一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测试剂盒及其检测方法。包括新冠病毒抗原，流感病毒抗原，阴性对照，新冠病毒抗体阳性对照和流感病毒抗体阳性对照，抗体探测液A和抗体探测液B；所述抗体探测液A是含有预标记的一种动物抗另一种动物IgG或IgM的特异抗体的缓冲液；所述抗体探测液B是含有预标记的一种动物抗人抗兔IgG或IgM的特异抗体的缓冲液。检测样品量大，时间短，灵敏度高。灵敏度高。灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及病毒检测领域，尤其涉及一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]目前新冠病毒感染筛查主要是通过实时荧光RT-PCR技术进行核酸鉴定检测。该方法是根据目标病毒核酸基因中开放读码框和核壳蛋白来设计引物实现靶标检测。其主要原理是，将荧光能量传递技术应用于PCR仪中，在PCR的反应体系中加入荧光基团，利用获取的荧光信号积累来实时监测整个PCR进程，最终通过得到的标准曲线进行定量分析。这种检测方法理论上灵敏度高，但操作规程比较复杂，从采样、基因提取、检测，以及技术人员水平等任何一个环节出问题，都会导致巨大误差，尤其是导致假阴性。事实上，这类检测试剂盒在新冠病毒疫情早期临床诊断实践中，发现其对患者的咽拭子样品的核酸检出率只有 30-50/％，许多病例需要2-3次重复。有病例显示，患者经CT检测有明显病毒性表现，但核酸检测却显示阴性。这种假阴性检查结果不仅导致感染患者失去及早治疗机会，放归社会还会成为病毒传播源，加剧家庭和社区传播。
[0003]为了补充核酸检测缺陷的基础上，科技人员又开发了新冠病毒抗体胶体金检测卡，这种检测卡使用非常方便，5-15分钟就得到检测结果。然而，这类检测方法的灵敏度不仅比核酸检测方法差很多，更重要的是，流感病毒抗体与新冠病毒抗原蛋白之间具有显著交叉反应，这问题将可能导致把大量感染了流感病毒抗体的受试者误判为新冠病毒感染者，造成社会恐慌和不必要的医疗资源和经济的投入。r/>
技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测试剂盒及其速测方法。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测试剂盒，其特征在于，检测时，同时用新冠病毒抗原和流感病毒抗原检测同一样品中的抗体；所述试剂盒包括：新冠病毒抗原，流感病毒抗原，阴性对照，新冠病毒抗体阳性对照和流感病毒抗体阳性对照。
[0006]进一步，还包括：样品稀释液，检测板，抗体探测液，速洗液，显色液和终止液；所述检测板上含有新冠病毒抗原包被的检测孔和流感病毒抗原包被的检测孔，优选的，所述含有新冠病毒抗原包被的检测孔和流感病毒抗原包被的检测孔中，新冠病毒抗原包被用的浓度和流感病毒抗原包被用的浓度基本一致，都在0.01ug-10ug/ml之间；更优选的，浓度在 0.1ug-1ug/ml之间；但新冠病毒抗原和流感病毒抗原两者的包被量误差在10％以内。
[0007]进一步，所述抗体探测液包括：抗体探测液A和抗体探测液B；所述抗体探测液A是含有预标记的一种动物抗另一种动物IgG或IgM的特异抗体的缓冲液；所述抗体探测液B是
含有预标记的一种动物抗人抗兔IgG或IgM的特异抗体的缓冲液。
[0008]进一步，所述新冠病毒抗体阳性对照是一种动物源抗新冠病毒抗原的抗体；所述流感病毒抗体阳性对照是一种动物源抗流感病毒抗原的抗体；所述的新冠病毒抗原是灭活新冠病毒或新冠病毒结构蛋白，所述的结构蛋白是单一的新冠病毒蛋白,优选的，是N蛋白、S蛋白，或多个新冠病毒蛋白的组合；所述流感病毒抗原是灭活的流感病毒或流感病毒结构蛋白，所述的结构蛋白是单一的流感病毒蛋白或多个流感病毒抗原蛋白的组合；所述的结构蛋白是基因重组的或从灭活病毒中提取的。
