本发明专利技术公开了一种从阴地蕨中提取的木犀草素、阴地蕨素等提取物在抗肿瘤药物中的新用途，该提取物具有抗肿瘤转移作用，具体表现为抑制自发性肿瘤转移和实验性肿瘤转移，可用于制备抗肿瘤转移药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药提取物的新用途，具体涉及阴地蕨提取物在制备抗肿瘤转移药物 中的应用。
技术介绍
国际癌症研究中心(IARC)最新报告，全球癌症病人数以年均3% -5%的速度递 增，癌症已成为全球最大的公共卫生问题。世界卫生组织(WHO)预计2007年到2030年期 间，癌症新发病例数将增加37% (由1130万例增至1550万例)，死亡人数增加45% (由 790万人增至1150万人)。由此可见，恶性肿瘤是目前威胁人类健康的重要疾病，其侵袭和 转移的特性是导致临床上大多数肿瘤患者死亡的主要因素。因此，研究出安全、有效的抗肿 瘤转移新药具有重要的实践意义。癌症严重威胁人类健康，是世界各国面临的重要社会问 题之一。近年来，中药或天然药物抗肿瘤作用的研究已成为新热点。王光凤等采用多种肿瘤模型，研究橘皮中提取的黄酮化合物川陈皮素的抗肿瘤作 用。结果显示，川陈皮素8 32mg/kg小鼠黑色素瘤B16的抑瘤率为42. 24% 65. 95%, 对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率为38. 84% 59. 09%;对小鼠S180肉瘤的抑瘤率为36. 02% 45. 98%。川陈皮素与小剂量的紫杉醇、丝裂霉素、52氟尿嘧啶、顺钼和阿霉素联用时，表现 明显的协同效应。川陈皮素对小鼠Lewis肺癌腋皮下接种肺转移的抑制率为33. 63% 38. 94% ；对小鼠Colon26结肠癌腹腔接种腹膜转移的抑制率为37. 74% 43. 40%。(王 光凤，王小晨，肖璘，等.柑橘黄酮川陈皮素的抗肿瘤作用研究，中草药，2007,38(11) 1694-1697)，但以上研究都只能对某种肿瘤细胞发挥作用，研究还不够深入。
技术实现思路
专利技术目的本专利技术的目的在于提供阴地蕨提取物的新用途，即在制药领域中的新 用途。技术方案本专利技术涉及阴地蕨提取物在制备抗肿瘤转移药物中的应用。为了更好地理解本专利技术的实质，下面将阴地蕨提取物的药理试验及实验结果来说 明其在制药领域中的新用途。以下是阴地蕨提取物抗肿瘤转移作用的研究，实验方法及结果如下一、阴地蕨提取物的制备取处方量的阴地蕨药材，加入8倍药材重量的体积浓度为70%乙醇进行加热回 流，回流0. 5小时，重复一次，合并乙醇提取液，浓缩至相对密度1. 10 1. 25(90 95°C )， 的浸膏，干燥，粉碎成干浸膏粉。二、阴地蕨提取物对自发性B16F10黑色素瘤转移模型的影响1.实验材料1.1实验动物与细胞3清洁级C57BL/6小鼠(雌性，6_8周龄，16_20g)，上海斯莱克实验动物有限责任公 司，许可证号SCXK (沪)2007-0005 ；B16F10黑色素瘤细胞株。1.2实验药物阴地蕨提取物，福建省立医院，批号090602。1.3实验试剂DMEM(美国GIBC0公司批号1340114)，PBS(实验室自制)，小牛血清(天津 市洋生物制品科技有限公司批号:QWTC0701), Trypsin(AMRESC0公司批号=2009/08) EDTA(AMRESC0公司批号0105)，甲醛(上海久亿化学试剂有限公司批号20070610)，生理 盐水(上海华源长富药业有限公司批号070405045)，NaHC03(南京化学试剂有限公司批 号050480039)，液体石蜡(上海久亿化学试剂有限公司批号20040701)。