【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，涉及核酸适配体，尤其涉及一种特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体及应用。
技术介绍
1、黄曲霉毒素(aflatoxin)是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的一系列双呋喃环类化合物。它包括约20种毒素，其中黄曲霉毒素b1(aflatoxin b1)在所有黄曲霉毒素中毒性最大。黄曲霉毒素b1具有很强的致癌、致突变和致畸特性，并且在加热时也很稳定。它在湿热地区食品和饲料中出现的机率最高，花生、玉米、谷物和油很容易被黄曲霉毒素b1污染，被黄曲霉毒素b1污染的食物可通过食物链进入体内并积聚，导致肝脏慢性损害甚至死亡。
2、黄曲霉毒素b1已被国际癌症研究机构列为i类致癌物，世卫组织和各国卫生组织都对其在各种食品和农产品中的含量做了明确规定，对黄曲霉毒素b1的检出是关于人的生命安全的重要屏障。目前针对黄曲霉毒素b1的检测方法是多样的，传统的仪器方法如高效液相色谱(hplc)和液相色谱-质谱(lc-ms)，但这些方法需要训练有素的人员进行操作，仪器成本高昂且耗时。而基于elisa的试剂盒以及相关的免疫传感器的各种产品都可以在市场上购买。然而抗体的生产成本、批次稳定性、交叉反应敏感性、时间消耗、假阳性或假阴性结果和基质干扰效应方面限制了它们的广泛使用。
3、近年来，核酸适配体(aptamer)已成为一种新的生物传感元件，用于检测从离子到细胞的分析物。核酸适配体是指通过指数富集的配基系统进化技术(selex)筛选分离得到的dna或者rna分子，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体，本专利技术首先获得高亲和力，高特异性，分子量低，易于修饰的黄曲霉毒素b1核酸适配体，取代复杂的质谱仪器以及抗体。
2、本专利技术还提供了上述核酸适配体的应用，利用适配体荧光竞争检测黄曲霉毒素b1含量的方法。
3、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
4、本专利技术提供了一种特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体，包括seq idno.1所示的核苷酸序列；或者，与seq id no.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核苷酸序列；或者由seq id no.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核苷酸序列。
5、作为本专利技术的一种优选方案，所述具有高同源性是指与seq id no.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
6、作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。
7、作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持亲和力。
8、作为本专利技术的一种优选方案，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连接同位素修饰。
9、本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可对上述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置进行修饰，例如，磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或连接同位素化等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合黄曲霉毒素b1小分子的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
10、作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持亲和力。
11、作为本专利技术的一种优选方案，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、治疗性标记物、生物素标记物、地高辛标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、sirna标记物或酶标记物。
12、本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可在上述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光物质，放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、sirna或酶标记等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合黄曲霉毒素b1小分子的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
13、本专利技术还提供了上述的特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体在检测黄曲霉毒素b1含量上的应用。
14、作为本专利技术的一种优选方案，采用荧光竞争法检测黄曲霉毒素b1小分子的含量。
15、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
16、1)核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针。针对于黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体还没有人公布且没有人应用该适配体，因此，本领域对针对黄曲霉毒素b1小分子有高结合亲和力的核酸适配体存在需求。
17、2)核酸适配体相较于抗体，更稳定，由于是化学合成，批间差异几乎没有；并将该核酸适配体成功用于黄曲霉毒素b1小分子的检测。
18、3)本专利技术得到的核酸适配体具有特异性高、稳定性高、方便合成且分子量低易于修饰，可以取代复杂的质谱仪器以及抗体。
19、4)本专利技术还提供了能够与黄曲霉毒素b1特异性结合的核酸适配体来对黄曲霉毒素b1进行检测，这将为黄曲霉毒素b1的检测提供新的方法。
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1.一种特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体，其特征在于，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述一种特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述具有高同源性是指与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
3.根据权利要求1或2所述一种特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。
4.根据权利要求1或2所述一种特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持亲和力。
5.根据权利要求4所述一种特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述碱基修饰为硫代修
6.根据权利要求1或2所述一种特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持亲和力。
7.根据权利要求6所述一种特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、治疗性标记物、生物素标记物、地高辛标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、siRNA标记物或酶标记物。
8.权利要求1-7任一项所述的特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体的应用，其特征在于，所述特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体在检测黄曲霉毒素B1含量上的应用。
9.根据权利要求8所述的特异性结合黄曲霉毒素B1小分子的核酸适配体的应用，其特征在于，采用荧光竞争法检测黄曲霉毒素B1小分子的含量。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体，其特征在于，包括seq id no.1所示的核苷酸序列；或者，与seq id no.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核苷酸序列；或者由seq id no.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述一种特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述具有高同源性是指与seq id no.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
3.根据权利要求1或2所述一种特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。
4.根据权利要求1或2所述一种特异性结合黄曲霉毒素b1小分子的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持亲和力。
5.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴超超，牛成镇，高强，
申请(专利权)人：杭州佰辰医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：
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