一种提高绵羊卵母细胞体外利用效率的方法技术

本发明专利技术提供的一种提高绵羊卵母细胞体外利用效率的方法，将染色分离获取的质次ＢＣＢ－卵母细胞，用含有５０－１００μＭｏｌ／Ｌ的ＰＤＥ３抑制剂ｍｉｌｒｉｎｏｎｅ的成熟培养液洗涤２－３次，培养６－９小时，用不含有ｍｉｌｒｉｎｏｎｅ的成熟培养液洗涤２－３次，培养至２４小时；脱去卵母细胞周围的颗粒细胞，移至洗涤液内，捡出排出第一极体的卵母细胞，统计极体排除率即成熟率；将排出第一极体的卵母细胞用５μＭｏｌ／Ｌ离子霉素激活４－５分钟，洗涤液洗涤１－３次，再用２－３小时前在ＣＯ２箱平衡好的２ｍＭｏｌ／Ｌ?６－甲氨基嘌呤激活２－３小时，用２小时前在ＣＯ２箱平衡好的培养液洗涤３－４次，入培养液内培养４８小时后统计卵裂率，１６８小时后统计囊胚率即可。另将染色分离获取的ＢＣＢ＋卵母细胞用成熟培养液洗涤２－３次，培养至２４小时直接利用。该法对绵羊卵母细胞体外利用有重大的实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及磷酸二酯酶抑制剂(PDE)milrin0ne，对经过BCB筛选后的质量不好的 BCB阴性卵母细胞进行抑制的方法，能显著提高绵羊卵母细胞体外成熟率。
技术介绍
PDEs是一类能水解细胞内环核苷酸第二信使的同工酶，在哺乳动物中，根据PDE 动力学、底物特异性、组织细胞中的分布、抑制剂和激动剂以及氨基酸序列而将其分为11 类，PDE3是其中一类。许多研究表明，哺乳动物卵母细胞减数分裂恢复受第二信使cAMP调 节，而PDE是调控细胞内cAMP水平的一种关键酶，因此PDE能够阻滞体外培养卵母细胞减 数分裂的恢复，在卵母细胞成熟分裂的调控过程中起重要作用。在前期研究的一种用于绵羊卵母细胞体外的筛选培养方法(专利申请号 200910113567. 9)中发现，经过BCB筛选后的阴性卵母细胞成熟率极显著低于阳性卵母细 胞，因而，如何提高阴性卵母细胞质量成为亟待解决的问题。文献检索披露1. Biology of Reproduction, 69 (2003)，2045-2052，作者D. Nogueira 等，发表的《磷酸二酯酶抑制剂 3 在 小鼠体外未成熟卵母细胞发育能力中的作用》文本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高绵羊卵母细胞体外利用效率的方法，其特征在于：将染色分离获取的质次ＢＣＢ－卵母细胞，用含有５０－１００μＭｏｌ／Ｌ的ＰＤＥ３抑制剂ｍｉｌｒｉｎｏｎｅ的成熟培养液洗涤２－３次，培养６－９小时，用不含有ｍｉｌｒｉｎｏｎｅ的成熟培养液洗涤２－３次，培养至２４小时；脱去卵母细胞周围的颗粒细胞，移至洗涤液内，捡出排出第一极体的卵母细胞，统计极体排除率即成熟率；将排出第一极体的卵母细胞用５μＭｏｌ／Ｌ离子霉素激活４－５分钟，洗涤液洗涤１－３次，再用２－３小时前在ＣＯ↓［２］箱平衡好基亚砜＋１０％胎牛血清＋８９％ＴＣＭ１９９－ｈｅｐｅｓ；　　６－甲氨基嘌呤：２ｍＭｏｌ／Ｌ　６－甲氨基嘌呤＋１％二甲基亚...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄俊成，汪立芹，赵云程，刘明军，林嘉鹏，陈童，
申请(专利权)人：新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国澳大利亚绵羊育种研究中心，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]