev.2009年5月；229(1)。cd40激动剂可以增强抗原呈递，并且是单克隆抗体应用(诸如诊断、预后和治疗)的合适靶点。cancers(basel).2021年3月15日；13(6):1302。
2、3.
技术实现思路
3、本专利技术的专利技术人理解，尤其是cd40激动剂单克隆抗体在不存在fc交联的情况下表现不佳并且显示很少的临床益处，并且此外，cd40激动剂抗体的全身施用已经与不良事件和肝毒性相关联，确定并解决了本领域对用于调节免疫应答，以及改善受试者对疫苗的反应，或治疗疾病或病症诸如癌症或病原体感染(例如，病毒感染)的工程化cd40激动剂的改进构建体的未满足的需求。因此，在一个方面，本文提供了一种单链三聚体cd40lfc融合蛋白，包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40配体cd40l亚基(cd40l三聚体)；和(b)fc单体肽。
4、在一些实施方案中，fc单体肽通过肽系链与cd40l三聚体共价连接。在一些实施方案中，肽系链包含0个至20个氨基酸。
5、在一些实施方案中，cd40配体亚基包含cd40l细胞外结构域的一部分。
6、在一些实施方案中，cd40l三聚体连接至fc单体肽的n末端。在一些实施方案中，单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含选自seq id no:1-12的任一个序列，或其片段。
7、在一些实施方案中，cd40l三聚体连接至fc单体肽的c末端。在一些实施方案中，单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含选自seq id no:13-19的任一个序列，或其片段。在一些实施方案中，单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含seq id no:16或其片段。
8、在一些实施方案中，cd40配体亚基包含选自seq id no:20-22的序列中的任一者，或其片段。
9、在一些实施方案中，fc单体肽包含人fc序列。在一些实施方案中，人fc序列包含选自免疫球蛋白igg、iga、igm、igd和ige的序列。在一些实施方案中，人fc序列包含igg序列。在一些实施方案中，igg序列选自igg1、igg2、igg3和igg4。在一些实施方案中，igg序列包含igg1序列。在一些实施方案中，igg1序列包含seq id no:30或31，或其片段。在一些实施方案中，igg序列包含igg2序列。在一些实施方案中，igg2序列包含seq id no:29或其片段。
10、在一些实施方案中，肽接头选自包含egkssgsgs(seq id no:23)和(g3s)3(seq idno:25)的组。
11、在一些实施方案中，肽系链选自由(g4s)3(seq id no:24)、(g4s)2(seq id no:26)、(g4s)4(seq id no:27)和g4s(seq id no:28)组成的组。
12、在一些实施方案中，单链三聚体cd40l fc融合蛋白与野生型cd40l相比增强cd40多肽的活化。在一些实施方案中，cd40多肽的活化增强树突状细胞、b细胞、单核细胞和巨噬细胞的免疫刺激功能。在一些实施方案中，cd40多肽的活化包括与野生型cd40l相比增强的t细胞活化。在一些实施方案中，cd40多肽的活化包括与野生型cd40l相比增强的树突状细胞活化。在一些实施方案中，单链三聚体cd40l fc融合蛋白与野生型cd40l相比增强抗肿瘤活性。
13、在另一方面，本文提供了一种包含两个本文公开的单链三聚体cd40lfc融合蛋白的二聚体。在一些实施方案中，二聚体是同源二聚体。在一些实施方案中，二聚体通过fc单体肽的缔合形成。
14、在另一方面，本文提供了一种编码单链三聚体cd40l fc融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。
15、在另一方面，本文提供了一种包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸的载体，所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。
16、在另一方面，本文提供了一种包含载体的宿主细胞，所述载体包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。
17、在另一方面，本文提供了一种包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸的宿主细胞，所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。
18、在另一方面，本文提供了一种包含药学上可接受的载体和单链三聚体cd40l融合蛋白的药物组合物，所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。
19、在另一方面，本文提供了一种包含单链三聚体cd40l融合蛋白的试剂盒，所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。
20、在一个方面，本文提供了一种包括用于提供单链三聚体cd40l融合蛋白的装置的系统，所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。在另一方面，本文提供了一种包括用于提供包含两个单链三聚体cd40l fc融合蛋白的二聚体的装置的系统，每个融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基；和(b)fc单体肽。
21、在一个方面，本文提供了一种活化cd40多肽的方法，包括使cd40多肽与本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白接触，其中所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白在结合时使cd40多肽活化。在另一方面，本文提供了一种活化cd40多肽的方法，包括使cd40多肽与包含两个本文公开的单链三聚体cd本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种包含单链三聚体CD40配体(CD40L)融合蛋白的多肽，其中所述单链三聚体CD40L融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个CD40L亚基(CD40L三聚体)，
2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述CD40L亚基包含选自SEQ ID NO:20至22的序列中的任一者，或其片段。
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述肽接头中的至少一个肽接头选自由EGKSSGSGS(SEQ ID NO:23)和(G3S)3(SEQ ID NO:25)组成的组；
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体CD40L融合蛋白包含选自SEQ ID NO:35-38的任一个序列，或其片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体CD40L融合蛋白与非来源于CD40L的肽或多肽融合。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体CD40L融合蛋白与肽系链融合；
7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体CD40L融合蛋白与Fc单体肽融合。
>8.根据权利要求7所述的多肽，其中所述Fc单体肽包含人Fc序列；9.根据权利要求7或8所述的多肽，其中所述单链三聚体CD40L融合蛋白经由肽系链与所述Fc单体肽融合；
10.根据权利要求7至9中任一项所述的多肽，其中所述CD40L三聚体连接至
11.根据权利要求1至10中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体CD40L融合蛋白：
12.根据权利要求1至11中任一项所述的多肽，其中所述多肽与药剂缀合；
13.一种单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个CD40L亚基(CD40L三聚体)；和(b)Fc单体肽。
14.根据权利要求13所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，其中所述肽接头是EGKSSGSGS(SEQ ID NO:23)或(G3S)3(SEQ ID NO:25)。
15.根据权利要求113或14所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，其中所述Fc单体肽通过肽系链与所述CD40L三聚体共价连接，任选地，其中所述肽系链包含0个至20个氨基酸，并且/或者
