【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种重组蛋白及含其的凝胶制剂。
技术介绍
1、盆底功能障碍(pelvic floor dysfunction，pfd)是指与盆底肌肉组织功能异常相关的一系列症状和解剖学变化，可出现膀胱、肛管和阴道周围的盆底肌肉不能正常工作的情况。压力性尿失禁(stress urinary incontinence,sui)、大便失禁和盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,pop)是3种最常见的症状。其他症状包括膀胱排空障碍、肠道功能障碍、性功能障碍和慢性盆腔疼痛。
2、盆底功能障碍的主要病因有：妊娠及分娩损伤；腹压增加，如慢性便秘、咳嗽、打喷嚏、举重等；先天发育异常；卵巢功能减退、衰老导致雌激素分泌减少，使盆底支持组织薄弱、松弛；营养不良导致肌肉萎缩、盆腔内筋膜松弛，失去对子宫、阴道及尿道支持作用，从而出现子宫脱垂、压力性尿失禁、胃下垂、腹壁松弛等。
3、在尿动力学检查中，膀胱的最大容量和排尿压力峰值是评价盆底功能障碍中压力性尿失禁的关键指标。
4、盆底功能障碍的一些治疗方案可使机体产生炎症和应激反应。
5、本领域技术人员熟知，局部给药制剂的安全性通常比注射剂型更高。局部给药通常只会在应用部位产生作用，而不会进入全身循环。这可以减少药物在全身引起不必要的不良事件和毒性反应的风险。相比之下，注射剂型将药物直接引入血液循环，可能导致更广泛的系统性效应。由于局部给药不会引起全身的不良事件，患者通常更容易耐受局部治疗，而不必忍受可能伴随注射剂型的不适感。
技术实现思路
1、专利技术人经过深入研究以及大量的实验验证，获得了一系列重组蛋白，可显著提高细胞产生的原胶原含量。所述重组蛋白制成凝胶敷料后，通过局部给药，可显著改善盆底功能障碍相关症状。
2、因此，在本专利技术的第一方面，提供一种蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列包含seq id no:3-10任一项所示序列。
3、在一些实施方案中，所述蛋白的氨基酸序列包含seq id no:7或seq id no:8所示序列。
4、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:3所示序列。
5、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:4所示序列。
6、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:5所示序列。
7、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:6所示序列。
8、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:7所示序列。
9、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:8所示序列。
10、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:9所示序列。
11、在一些实施方案中，所述蛋白包含seq id no:10所示序列。
12、在一些实施方案中，所述蛋白的氨基酸序列如seq id no:3-10任一项所示。
13、在一些实施方案中，所述蛋白的氨基酸序列如seq id no:7所示。
14、在一些实施方案中，所述蛋白的氨基酸序列如seq id no:8所示。
15、在一些实施方案中，所述蛋白通过以下方法制备得到：
16、合成得到含所述蛋白的编码序列的dna片段，所述编码序列通过expoptimizer进行密码子优化；然后与pet28a(+)载体分别使用blpi和xbai酶切，酶切产物通过t4 dna连接酶连接；反应液转化stbl3感受态，过夜培养，挑选阳性克隆测序鉴定；测序正确的阳性克隆培养后，提取得到所述蛋白的表达载体质粒；用同样的方法制备得到脯氨酰-4-羟化酶的表达载体质粒；
17、所述蛋白的表达载体质粒和脯氨酰-4-羟化酶的表达载体质粒(w/w 2:1)转化表达菌株e.coli bl21(de3)；在含卡那霉素的lb培养液中37℃培养至od值为0.6；加iptg至0.2mm，16℃诱导21h；离心收集菌体，裂解后超声破碎，离心，获得含所述蛋白的上清；滤膜过滤，离子色谱层析和rp-hplc纯化，洗脱液冷冻干燥，得到所述蛋白。
18、在一些实施方案中，所述蛋白的氨基酸序列如seq id no:3-10任一项所示，且所述蛋白通过以下方法制备得到：
