【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种分支结构抗菌肽kw制备方法和应用。
技术介绍
1、抗菌肽(antimicrobial peptides，amps)是广泛存在于生物体天然免疫防御系统的一类小分子多肽类物质，具有广谱抗菌活性，作用迅速，因其独特的抗菌作用机制被视为传统抗生素的理想替代药物。近年来，研究者发现一种新型抗菌肽，即分支肽，又称多聚肽或树状多肽，其因具有高生物学活性以及高稳定性，在药物递送、疾病治疗、基因载体等领域的应用具有良好的应用前景。由于天然抗菌肽或传统全新设计的线性抗菌肽往往存在活性不强、代谢不稳定、毒性大等缺点，导致其在畜牧业开发与应用受到诸多限制。
技术实现思路
1、基于以上不足之处，本专利技术的目的是提供一种分支结构抗菌肽kw制备方法，利用lys具有两个n端，一个c端的特点，构建分支状结构，与相同氨基酸组成的线性多肽相比，分支抗菌肽仍能保持一定的抗菌活性，显著降低毒性，解决了现有的天然抗菌肽或全新设计的传统线性抗菌肽活性低，毒性强的问题。
2、本专利技术所采用的技术方案如下：一种分支结构抗菌肽kw，包括一个lys和两组α-螺旋结构的七肽基团，所述的七肽基团的氨基酸序列如seq id no.1所示，第一组七肽基团的第7位的arg的c端与lys的ε-n端相连，第二组七肽基团的第1位的leu的n端与lys的c端相连，并且所述的抗菌肽kw的c端采用氨基酰胺化。
3、进一步的，如上所述的一种分支结构抗菌肽kw，其分子式如式(i)所示，
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5、本专利技术的另一目的在于提供如上所述的一种分支结构抗菌肽kw的制备方法，方法步骤如下：
6、步骤一、利用α-螺旋七肽重复序列“abcdefg”作为基础，选择leu放置在a、d位置上形成leu拉链结构提供一定的疏水性；在c和f位置添加trp，使得trp-trp相互作用提高α-螺旋结构稳定性，从而提高抗菌活性，其余位置添加arg以增加正电荷数，得到七肽基团序列如seq id no.1所示，将第一组七肽基团的第7位的arg的c端与lys的ε-n端相连，第二组七肽基团的第1位的leu的n端与lys的c端相连，得到多肽，并在所述的多肽的c端采用氨基进行酰胺化，以提供足够正电荷保证抗菌活性；
7、步骤二、将所述的多肽采用固相化学合成法进行合成，再经过反相高效液相色谱纯化和质谱鉴定后，进一步对所述的多肽进行抑菌活性检测和溶血活性检测，最后命名为抗菌肽kw。
8、本专利技术的另一目的是提供一种如上所述的分支结构抗菌肽kw在制备治疗革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌感染性疾病的药物中的应用。
9、进一步的，所述的革兰氏阴性菌为大肠杆菌、绿脓杆菌或/和鼠伤寒沙门氏菌。
10、进一步的，所述的革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或/和粪肠球菌。
11、本专利技术具有如下优点及效果：本专利技术仅利用15个氨基酸即可达到良好的抗菌效果，有效降低了合成成本，同时显著降低了抗菌肽的毒性。对得到的分支结构抗菌肽kw进行抗菌和溶血活性检测，发现分支结构抗菌肽kw对大肠杆菌、绿脓杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌等几种测定的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有较高抑菌活性。虽分支结构抗菌肽kw抑菌活性稍低于线性抗菌肽w，但分支结构抗菌肽对所有待测菌株的最小抑菌浓度仍保持在8-16μm范围内。分支结构抗菌肽kw治疗指数为30.00，具有良好的细胞选择性，其ti值相较于线性抗菌肽w的治疗指数(ti＝10.56)提高3倍。综上所述，说明了将线性抗菌肽改造成分支结构抗菌肽这一策略能够显著改善线性多肽带来的毒性大问题，在保证一定的抗菌活性基础下进一步提高细胞选择性。除此之外，分支结构抗菌肽kw有潜力成为治疗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌感染的广谱抗菌药物，并有很高的应用价值。
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1.一种分支结构抗菌肽KW，其特征在于：包括一个Lys和两组α-螺旋结构的七肽基团，所述的七肽基团的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，第一组七肽基团的第7位的Arg的C端与Lys的ε-N端相连，第二组七肽基团的第1位的Leu的N端与Lys的C端相连，并且所述的抗菌肽KW的C端采用氨基酰胺化。
2.根据权利要求1所述的一种分支结构抗菌肽KW，其分子式如式(I)所示，
3.根据权利要求1所述的一种分支结构抗菌肽KW的制备方法，其特征在于，方法步骤如下：
4.根据权利要求1所述的一种分支结构抗菌肽KW在制备治疗革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌感染性疾病的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的革兰氏阴性菌为大肠杆菌、绿脓杆菌或/和鼠伤寒沙门氏菌。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或/和粪肠球菌。
【技术特征摘要】
1.一种分支结构抗菌肽kw，其特征在于：包括一个lys和两组α-螺旋结构的七肽基团，所述的七肽基团的氨基酸序列如seq id no.1所示，第一组七肽基团的第7位的arg的c端与lys的ε-n端相连，第二组七肽基团的第1位的leu的n端与lys的c端相连，并且所述的抗菌肽kw的c端采用氨基酰胺化。
2.根据权利要求1所述的一种分支结构抗菌肽kw，其分子式如式(i)所示，
3.根据权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕银凤，薛萌，卞译烽，杨城义，黄欣月，单安山，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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