【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物活性提取，具体涉及一种蛋清高活性成分的提取方法及其产品和应用。
技术介绍
1、专利技术人在中国专利文献cn1611227a上公开了一种鸡蛋清活性抽出物之提取及活性测定技术，天然鸡蛋清中的碱性环境和某些蛋白质的阻碍作用以及该活性物质的不稳定性使得鸡蛋清活性组分鲜为人们所关注。该专利技术通过超声波处理，稀释，酸化，电泳，硫酸铵沉淀等温和方法的有机组合及应用快速且灵敏的活性测定技术从天然鸡蛋清中提取到了多功能的生物活性抽出物。该技术也适合于提取其它禽蛋蛋清生物活性物质且无需使用有机溶剂和有害化学物质。以改技术提取的蛋清活性抽出物具有刺激神经生长，促进免疫细胞和上皮纤维细胞增殖等效果。但是相对来说，该采用了通过硫酸氨处理以及电泳等复杂步骤制成，制备工艺相对较为繁杂、耗时，更重要的是大规模生产采用电泳方法设备投资高，于是成本非常高。
技术实现思路
1、有鉴于此，为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提出一种种蛋清高活性成分的提取方法及其产品和应用，该提取方法相对简单快速，且无需电泳，降低成本，且提取的是不一样的蛋清高活性成分，具有不一样的功效。
2、所采用的技术方案为：
3、本专利技术的一种蛋清高活性成分的提取方法，包括如下步骤：
4、s1.将蛋清从新鲜鸡蛋中分离出来；
5、s2.水解去除杂蛋白，尤其是大分子粘蛋白；
6、s3.透析水解液；把该上清装入透析袋，快速去除水解液中非活性成分；
7、s4.回
8、s5.将该透析后的蛋清液体用混合层析柱滤过后,即得蛋清高活性成分提取液。
9、进一步地，s2中，水解去除杂蛋白，尤其是大分子粘蛋白，是将蛋清按1：2用ph9-10的碳酸缓冲液稀释，然后再用碱性蛋白酶在特定浓度0.1％-0.5％(w/v)下，于40-50℃温度，限时水解30-120分钟，以快速切断蛋清中的一些超大分子蛋白，然后回调ph至6，再向该蛋清液中加入nac l至20wt％，搅拌均匀使完全溶解，在4-8℃静置过夜，离心去沉淀，取上清。
10、进一步地，s3中，透析水解液是把上清装入50k mco透析袋，按质量比1：5的上清液量对50vo l％甘油-pbs缓冲液，进行透析1-2小时，取出透析袋用pbs缓冲液冲洗透析袋表面后，按质量比1：10的透析袋内溶液量对pbs缓冲液，进行透析1-6小时，同样方法再透析1-2次。
11、进一步地，s3中，透析袋是30-100kd的透析袋。
12、进一步地，s5中，混合层析柱是使用羧甲基纤维素cm52层析树脂或者是聚乙烯亚胺和羧甲基纤维素共聚合而成的树脂，该树脂可以同时吸附带正电荷和负电荷的蛋白质，再通过改变流动相从同时含有正负电荷的蛋白质混合物中分离出蛋清高活性成分。
13、进一步地，所述的蛋清高活性成分的提取方法还包括s6.用考马斯亮篮法检测蛋清高活性成分提取液中蛋白质含量，如果测得蛋白质含量低于1wt％，用低温浓缩法将蛋清高活性成分提取液浓缩到1wt％-5wt％。如果浓度高于5wt％时，则可以用pbs缓冲液稀释至1wt％-5wt％，以便后续使用及保持活性稳定。
14、本专利技术的一种蛋清高活性成分，其是上述所述的提取方法提取得到的。
15、本专利技术所述的蛋清高活性成分在制备具有抗皱功效的药品或保健品中的应用。
16、蛋清高活性成分的抗皱功效检测方法，是通过检测卵清多效因子对弹性蛋白酶活性的抑制作用，来评价受试物是否具有抗皱功效。
17、皮肤中弹性蛋白的缺失是皮肤老化和出现皱纹的主要原因，而弹性蛋白酶却随着年龄增加而增加。弹性蛋白酶能催化弹性蛋白水解，因此抑制弹性蛋白酶的活性能有效减缓弹性蛋白的分解，从而延缓皮肤老化和皱纹出现，保持皮肤的弹性。
18、蛋清高活性成分的抗皱功效的检测方法是：利用卵清多效因子与弹性蛋白酶预反应后再与底物n-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-p-硝基苯胺发生反应，使其产生有色物质，然后在分光光度计410nm处测定其吸光值，再根据是否添加蛋清提取物来检测吸光值的变化，计算受蛋清提取物对弹性蛋白酶活性的抑制作用，进而来评价受试物是否具有抗皱功效。
19、本专利技术所述的蛋清高活性成分在制备具有细胞修复或延缓细胞衰老功效的药品或保健品中的应用。
20、蛋清高活性成分的细胞修复功效检测方法，其是通过细胞体外培养和观察细胞迁移的实验，来检测卵清多效因子的细胞修复活性。卵清多效因子活性检测时，按其浓度1-10％添加于细胞培养液中，并以pbs缓冲液做对照，进行体外细胞检测。所述的细胞可以使人成纤维细胞或人角质细胞。
