【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种恒温荧光检测体系。
技术介绍
1、近年来基于等温扩增的核酸检测技术有所发展，等温扩增包括采用单一温度扩增，无需仪器进行复杂的温度变化控制，具有装机成本低，操作简便等优点，适宜在基层医院、防控现场以及家庭中使用。环介导核酸等温扩增技术(lamp)、滚环扩增技术(rca)、单引物等温扩增(spia)、依赖解旋酶的等温扩增技术(hda)、重组酶扩增(rpa)等。
2、但是等温扩增技术对引物设计要求高，敏感性强，容易产生假阳性结果，限制了其在病原体检测应用和推广。专利cn110885905a开发了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与mgf360505r基因缺失株lamp检测引物及其试剂盒，所述专利采用lamp技术分别针对非洲猪瘟病毒野毒株保守的衣壳蛋白基因p72(b646l)序列和非洲猪瘟mgf360505r基因缺失株第2794235500位缺失区两侧设计引物，能特异性的检测出该非洲猪瘟mgf360505r基因缺失株。但该专利所使用的lamp的方法使用荧光变色肉眼判别结果，容易产生非特异扩增导致假阳性结果，且肉眼观察颜色判读结果导致判读结果不准的风险高。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种特异性强、灵敏度高的恒温荧光检测体系。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种恒温荧光检测体系，包括经荧光标记的探针和能够水解探针的酶，所述探针上修饰有荧光基团和淬灭基团。
3、本专利技术的有益效果在于
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1.一种恒温荧光检测体系，其特征在于，包括经荧光标记的探针和能够水解探针的酶，所述探针上修饰有荧光基团和淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述酶为全长的Bst DNA聚合酶。
3.根据权利要求2所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针的两端分别修饰荧光基团和淬灭基团。
4.根据权利要求2所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，探针5’端和3’端包含一段6～10nt的互补序列。
5.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述酶为RNase HII时，所述探针的序列中包括至少一个RNA碱基。
6.根据权利要求5所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述RNA碱基为单独的一个，或连续的2～5个。
7.根据权利要求5所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述RNA碱基的两端或者探针的两端分别修饰荧光基团和淬灭基团，荧光基团与淬灭基团之间的距离不少于5个碱基。
8.根据权利要求7所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针的两端分别修饰荧光基团和淬灭基团时，在探针5’
9.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针对应的靶标为RNA序列时，所述检测试剂盒中还包括RNA酶抑制剂。
10.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，在与LAMP技术连用时，所述探针的靶向区域在序列F1的靶向区域与序列B1c的靶向区域之间，并不包含序列F1的靶向区域；
11.根据权利要求10所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针与环引物的靶向区域部分相同或者完全相同时，所述探针的靶向区域在序列F2的靶向区域与序列F1的靶向区域之间，并且不包含序列F2的靶向区域；
12.根据权利要求10所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针的序列中每20个碱基中的SNP数量≤2。
13.根据权利要求10所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针的Tm值为60～66℃，所述探针长度为15～30nt。
14.根据权利要求1任一所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，在与LAMP技术连用时，所述探针包括第一探针和第二探针，所述第一探针的靶向区域在序列F1的靶向区域与序列B1c的靶向区域之间，并不包含序列F1的靶向区域；
15.根据权利要求14所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述第二探针的靶向区域在序列F2的靶向区域与序列F1的靶向区域之间，并且不包含序列F2的靶向区域；
16.根据权利要求14所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述第一探针和第二探针的序列中每20个碱基中的SNP数量≤2。
17.根据权利要求14所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述第一探针和第二探针的Tm值为60～66℃，所述探针长度为15～30nt。
18.根据权利要求14所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述第二探针不可与环引物的序列互补。
19.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，还包括引物组，所述引物组中包括内引物，所述内引物中引入多聚胸腺嘧啶核苷酸。
20.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，还包括微流控芯片，所述微流控芯片包括反应腔，所述探针与酶置于反应腔中。
21.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述恒温荧光检测体系可用于DNA靶标和RNA靶标的检测。
22.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述恒温荧光检测体系可用于细菌、病毒、真菌、寄生虫、支原体和衣原体的检测。
...【技术特征摘要】
1.一种恒温荧光检测体系，其特征在于，包括经荧光标记的探针和能够水解探针的酶，所述探针上修饰有荧光基团和淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述酶为全长的bst dna聚合酶。
3.根据权利要求2所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针的两端分别修饰荧光基团和淬灭基团。
4.根据权利要求2所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，探针5’端和3’端包含一段6～10nt的互补序列。
5.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述酶为rnase hii时，所述探针的序列中包括至少一个rna碱基。
6.根据权利要求5所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述rna碱基为单独的一个，或连续的2～5个。
7.根据权利要求5所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述rna碱基的两端或者探针的两端分别修饰荧光基团和淬灭基团，荧光基团与淬灭基团之间的距离不少于5个碱基。
8.根据权利要求7所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针的两端分别修饰荧光基团和淬灭基团时，在探针5’端和3’端增加一段6～10nt的互补序列。
9.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针对应的靶标为rna序列时，所述检测试剂盒中还包括rna酶抑制剂。
10.根据权利要求1所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，在与lamp技术连用时，所述探针的靶向区域在序列f1的靶向区域与序列b1c的靶向区域之间，并不包含序列f1的靶向区域；
11.根据权利要求10所述的恒温荧光检测体系，其特征在于，所述探针与环引物的靶向区域部分相同或者完全相同时，所述探针的靶向区域在序列f2的靶向区域与序列f1的靶向区域之间，并且不包含序列f2的靶向区域；
...【专利技术属性】
技术研发人员：郭文浒，薛怡婷，王红，
申请(专利权)人：福州奥吉芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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