【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及恒温扩增荧光检测，具体涉及一种生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统。
技术介绍
1、性传播疾病(sexually transmitted diseases,std)是一类严重危害人类健康的疾病，其发病率逐年增高，尤其在15～25岁的人群中，世界卫生组织已把std列为一类可以治疗的重要性仅次于癌症的妇科疾病。全球每天逾百万人感染性传播疾病，多数为无症状。每年估计有3.74亿人新增感染以下四种性传播疾病中的一种：衣原体疾病、淋病、梅毒和滴虫病。此外，据估计，世界范围内有1/7以上的妇女感染了人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，hpv)；全世界每年分别诊断出约1.28亿和8200万新发沙眼衣原体和淋病奈瑟菌病例。在我国，性传播感染的现状也不容乐观：梅毒、淋病是国家法定传染病中发病数居前5位的病种；淋病发病总人数127803人，发病率为9/10万；2008～2017年中国生殖器疱疹报告发病率为6.14/10万～8.65/10万。
2、性传播疾病具有以下特点：1.无症状感染人群占比多：大部分性传播感染通常不会引起症状或可能有很长的无症状期，尤其是低危人群更不易发现，可能会在性接触或妊娠期间不知不觉地水平或垂直传播。如感染淋病奈瑟菌(neisseria gonorrhoeae，ng)后，10％男性感染者无症状，50％女性感染者无症状；感染沙眼衣原体(chlamydiatrachomatis，ct)后，50％男性感染者无症状，70％女性感染者无症状。2.交叉混合感染率高：如阴道毛滴虫病常与沙眼衣原体感
3、性传播感染通过污名化、不育症、癌症和妊娠并发症对性健康和生殖健康产生直接影响，并可能增加感染艾滋病毒的风险。由于std对患者及其性伴所产生的生理和心理问题，对优生优育的危害，为了预防和控制该类疾病的发生和发展，为患者提供早期的治疗，使患者早日康复，std的早期诊断成为关键。
4、沙眼衣原体(chlamydia trachomatis，ct)、淋病奈瑟菌(neisseria gonorrhoeae，ng)、解脲脲原体(ureaplasma urealyticum，uu)、生殖支原体(mycoplas magenitalium，mg)、人型支原体(mycoplasma hominis，mh)是常见的生殖道感染病原体，目前在实验室的检测方法主要为显微镜检查、细胞培养法、血清学检测、核酸检测等。
5、细胞培养法(培养法)是沙眼衣原体(ct)、淋病奈瑟菌(ng)、解脲脲原体(uu)、生殖支原体(mg)、人型支原体(mh)等疾病的金标准，一般需要数小时或几天才能得到结果，且需要完善的实验设备，有操作复杂、耗时长等缺点，很难在临床工作特别是基层医疗单位应用和推广。
6、分子生物学的发展为std等传染病的诊断研究提供了新的发展机遇和挑战。申请号为202010081192.9的中国专利技术专利公开了一种快速检测沙眼衣原体的rda方法及试剂盒，该试剂盒基于rda(重组酶依赖型扩增技术)技术扩增病原核酸，同时加入特异性的荧光探针检测产物，检测快速简便。但是试剂中所使用的原料酶较多，包括重组酶、单链dna结合蛋白、链置换dna聚合酶等，试剂的成本高，不利于大规模生产和推广。
7、核酸检测的敏感性高于细胞培养法，适用于各种类型临床样本的检测，且检测周期短。应用较多的是pcr荧光探针法和pcr-杂交膜法，pcr的敏感性和探针杂交的特异性合二为一，灵敏度及特异性均很高，为核酸检测的主流技术。但针对病原的pcr检测需要配套的仪器和专业的实验室，对人员的要求较高，存在产物污染的风险，且应用场景不灵活。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种灵敏度高，特异性高，不易产生污染且应用场景灵活的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，包括微流控芯片，所述微流控芯片包括加样腔和至少一个反应腔，所述加样腔与反应腔通过缓冲腔和/或流道连通，每个所述反应腔内设有冻干球，所述冻干球包括扩增体系和消泡剂，所述扩增体系包括引物组、探针组、bst dna聚合酶和rnase hii，每个所述反应腔中的引物组至少包括两个靶标，所述探针组包括至少两个探针，所述探针的序列中包括至少一个rna碱基。
3、本专利技术的有益效果在于：本专利技术的恒温荧光检测系统将lamp技术、荧光探针技术、冻干技术与微流控芯片技术的结合应用，探针中内嵌rna碱基，当探针与单链dna杂交形成双链dna时，体系中的rnase hii特异性地识别双链dna中的rna碱基并水解其5’方向dna碱基的磷酸二酯键，使探针发生断裂产生荧光信号实现荧光检测。本专利技术的恒温荧光检测系统具有以下优势：
4、(1)试剂冻干后常温2～30℃储存，试剂储存要求低，避免了运输或储存不当导致的试剂失效。
5、(2)微流控芯片小巧、便携，降低了运输成本与储存成本。通过应用微流控芯片，可在没有任何精密仪器的条件下，实现核酸定性检测，为应对公共卫生突发事件提供更全面的信息。
