【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品加工和蛋白质分离纯化领域，具体涉及一种萝卜叶子蛋白的提取方法。
技术介绍
1、人口增长迅速，人类面临粮食危机。通过农业手段获取食物的方式较为低效，大面积耕地会破坏自然栖息地和生物多样性，大量使用农药化肥会破坏海洋、陆地的生态系统。为满足全球日益增长的蛋白质需求，获取蛋白质的来源与方式亟待拓。
2、植物叶子富含蛋白质，其蛋白质含量达50-80％，具有人体所需营养因子，在膳食营养品中具有很大的开发潜力。与动物蛋白不同的是，植物蛋白不含胆固醇、饱和脂肪，还可以提供较多的膳食纤维、维生素e、不饱和脂肪等健康成分。很多植物蛋白食品中还含有特殊的保健成分，如具有类雌激素作用的大豆异黄酮、具有降血脂作用的植物固醇、具有防癌和抗衰老作用的多酚类抗氧化物质等。
3、萝卜是一种生长迅速、寒冷季节的两年生作物。这种热带和温带地区的作物因其多汁的主根而在世界各地种植，每年总产量约为700万吨。萝卜的叶子占其总重量的30-50％，通常被当作厨房垃圾丢弃。而萝卜叶子是良好的植物蛋白来源，由于存在各种氨基酸的含氮部分，具有较高的生物学价值。然而至今，萝卜叶作为蛋白质来源的用途还没有得到很好的研究与开发，关于萝卜的研究主要在根部或种子上。目前国内外对萝卜叶的研究甚少，随着消费者对食品安全、蛋白质缺乏和动物蛋白成本不断上涨的焦虑和担忧不断增加，对天然植物蛋白的进一步研究是社会需求所向。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为解决萝卜叶蛋白的资源浪费，提供一种简单、高效、易操
2、本专利技术使用的是酶辅助碱溶酸沉法对叶子蛋白进行提取，通过有机试剂洗涤、透析的方式纯化，最后真空冷冻干燥获取蛋白。
3、为了解决上述存在的技术问题，本申请提供如下技术方案：
4、本专利技术提供一种萝卜叶子蛋白的提取方法，包括以下步骤：
5、(1)将新鲜的萝卜叶子进行茎叶分离后将叶子清洗干净，40-70℃烘干，过筛，得到叶子粉；
6、(2)将叶子粉溶于水中，调节至酶解最适ph，水浴保温，加入纤维素酶进行酶解；
7、(3)使用碱调节ph，水浴搅拌，碱溶；
8、(4)将步骤(3)碱溶结束后的溶液离心，收集上清液体，得到蛋白溶液；
9、(5)使用酸调节所述蛋白溶液的ph，酸沉，3-5℃静置，得到沉淀蛋白混合液；
10、(6)将所述沉淀蛋白混合液离心，收集固体沉淀，得到粗蛋白；
11、(7)使用丙酮洗涤步骤(6)得到的粗蛋白，离心，得到蛋白质；
12、(8)将所述蛋白质于水中溶解，透析，冷冻干燥，得到所述萝卜叶子蛋白。
13、优选的，所述步骤(1)中，烘干的时间为4h。
14、优选的，所述步骤(2)中，叶子粉和水的质量比为1：10-40。
15、优选的，所述步骤(2)中，酶解最适ph为4-6。
16、优选的，所述步骤(2)中，纤维素酶的加入量为15-150egu/g。
17、所述纤维素酶采购自诺维信公司的1.5l。
18、具体的，所述纤维素酶的添加量相较固体叶子粉的量为2wt％。
19、优选的，所述步骤(2)中，水浴保温的温度均为40-60℃，酶解的反应时间为30-120min。
20、进一步地，所述步骤(2)中，水浴保温的温度均为45-60℃。
21、优选的，所述步骤(3)中，水浴的温度为40-50℃，碱溶的ph为8.5-13，碱溶的反应时间1-4h。
22、优选的，所述步骤(4)中，离心的转速为5000-8000rpm，时间为10-20min。
23、优选的，所述步骤(5)中，酸沉的ph为3-5。
24、具体的，所述步骤(5)中，静置的温度为4℃。
25、优选的，所述步骤(7)中，丙酮和粗蛋白的质量比为1：1-4，洗涤1-3次。
26、优选的，所述步骤(8)中，透析时透析袋的截留分子量为8000-14000da。
27、优选的，所述步骤(8)中，透析的时间为12-36h。
28、进一步地，所述步骤(8)中，透析的时间为12-24h。
29、具体的，所述萝卜叶子蛋白的提取方法，包括以下步骤：
30、(1)叶子粉的制备：将新鲜萝卜叶茎叶分离，叶子部分洗净，恒温箱中烘干，使其干燥，使用粉碎机粉碎，过筛，收集得到叶子粉。
31、(2)酶反应：取步骤(1)中叶子粉，按照比例加入去离子水溶解，使用磁力搅拌混合均匀，得到混合液，水浴预热，使用hcl调节ph，加入纤维素酶，继续水浴加热，处理2h。
32、(3)碱溶：使用naoh调节步骤(2)中反应混合液的ph，置于40℃水浴锅中，处理4h，离心，丢弃沉淀，取上清液，得到萝卜叶蛋白提取液。
33、(4)酸沉：使用hcl调节步骤(3)中蛋白提取液的ph，4℃冰箱静置1h，离心，弃上清液，取沉淀，得到萝卜叶粗蛋白。
34、(5)丙酮洗涤：加入丙酮对萝卜叶粗蛋白进行洗涤，重复三次。
35、(6)透析：将(5)中叶蛋白使用去离子水复溶成蛋白溶液，调节ph至中性，进行透析处理。
36、(7)冷冻干燥：将(6)中透析袋的保留液收集，－20℃冰箱冻4h成块，置于真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥24h，得到萝卜叶蛋白。
37、本专利技术的技术方案相比现有技术具有以下优点：
38、本专利技术所提供的蛋白提取方法对萝卜叶蛋白进行提取，其操作简单易实施。萝卜叶多为丢弃，十分可惜，其含有大量蛋白质，对叶子蛋白的开发利用绿色环保，且有助于世界蛋白需求。酶辅助碱溶酸沉提取的萝卜叶蛋白最终的纯度可达60-80％。
39、本专利技术在提取萝卜叶蛋白的基础上，提供检测提取蛋白质性质的分析方法包括：蛋白质含量检测、蛋白质溶解度检测、蛋白质点位检测、蛋白质乳化性分析、蛋白质起泡性检测以及蛋白质凝胶性的检测。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，叶子粉和水的质量比为1：10-40。
3.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，酶解最适pH为4-6。
4.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，纤维素酶的加入量为15-150EGU/g。
5.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，水浴保温的温度均为40-60℃，酶解的反应时间为30-120min。
6.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中，水浴的温度为40-50℃，碱溶的pH为8.5-13，碱溶的反应时间1-4h。
7.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，离心的转速为5000-8000rpm，时间为10-20min。
8.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中，
9.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(7)中，丙酮和粗蛋白的质量比为1：1-4，洗涤1-3次。
10.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(8)中，透析的时间为12-36h。
...【技术特征摘要】
1.一种萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，叶子粉和水的质量比为1：10-40。
3.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，酶解最适ph为4-6。
4.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，纤维素酶的加入量为15-150egu/g。
5.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，水浴保温的温度均为40-60℃，酶解的反应时间为30-120min。
6.根据权利要求1所述萝卜叶子蛋白的...
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