【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，具体涉及一种高氨解程度的引物合成方法。
技术介绍
1、引物合成是分子生物学中一个重要的技术步骤，常用于各种实验和应用，特别是聚合酶链反应(pcr)等。引物是一些短的dna片段，它们在pcr过程中的特定温度下与目标dna序列的互补区域配对，从而在dna复制过程中引导dna聚合酶合成新的dna链。引物合成后需要在氨的碱性条件下进行裂解，以去除碱基上的保护基团以及使合成的引物从固相载体上切割下来，得到合成的引物。常常使用新鲜的浓氨水来裂解孔径可控玻璃微球(cpg)上连接化合物与初始核苷间的酯键。氨解过程是引物合成的一个重要环节，是影响引物产物质量、产量与纯度的重要因素。
2、但是，在现有技术中，使用饱和氨水进行氨解时，通常需要很长一段时间，并且随着反应时间的增加，氨水溶液容易挥发，导致操作复杂，整体耗时较长；采用微波氨解时，反应中碱的容易消耗，导致了反应体系中oh-离子浓度降低，从而使反应无法进一步进行。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高氨解程度的引物合成方法，以解决氨解反应速度慢的问题。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、本专利技术提供一种高氨解程度的引物合成方法，包括如下步骤：
4、第一步、合成引物：在固相载体上完成引物的合成，得到引物粗产物；
5、第二步、氨解反应：将含有引物粗产物的固相载体放入氨解液中，经过氨解反应把引物粗产物从固相载体上切割下来，并脱掉引物上的保
6、第三步、纯化引物。
7、进一步地，碱性溶液、三-(2-氨基乙基)胺和甲醇的用量体积比为1.3-2：2：10。
8、进一步地，碱性溶液为naoh溶液、koh溶液、mg(oh)2溶液和ca(oh)2溶液中的一种；其中碱性溶液的浓度为1-2m。
9、进一步地，三-(2-氨基乙基)胺通过如下步骤制备：
10、将六次甲基四胺和三(2-氯乙基)胺盐酸盐加入甲苯中，升温回流8h，降温抽滤，洗涤干燥，加入乙醇和盐酸溶液回流8h，洗涤烘干，得到三(2-氨基乙基)胺盐酸盐；再将三(2-氨基乙基)胺盐酸盐加入氨水和乙醇，70℃回流7h，蒸发，加无水乙醇冷藏抽滤，调节抽滤液ph为10，减压蒸馏，得到三(2-氨基乙基)胺。
11、本方法制得的三(2-氨基乙基)胺的合成路线简洁，工艺流程短，无多余副产品产生，便于分离提纯，目标产物产率较高，所选原料廉价易得，生产成本低；并且合成过程中无大量so2和hcl气体释放，反应温和，对环境危害较低。
12、进一步地，六次甲基四胺、三(2-氯乙基)胺盐酸盐、甲苯、乙醇和盐酸溶液的用量比为4.3g：2.5g：32ml：20ml：14ml；其中盐酸溶液的质量分数为36％；三(2-氨基乙基)胺盐酸盐、氨水和乙醇的用量比为3g：35ml：100ml。
13、进一步地，固相载体为羟基功能化聚苯乙烯固相载体，通过如下步骤制备：
14、将聚苯乙烯微球和4-氯苯酚加入二氯甲烷中，搅拌15min，加入溴化铝，温度为25-35℃，反应6h；反应结束后，稀盐酸、甲醇和水分别洗涤3次，干燥2h，得到羟基功能化聚苯乙烯固相载体。
15、进一步地，聚苯乙烯微球、4-氯苯酚、二氯甲烷和溴化铝的用量比为1g：0.14g：12ml：0.6g。
16、本专利技术的有益效果：
17、本专利技术中添加的三-(2-氨基乙基)胺作为有机物强碱能加快反应速率；另一方面因其特殊的结构，可以和保护基完全发生反应，使引物表面的保护基被脱落下来，并且反应条件温和，不需要升温；且氨解液加入碱性溶液后，能够给氨解反应带来充足的oh-保证氨解反应能够顺利地进行，进一步提高了反应速率；本专利技术所得氨解液活性高，稳定性好，避免氨水氨解时微量物质残留及污染，同时还能最大限度减少引物破坏，进一步提高引物的质量。
18、本专利技术制得的羟基功能化聚苯乙烯固相有机合成载体表面羟基衍生之后活性位点比较少，引物合成过程中不易产生错误序列，且产物纯度比较高，所以，比较适用于引物固相合成；且因其具有高载量，通用性和良好的合成性能，可有效应用于更大范围生产。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，碱性溶液、三-(2-氨基乙基)胺和甲醇的用量体积比为1.3-2：2：10。
3.根据权利要求1所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，碱性溶液为NaOH溶液、KOH溶液、Mg(OH)2溶液和Ca(OH)2溶液中的一种；其中碱性溶液的浓度为1-2M。
4.根据权利要求1所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，三-(2-氨基乙基)胺通过如下步骤制备：
5.根据权利要求4所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，六次甲基四胺、三(2-氯乙基)胺盐酸盐、甲苯、乙醇和盐酸溶液的用量比为4.3g：2.5g：32mL：20mL：14mL；其中盐酸溶液的质量分数为36％；三(2-氨基乙基)胺盐酸盐、氨水和乙醇的用量比为3g：35mL：100mL。
6.根据权利要求1所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，固相载体为羟基功能化聚苯乙烯固相载体，通过如下步骤制备：
7.根据
...【技术特征摘要】
1.一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，碱性溶液、三-(2-氨基乙基)胺和甲醇的用量体积比为1.3-2：2：10。
3.根据权利要求1所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，碱性溶液为naoh溶液、koh溶液、mg(oh)2溶液和ca(oh)2溶液中的一种；其中碱性溶液的浓度为1-2m。
4.根据权利要求1所述的一种高氨解程度的引物合成方法，其特征在于，三-(2-氨基乙基)胺通过如下步骤制备：
5.根据权利要求4所述的一种高...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘宗文，雍金贵，刘奇，高恩，潘红，黄贤华，
申请(专利权)人：通用生物安徽股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。