[0009]进一步，所述新冠病毒抗体阳性对照为将动物源抗新冠病毒的抗体结构中Fc区人源化的抗体，流感病毒抗体阳性对照为将动物源抗流感病毒的抗体结构中Fc区人源化的抗体；优选的，所述动物源抗新冠病毒的抗体是鼠源或兔源抗新冠病毒的抗体，动物源抗流感病毒的抗体是鼠源或兔源抗流感病毒的抗体。
[0010]进一步，所述新冠病毒抗体阳性对照和流感病毒抗体阳性对照的浓度在0.001～ 100ng/ml之间；优选地，浓度在0.1～10ng/ml之间，溶解在2％BSA-PBS缓冲液中。
[0011]进一步，所述抗体探测液A和抗体探测液B中的特异抗体是经过筛选的特殊二级单克隆抗体，该特殊单克隆二级抗体的特征是具备在检测混合液中能和一级抗体结合而不影响该一级抗体与抗原结合的能力；
[0012]所述抗体探测液A和抗体探测液B中的抗体分别是HRP预标记的两个单克隆二级特异抗体，其中抗体的浓度在0.001ug-1ug/ml之间；优选地，抗体的浓度在0.1ug-0.5ug/ml之间，溶解在2％BSA-PBS缓冲液中。
[0013]本专利技术还提供一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测方法，其特征在于，使用了所述的速测试剂盒。
[0014]进一步，检测步骤为，
[0015]加样：将对照品及稀释后的待测样品，优选的，稀释1-5000倍，更优选的，稀释10-1000 倍；各取等量的两份并分别加到新冠病毒抗原包被的检测孔和流感病毒抗原包被的检测板的检测孔中；所述对照品包括阴性对照、新冠病毒抗体阳性对照和流感病毒抗体阳性对照；
[0016]抗体-抗原反应：在每个检测孔中加入等量的抗体探测液，其中，对照品的检测孔加抗体探测液A，待测样品的检测孔加抗体探测液B；如果新冠病毒抗体阳性对照或流感病毒抗体阳性对照中的抗体为Fc区人源化抗体时，全部检测孔都只使用抗体探测液B；然后，混匀，室温静置孵育30-60分钟；
[0017]洗板：倒空各检测孔中的液体，加入速洗液晃动数次后倒空，如此重复洗孔1-3次；
[0018]显色及读板：在每个检测孔中，加入等量的TMB显色液，室温静置1-10分钟直至添加新冠病毒抗体阳性对照或流感病毒抗体阳性对照的各孔显出蓝色为止；然后用酶标仪在波长 370m处测定吸光率OD370，或者，先向每个孔中加入显色终止液，终止反应后在450nm波长下测吸光率OD450；
[0019]结果分析：根据读板结果,以测得对照组的OD值为参照，对每个受试样品进行如下分析，
[0020]检测时，将检测板按矩阵划区，新冠病毒抗原包被的设为1列，流感病毒抗原包被的设为2列；A行为阴性对照，B行为新冠抗体阳性对照，C行为流感抗体阳性对照，D-G行为样
品，H行为空白；
[0021]实验正常判定：两组的阴性对照A1和A2相近，并接近空白对照值；新冠病毒抗原组的阳性对照B1应该远大于阴性对照A1，一般B1应该大于A1值5-10倍以上；流感病毒抗原组的阳性对照C2应该远大于阴性对照A2，一般C2应该大于A2值5-10倍以上；B行的新冠抗体阳性对照在B1孔的OD值应大于其在B2孔的OD值，一般B1应该大于B2值1-10倍以上；而C行的流感抗体阳性对照在C2孔的OD值应大于其在C1孔的OD值，一般C2应该大于C1 值1-10倍以上；在此基础上进一步作如下判定：阴性判定：如果某一受试样品的OD值≤新冠病毒抗原组的阴性对照，则该受试样品为新冠病毒抗抗体阴性；同理，如果某一受试样品的OD值≤流感病毒抗原组的阴性对照，则该受试样品为流感病毒抗抗体阴性；