19、合成得到含所述蛋白的编码序列的dna片段，所述编码序列通过expoptimizer在默认参数下针对e.coli表达宿主进行密码子优化；然后与pet28a(+)载体分别使用blpi和xbai酶切，酶切产物通过t4 dna连接酶连接；反应液转化stbl3感受态，过夜培养，挑选阳性克隆测序鉴定；测序正确的阳性克隆培养后，提取得到所述蛋白的表达载体质粒；用同样的方法制备得到脯氨酰-4-羟化酶的表达载体质粒；
20、所述蛋白的表达载体质粒和脯氨酰-4-羟化酶的表达载体质粒(w/w 2:1)转化表达菌株e.coli bl21(de3)；在含卡那霉素的lb培养液中37℃培养至od值为0.6；加iptg至0.2mm，16℃诱导21h；离心收集菌体，裂解后超声破碎，离心，获得含所述蛋白的上清；滤膜过滤，离子色谱层析和rp-hplc纯化，洗脱液冷冻干燥，得到所述蛋白。
21、在一些实施方案中，所述蛋白通过本专利技术实施例所述的方法制备得到。
22、在本专利技术的第二方面，提供一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如第一方面所述的蛋白。
23、在一些实施方案中，所述编码序列经过了密码子优化。
24、在一些实施方案中，所述密码子优化用于在真核或原核细胞中表达。
25、在一些实施方案中，所述原核细胞为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌。
26、在一些实施方案中，所述真核细胞为毕赤酵母、酿酒酵母或动物细胞。
27、在本专利技术的第三方面，提供一种载体，其特征在于，所述载体包含编码如第一方面所述的蛋白的核苷酸序列，以及与所述核苷酸序列连接的启动子序列。
28、在一些实施方案中，所述载体为质粒。
29、在本专利技术的第四方面，提供一种细胞，其特征在于，所述细胞包含如第三方面所述的载体。
30、在本专利技术的第五方面，提供一种医疗器械，其特征在于，所述医疗器械包含如前文所述的蛋白、核酸分子、载体或细胞。
31、在一些实施方案中，所述医疗器械任选自：创伤敷料、抑菌敷料、阴道敷料、凝胶制剂、凝胶敷料、宫颈敷料、阴茎润滑组合物、消毒液、洗液、口腔护理膏、阴道栓。
32、在一些实施方案中，所述医疗器械任选自：阴道敷料、凝胶制剂、凝胶敷料、宫颈敷料。
33、在一些实施方案中，所述医疗器械为凝胶制剂。
34、在一些实施方案中，所述医疗器械为凝胶敷料。
35、在一些实施方案中，所述医疗器械为阴道敷料。
36、在一些实施方案中，所述医疗器械为宫颈敷料。
<本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示序列；
2.如权利要求1所述的蛋白，其特征在于，所述蛋白通过以下方法制备得到：
3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的蛋白。
4.一种载体，其特征在于，所述载体包含编码权利要求1所述的蛋白的核苷酸序列，以及与所述核苷酸序列连接的启动子序列。
5.一种细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求4所述的载体。
6.一种医疗器械，其特征在于，所述医疗器械包含权利要求1所述的蛋白、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的载体或权利要求5所述的细胞。
7.组合物，所述组合物包含权利要求1所述的蛋白。
8.如权利要求7所述的组合物，所述组合物进一步包含序列如SEQ ID NO:12所述的蛋白。
9.如权利要求8所述的组合物，所述组合物包含按重量计的以下成分：
10.如权利要求1或2所述的蛋白、以及如权利要求7-9任一项所述的组合物在制备增加胶原分泌或治疗盆底功能障碍
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列包含seq id no:7或seq id no:8所示序列；
2.如权利要求1所述的蛋白，其特征在于，所述蛋白通过以下方法制备得到：
3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的蛋白。
4.一种载体，其特征在于，所述载体包含编码权利要求1所述的蛋白的核苷酸序列，以及与所述核苷酸序列连接的启动子序列。
5.一种细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求4所述的载体。
6.一种医疗器械，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：王勇，易祥，
申请(专利权)人：广西福莱明生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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