6、(3)lamp技术与荧光探针技术相结合，可以提升特异性，降低假阳性概率。
7、(4)lamp核酸扩增与微流控芯片的联合使用可省去其他检测方法(如常规pcr法或常规lamp法)所必须的提取过程，大大缩短了总体检测时间，在10～35min内即可获取结果。
8、(5)本专利技术在lamp法的基础上，采用2个靶标设计引物，相较于常规的一个靶标，检测灵敏度更高。
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1.一种生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，包括微流控芯片，所述微流控芯片包括加样腔和至少一个反应腔，所述加样腔通过缓冲腔和/或流道与反应腔连通，每个所述反应腔内设有冻干球，所述冻干球包括扩增体系和消泡剂，所述扩增体系包括引物组、探针组、BstDNA聚合酶和RNaseHII，每个所述反应腔中的引物组至少包括两个靶标，所述探针组包括至少两个探针，所述探针的序列中包括至少一个RNA碱基。
2.根据权利要求1所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，同一个所述反应腔中探针的淬灭基团相同，同一个所述反应腔中探针的荧光基团相同。
3.根据权利要求1所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，淬灭基团和荧光基团分别位于探针的两端或位于RNA碱基的两侧。
4.根据权利要求3所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，淬灭基团和荧光基团分别位于RNA碱基的两侧时，淬灭基团和荧光基团的距离为5～8bp。
5.根据权利要求3所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，淬灭基团和荧光基团分别位于探针的
6.根据权利要求1所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，所述探针中GC含量为40～60％，连续相同碱基＜5，连续10个碱基中相同碱基数＜7个，且20个碱基中任意两种碱基数量之和＜16。
7.根据权利要求1所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，所述引物组中每对引物连续互补AT碱基≤4对，连续互补GC碱基≤3对，自由能≤7。
8.根据权利要求1所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，所述反应腔内对应的生殖道感染病原体为沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲脲原体、生殖支原体和人型支原体中的任意一种。
9.根据权利要求8所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，所述生殖道感染病原体为沙眼衣原体时，所述引物组的靶标为ORF2和gyrA基因，所述引物组由SEQID NO:1～SEQ ID NO:12所示的12条引物组成，所述探针组由SEQ ID NO:13～SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:70～SEQ ID NO:71所示的2条探针组成；
...【技术特征摘要】
1.一种生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，包括微流控芯片，所述微流控芯片包括加样腔和至少一个反应腔，所述加样腔通过缓冲腔和/或流道与反应腔连通，每个所述反应腔内设有冻干球，所述冻干球包括扩增体系和消泡剂，所述扩增体系包括引物组、探针组、bstdna聚合酶和rnasehii，每个所述反应腔中的引物组至少包括两个靶标，所述探针组包括至少两个探针，所述探针的序列中包括至少一个rna碱基。
2.根据权利要求1所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，同一个所述反应腔中探针的淬灭基团相同，同一个所述反应腔中探针的荧光基团相同。
3.根据权利要求1所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，淬灭基团和荧光基团分别位于探针的两端或位于rna碱基的两侧。
4.根据权利要求3所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，淬灭基团和荧光基团分别位于rna碱基的两侧时，淬灭基团和荧光基团的距离为5～8bp。
5.根据权利要求3所述的生殖道感染病原体的恒温荧光检测系统，其特征在于，淬灭基团和荧光基团分别位于探针的两端...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭文浒，王红，
申请(专利权)人：福州奥吉芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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