[0022]阳性判定：如果某一受试样品的O本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测试剂盒，其特征在于，检测时，同时用新冠病毒抗原和流感病毒抗原检测同一样品中的抗体；所述试剂盒包括：新冠病毒抗原，流感病毒抗原，阴性对照，新冠病毒抗体阳性对照和流感病毒抗体阳性对照。2.如权利要求1所述的速测试剂盒，其特征在于，还包括：样品稀释液，检测板，抗体探测液，速洗液，显色液和终止液；所述检测板上含有新冠病毒抗原包被的检测孔和流感病毒抗原包被的检测孔，优选的，所述含有新冠病毒抗原包被的检测孔和流感病毒抗原包被的检测孔中，新冠病毒抗原包被用的浓度和流感病毒抗原包被用的浓度基本一致，都在0.01ug-10ug/ml之间；更优选的，浓度在0.1ug-1ug/ml之间；但新冠病毒抗原和流感病毒抗原两者的包被量误差在10％以内。3.如权利要求2所述的速测试剂盒，其特征在于，所述抗体探测液包括：抗体探测液A和抗体探测液B；所述抗体探测液A是含有预标记的一种动物抗另一种动物IgG或IgM的特异抗体的缓冲液；所述抗体探测液B是含有预标记的一种动物抗人抗兔IgG或IgM的特异抗体的缓冲液。4.如权利要求1所述的速测试剂盒，其特征在于，所述新冠病毒抗体阳性对照是一种动物源抗新冠病毒抗原的抗体；所述流感病毒抗体阳性对照是一种动物源抗流感病毒抗原的抗体；所述的新冠病毒抗原是灭活新冠病毒或新冠病毒结构蛋白，所述的结构蛋白是单一的新冠病毒蛋白,优选的，是N蛋白、S蛋白，或多个新冠病毒蛋白的组合；所述流感病毒抗原是灭活的流感病毒或流感病毒结构蛋白，所述的结构蛋白是单一的流感病毒蛋白或多个流感病毒抗原蛋白的组合；所述的结构蛋白是基因重组的或从灭活病毒中提取的。5.如权利要求4所述的速测试剂盒，其特征在于，所述新冠病毒抗体阳性对照为将动物源抗新冠病毒的抗体结构中Fc区人源化的抗体，流感病毒抗体阳性对照为将动物源抗流感病毒的抗体结构中Fc区人源化的抗体；优选的，所述动物源抗新冠病毒的抗体是鼠源或兔源抗新冠病毒的抗体，动物源抗流感病毒的抗体是鼠源或兔源抗流感病毒的抗体。6.如权利要求1所述的速测试剂盒，其特征在于，所述新冠病毒抗体阳性对照和流感病毒抗体阳性对照的浓度在0.001～100ng/ml之间；优选地，浓度在0.1～10ng/ml之间，溶解在2％BSA-PBS缓冲液中。7.如权利要求3所述的速测试剂盒，其特征在于，所述抗体探测液A和抗体探测液B中的特异抗体是经过筛选的特殊二级单克隆抗体，该特殊单克隆二级抗体的特征是具备在检测混合液中能和一级抗体结合而不影响该一级抗体与抗原结合的能力；所述抗体探测液A和抗体探测液B中的抗体分别是HRP预标记的两个单克隆二级特异抗体，其中抗体的浓度在0.001ug-1ug/ml之间；优选地，抗体的浓度在0.1ug-0.5ug/ml之间，溶解在2％BSA-PBS缓冲液中。8.一种区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测方法，其特征在于，使用了权利要求1-7任一项所述的速测试剂盒。9.如权利要求8所述区别新冠病毒抗体和流感病毒抗体的速测方法，其特征在于，检测步骤为，加样：将对照品及稀释后的待测样品，优选的，稀释1-5000倍，更优选的，稀释10-1000倍；各取等量的两份并分别加到新冠病毒抗原包被的检测孔和流感病毒抗原包被的检测板的检测孔中；所述对照品包括阴性对照、新冠病毒抗体阳性对照和流感病毒抗体阳性对照；
抗体-抗原反应：在每个检测孔中加入等量的抗体探测液，其中，对照品的检测孔加抗体探测液A，待测样品的检测孔加抗体探测液B；如果新冠病毒抗体阳性对照或流感病毒抗体阳性对照中的抗体为Fc区人源化抗体时，全部检测孔都只使用抗体探测液B；然后，混匀，室温静置孵育30-60分钟；洗板：倒空各检测孔中的液体，加入速洗液晃动数次后倒空，如此重复洗孔1-3次；显色及读板：在每个检测孔中，加入等量的TMB显色液，室温静置1-10分钟直至添加新冠病毒抗体阳性对照或流感病毒抗体阳性...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹潮，朱征，
申请(专利权)人：承功厦门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：