16.根据权利要求13至15中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，其中所述CD40配体亚基包含CD40L细胞外结构域的一部分。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，其中所述CD40L三聚体连接至
18.根据权利要求13至17中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，其中所述CD40配体亚基包含选自SEQ ID NO:20-22的序列中的任一者，或其片段。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，其中所述Fc单体肽包含人Fc序列，
20.根据权利要求13至19中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白，其中所述单链三聚体CD40L Fc融合蛋白：
21.一种二聚体，包含两个根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白；
22.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1至12中任一项所述的多肽、根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白或根据权利要求21所述的二聚体。
23.一种载体，包含根据权利要求22所述的多核苷酸。
24.一种宿主细胞，包含根据权利要求22所述的多核苷酸或根据权利要求23所述的载体。
25.一种药物组合物，包含：
26.一种试剂盒，包含根据权利要求1至12中任一项所述的多肽、根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白或根据权利要求21所述的二聚体。
27.一种用于制备以下项的方法：
28.一种系统，包括用于提供根据权利要求1至12中任一项所述的多肽、根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体CD40L Fc融合蛋白或根据权利要求21所述的二聚体的装置。
29.一种活化以下项方法：
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述方法是活化靶细胞的方法，其中所述靶细胞的活化测量为：
31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述接触还包括施用包含药学上可接受的载体和所述单链三聚体CD40L Fc融合蛋白的药物组合物；
32.一种治疗受试者的癌症的方法，包括向所述受试者施用：...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种包含单链三聚体cd40配体(cd40l)融合蛋白的多肽，其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基(cd40l三聚体)，
2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述cd40l亚基包含选自seq id no:20至22的序列中的任一者，或其片段。
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述肽接头中的至少一个肽接头选自由egkssgsgs(seq id no:23)和(g3s)3(seq id no:25)组成的组；
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白包含选自seq id no:35-38的任一个序列，或其片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白与非来源于cd40l的肽或多肽融合。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白与肽系链融合；
7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白与fc单体肽融合。
8.根据权利要求7所述的多肽，其中所述fc单体肽包含人fc序列；
9.根据权利要求7或8所述的多肽，其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白经由肽系链与所述fc单体肽融合；
10.根据权利要求7至9中任一项所述的多肽，其中所述cd40l三聚体连接至
11.根据权利要求1至10中任一项所述的多肽，其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白：
12.根据权利要求1至11中任一项所述的多肽，其中所述多肽与药剂缀合；
13.一种单链三聚体cd40l fc融合蛋白，包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基(cd40l三聚体)；和(b)fc单体肽。
14.根据权利要求13所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白，其中所述肽接头是egkssgsgs(seq id no:23)或(g3s)3(seq id no:25)。
15.根据权利要求113或14所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白，其中所述fc单体肽通过肽系链与所述cd40l三聚体共价连接，任选地，其中所述肽系链包含0个至20个氨基酸，并且/或者
16.根据权利要求13至15中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白，其中所述cd40配体亚基包含cd40l细胞外结构域的一部分。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白，其中所述cd40l三聚体连接至
18.根据权利要求13至17中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白，其中所述cd40配体亚基包含选自seq id no:20-22的序列中的任一者，或其片段。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白，其中所述fc单体肽包含人fc序列，
20.根据权利要求13至19中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白，其中所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白：
21.一种二聚体，包含两个根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白；
22.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1至12中任一项所述的多肽、根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白或根据权利要求21所述的二聚体。
23.一种载体，包含根据权利要求22所述的多核苷酸。
24.一种宿主细胞，包含根据权利要求22所述的多核苷酸或根据权利要求23所述的载体。
25.一种药物组合物，包含：
26.一种试剂盒，包含根据权利要求1至12中任一项所述的多肽、根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白或根据权利要求21所述的二聚体。
27.一种用于制备以下项的方法：
28.一种系统，包括用于提供根据权利要求1至12中任一项所述的多肽、根据权利要求13至20中任一项所述的单链三聚体cd40l fc融合蛋白或根据权利要求21所述的二聚体的装置。
29.一种活化以下项方法：
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述方法是活化靶细胞的方法，其中所述靶细胞的活化测量为：
31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述接触还包括施用包含药学上可接受的载体和所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白的药物组合物；
32.一种治疗受试者的癌症的方法，包括向所述受试者施用：
33.根据权利要求32所述的方法，还包括施用包含药学上可接受的载体和所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白的药物组合物，
34.根据权利要求32或33...
【专利技术属性】
技术研发人员：N·塔莫特，P·B·哈维拉，D·亚马达，M·A·塞普尔韦达，R·加内桑，S·辛格，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
国别省市：
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