21、蛋清高活性成分延缓细胞衰老的功效检测方法，其是通过细胞体外培养和观察细胞生存率或增殖的实验，来检测卵清多效因子延缓细胞衰老的功效。
22、本专利技术所述的蛋清高活性成分在制备具有促进细胞补水功效药品或保健品中的应用。
23、蛋清高活性成分促进细胞补水功效检测方法，其是通过细胞体外培养1-12小时，优先3-8小时，后观察细胞贴附和体积变大的实验，来检测卵清多效因子促进细胞补水活性。
24、本专利技术的有益效果在于：
25、本专利技术采用的提取方法无需电泳步骤，该提取方法相对简单快速，且无需电泳，降低成本。
26、本专利技术采用一种更简便的方法来提取蛋清高活性成分-卵清多效因子，该蛋清高活性成分的特征是具有多种功效，包括抑制弹性蛋白酶活性(抗皱)，促进细胞迁移(修复)、促进细胞内补水、延缓细胞衰老等功效。
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1.一种蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，S2中，水解去除杂蛋白，尤其是大分子粘蛋白，是将蛋清按1：2用pH9-10的碳酸缓冲液稀释，然后再用碱性蛋白酶在特定浓度0.1％-0.5％(W/V)下，于40-50℃温度，限时水解30-120分钟，以快速切断蛋清中的一些超大分子蛋白，然后回调pH至6，再向该蛋清液中加入NaCl至20wt％，搅拌均匀使完全溶解，在4-8℃静置过夜，离心去沉淀，取上清。
3.根据权利要求1所述的蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，S3中，透析水解液是把上清装入50K MCO透析袋，按质量比1：5的上清液量对50vol％甘油-PBS缓冲液，进行透析1-2小时，取出透析袋用PBS缓冲液冲洗透析袋表面后，按质量比1：10的透析袋内溶液量对PBS缓冲液，进行透析1-6小时，同样方法再透析1-2次。
4.根据权利要求1所述的蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，S3中，透析袋是30-100KD的透析袋。
5.根据权利要求1所述的蛋清高活性
6.根据权利要求1所述的蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，还包括S6.用考马斯亮篮法检测蛋清高活性成分提取液中蛋白质含量，如果测得蛋白质含量低于1wt％，用低温浓缩法将蛋清高活性成分提取液浓缩到1wt％-5wt％。
7.一种蛋清高活性成分，其是通过权利要求1-6任一所述的提取方法提取得到的。
8.权利要求7所述的蛋清高活性成分在制备具有抗皱功效的药品或保健品中的应用。
9.权利要求7所述的蛋清高活性成分在制备具有细胞修复或延缓细胞衰老功效的药品或保健品中的应用。
10.权利要求7所述的蛋清高活性成分在制备具有促进细胞补水功效药品或保健品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，s2中，水解去除杂蛋白，尤其是大分子粘蛋白，是将蛋清按1：2用ph9-10的碳酸缓冲液稀释，然后再用碱性蛋白酶在特定浓度0.1％-0.5％(w/v)下，于40-50℃温度，限时水解30-120分钟，以快速切断蛋清中的一些超大分子蛋白，然后回调ph至6，再向该蛋清液中加入nacl至20wt％，搅拌均匀使完全溶解，在4-8℃静置过夜，离心去沉淀，取上清。
3.根据权利要求1所述的蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，s3中，透析水解液是把上清装入50k mco透析袋，按质量比1：5的上清液量对50vol％甘油-pbs缓冲液，进行透析1-2小时，取出透析袋用pbs缓冲液冲洗透析袋表面后，按质量比1：10的透析袋内溶液量对pbs缓冲液，进行透析1-6小时，同样方法再透析1-2次。
4.根据权利要求1所述的蛋清高活性成分的提取方法，其特征在于，s3中，透析袋是30-1...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹潮，李永红，
申请(专利权)人：承功厦门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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