1.4实验器材 莱卡倒置荧光显微镜(德国莱卡公司型号DM1L)，精密移液器(法国吉尔森公 司型号P2)，全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号MLS-3020)，超净工作台(苏净集 团安泰公司制造型号SW-CJ-ZFD)，超低温冰箱(美国纽艾尔公司型号Nu-6511)，C02培 养箱(FORMA型号3111)，纯水仪(美国Spring公司型号S/N 020579)，电子天平(德 国赛多利斯有限公司型号BT323S)，台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号 DHG9123A)，冰箱(西门子公司型号KG18V21TI)，液氮罐(CBS型号:2001)，离心机(上海安 亭科学仪器厂型号KA-1000)，PH计(HANNA公司型号HI_221)，注射器。2.实验方法2. 1制备B16F10细胞悬液常规培养B16F10肿瘤细胞，实验前4-5天，按1 10细胞传代于细胞培养瓶中， 以免细胞生长过度而出现不完全融合。每个培养瓶大约含6-8 X 106细胞，取对数生长期的 细胞，弃去培养液，用PBS洗净，加入lmL 0. 25%胰酶+0. 02% EDTA消化液，放入细胞培养 箱中，l-3min后，轻敲培养瓶使细胞脱落。加10mL DMEM，用移液管吹打细胞，获得单细胞悬 液，转入50mL聚丙烯离心管。离心细胞(1200rpmX10min)，然后用PBS洗两遍。用苔盼蓝 计数细胞，调整细胞浓度为lX107/mL。2. 3复制B16F10自发性肿瘤转移模型每只C57BL/6小鼠左后肢足垫皮下注射含5 X 105个B16F10细胞的悬液0. 05mL, 这些小鼠每五天称一次体重。于接种后第八天按照左足垫上原发瘤的大小将小鼠随机分为 四组模型组对照组(生理盐水组)、阴地蕨提取物低剂量组(2g/kg小鼠体重)、阴地蕨提 取物中剂量组(4mg/kg小鼠体重)、阴地蕨提取物高剂量组(6g/kg小鼠体重)，每组动物数 为10只。从接种的第九天开始各组灌胃给予相应剂量的药物，模型组给予相应的生理盐 水，每日一次，直至处死动物，采集标本。在接种后第23天，麻醉小鼠，截除荷瘤下肢，10% PBS-福尔马林固定原发瘤组织，称取原发肿瘤重量以及用直尺测量原发瘤的长轴(L1)和 纵轴(L2)，按照以下公式计算原发瘤的体积0.5236XL1X(L2)2。切除原发灶后22天处 死小鼠，取出肺，避免镊子触及脏器表面损伤组织，用PBS洗净组织。10% PBS-福尔马林固 定肺组织，称取肺重，拍照并且在解剖显微镜下计算肺肿瘤结节数。3.实验结果3. 1阴地蕨提取物对B16F10黑色素瘤自发性转移模型肺转移的影响实验结果采用Excel统计软件学生t检验进行检验，由实验数据可以看出，阴地蕨 提取物各剂量组与对照组相比对黑色素瘤自发性转移模型的肺转移结节数均有抑制作用， 且呈现剂量相关性阴地蕨提取物2g/kg剂量组(P < 0. 05)、阴地蕨提取物4g/kg剂量组 (P < 0. 01)、阴地蕨提取物6g/kg剂量组(P < 0. 01)。对于肺重的影响，阴地蕨提取物6g/ kg剂量组的肿瘤重量明显低于对照组的肺重(P < 0. 01)，其他两组无明显作用。3. 2阴地蕨提取物对B16F10黑色素瘤原发位肿瘤体积和重量的影响从表1-2可以看出，与生理盐水组相比，阴地蕨提取物对于接种B16F10黑色素瘤 细胞后的小鼠足垫部的原发位肿瘤无论是体积以及重量都没有明显的影响作用。4.结论阴地蕨提取物能够抑制B16F10黑色素瘤肺转移，而且也抑制转移灶的生长，但是 对原发肿瘤细胞增殖没有影响，从小鼠体重变化可以看出，阴地蕨提取物的毒副作用很小， 为今后体内安全用药提供基础。三、阴地蕨提取物对B16F10黑色素瘤细胞实验性肺转移影响1.实验材料同前2.实验方法2. 1制备细胞悬液同前2. 2复制B16F10实验性肿瘤转本文档来自技高网...
【技术保护点】
阴地蕨提取物在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王少明，阮君山，庄捷，王凌，
申请(专利权)人：福建省立医院，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]
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