【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、小肠执行消化、吸收、分泌、免疫屏障等多方面的功能，在此过程中，血管与小肠细胞，如小肠上皮细胞之间的相互作用至关重要。小肠类器官重演小肠生长发育过程，在形态结构、基因表达谱及功能等多个方面与体内高度一致，近年来日益成为小肠体外替代模型，在肠道发育、肠道生理等多个领域研究中发挥重要作用。
2、现有小肠类器官制备方法是基于类器官经典培养方法，其基本做法是将小肠酶解消化获得的细胞制成细胞悬液，直接与matrigel混匀后进行三维类器官培养，由于原代处于g0期的小肠上皮干细胞在基质胶上进入细胞增殖周期慢，致使用此方法进行小肠类器官培养不仅效率不高，而且速度慢，往往需要2-3周时间；更重要的是基于现有方法构建的小肠类器官缺乏血管组分，也使其在很多方面与体内存在差异。
3、专利《一种低成本小鼠肠类器官培养基及培养方法，cn202010719320.8》提供一种小鼠肠道类器官的3d培养方法，该方法无法解决现有小肠类器官构建存在的速度慢、效率并不高的问题。
技术实现思路
<...【技术保护点】
1.一种小肠类器官高效建模及血管化方法，其特征在于，将小肠分离细胞经二维贴壁培养形成大的细胞克隆后，与matrigel复合进行类器官培养，再与血管内皮细胞、matrigel复合后接种低吸板上进行培养，形成血管化的小肠类器官。
2.如权利要求1所述的小肠分离细胞二维贴壁培养，其特征在于，新鲜分离的小肠细胞接种在二维贴壁介质表面、加入含10％血清类器官培养基培养形成小肠上皮细胞克隆。
3.如权利要求1所述的与matrigel复合进行类器官培养，其特征在于，将二维培养的小肠上皮细胞克隆经分布消化后，与matrigel复合接种低吸附培养板中，加入小肠类...
【技术特征摘要】
1.一种小肠类器官高效建模及血管化方法，其特征在于，将小肠分离细胞经二维贴壁培养形成大的细胞克隆后，与matrigel复合进行类器官培养，再与血管内皮细胞、matrigel复合后接种低吸板上进行培养，形成血管化的小肠类器官。
2.如权利要求1所述的小肠分离细胞二维贴壁培养，其特征在于，新鲜分离的小肠细胞接种在二维贴壁介质表面、加入含10％血清类器官培养基培养形成小肠上皮细胞克隆。
3.如权利要求1所述的与matrigel复合进行类器官培养，其特征在于，将二维培养的小肠上皮细胞克隆经分布消化后，与matrigel复合接种低吸附培养板中，加入小肠类器官培养基进行培养。
4.如权利要求1所述的分步消化获取小肠上皮细胞，其特征在于，先用1/3体积accutase(accutase:生理盐水，体积比)去除杂细胞，再用accutase原液消化正常小肠细胞克隆团，获取单细胞悬液。
5.如权利要求2和权利要求3所述的类器官培养基，其特征在于，其成分包括：dmem/f12,100u/mlpenicil-lin/streptomycin,primocin，2mm glutamax,0.5μm a83-01,1xb27,5μm sb202190,100nm prostaglandin e2,...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵云山，杨洋，刘磊，李一伟，黄洋，张明浩，赵维婷，
申请(专利权)人：黑玉星岩国际科学技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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