【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、泛素(ub)是一种高度保守的76个氨基酸的多肽，其翻译后连接将多种真核蛋白质引向多种命运和功能。泛素化过程包括靶向26s蛋白酶体依赖性降解的蛋白质、内化和溶酶体靶向、蛋白质相互作用的调节、亚细胞分布的改变、转录的调控、dna修复和跨膜信号传导级联的调节。蛋白质泛素化与几乎每个细胞过程都有联系，涉及许多细胞疾病，并且涉及泛素系统的过程的失调具有有害的细胞后果。因此，e3与许多病理生理学状况有关，这使它们成为有吸引力的治疗靶标。
2、蛋白质泛素化通常涉及泛素与蛋白质底物的共价连接。根据泛素连接，无论是单泛素、寡泛素还是多泛素，蛋白质底物可能随后通过泛素-蛋白酶体途径(26s蛋白酶体)、溶酶体降解途径来降解，或者蛋白质功能以依赖于泛素但不依赖于降解的方式来调节，并且游离的泛素被再循环。
3、通过ub和ubl进行的蛋白质翻译后修饰调控生物学的几乎每个方面，并能够对蛋白质稳定性和活性进行复杂和可逆的调控。由于在细胞生物学中的广泛作用，ub途径酶的功能障碍导致多种人疾病。泛素与许多已知底物蛋白质的连接被认为发生在由三类蛋白质依次进行的一系列酶促反应中：泛素活化酶(e1)以atp依赖性方式活化泛素，以在ub的羧基末端gly和e1的cys残基之间形成硫酯键；然后，将活化的ub转移到泛素缀合酶(e2或ubc)，以形成另一个硫酯键；并且泛素连接酶(e3)以底物特异性方式催化或促进ub从e2转移到底物蛋白质的lys(k)残基，以形成异肽键。
4、已知e3酶在泛素化过程中提供底物特异性。人含有一种形式
5、本专利技术的组合物和方法解决了本领域中与这些天然存在的系统和方法相关的需求。
技术实现思路
1、本文提供了通过e3泛素连接酶募集实现的受体消除(receptor elimination bye3 ubiquitin ligase recruitment,reulr)构建体和相关组合物。此类构建体通常包含对e3泛素连接酶具有特异性的可变结构域重链抗体(vhh)和对靶蛋白特异具有特异性的vhh，其中e3泛素连接酶和靶蛋白是不同的蛋白质。
2、本文还提供了reulr构建体组合物，其中reulr构建体由下式定义：
3、a.(vhht)a-l-(vhhe3)b；或者
4、b.
5、c.(vhht)a-l-(vhhe3)b-l-(vhht)a；
6、d.(vhhe3)a-l-(vhht)b-l-(vhhe3)a；或者
7、e.(r-l)z-(vhht)a-l-(vhhe3)b-(l-r)w
8、在定义示例性reulr构建体的这些式中，vhh是对靶蛋白或e3泛素连接酶具有特异性的可变结构域重链抗体；r是vhht或vhhe3；l是接头分子；t是靶蛋白，使得vhh对靶蛋白具有特异性；e3是e3泛素连接酶，使得vhh对e3泛素连接酶具有特异性；a为1或更大；b为1或更大；w是0或1或更大；x是0或1或更大；y是0或1或更大；并且z是0或1或更大。
9、本文还提供了接头分子，其适于以使得对e3泛素连接酶具有特异性的vhh和对靶蛋白具有特异性的vhh各自独立地可用并且能够分别与e3泛素连接酶和靶蛋白结合的方式将对e3泛素连接酶具有特异性的vhh连接至对靶蛋白具有特异性的vhh。
10、在通常包括的实施方案中，reulr构建体还包含对e3泛素连接酶具有特异性的一个或多个另外的vhh和/或对靶蛋白具有特异性的一个或多个另外的vhh。
11、在通常的实施方案中，e3泛素连接酶是ring型e3泛素连接酶。在某些实施方案中，e3泛素连接酶是grail、godzilla和/或goliath。通常，e3泛素连接酶是下列中的一种或多种：rnf133、rnf148、rnf128、rnf149、rnf130、rnf150、rnf122、rnf43、znrf3、znrf4、rnf13、rnf167、amfr、stvn1、rnf170、rnf121、rnf175、rnf139、rnf145、marchf5、vfpl1、rnft1、rnf180、rnf103、rnf182、rnf5、rnf185、rnf19a、rnf19b、rnf144a、rnf144b、rnf217、marchf1、marchf8、marchf2、marchf3、marchf11、marchf4、marchf9、marchf6、nr1h4、rnf126、dcst1、rnf152、rnf186、cgrrf1、mul1、trim13、trim59或rnf112。
12、在通常包括的实施方案中，在式(a)-(e)的reulr构建体中，a为2或更大，b为2或更大，或者其中a为2或更大并且b为2或更大。而且通常，在式(a)-(e)的reulr构建体中，w为1或更大，x为1或更大，y为1或更大，或者z为0或1或更大。而且通常，在式(a)-(e)的reu本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种通过E3泛素连接酶募集实现的受体消除(REULR)构建体组合物，其包含对E3泛素连接酶具有特异性的可变结构域重链抗体(VHH)和对靶蛋白具有特异性的VHH，其中所述E3泛素连接酶和所述靶蛋白不同。
2.如权利要求1所述的REULR构建体组合物，其还包含接头分子，所述接头分子适于以使得对所述E3泛素连接酶具有特异性的所述VHH和对靶蛋白具有特异性的所述VHH各自独立地可用并且能够分别与所述E3泛素连接酶和所述靶蛋白结合的方式将对所述E3泛素连接酶具有特异性的所述VHH连接至对靶蛋白具有特异性的所述VHH。
3.如权利要求1或2所述的REULR构建体组合物，其中所述E3泛素连接酶是GRAIL、GODZILLA、GOLIATH、RNF43和/或ZNRF3。
4.如权利要求1或2中任一项所述的REULR构建体组合物，其还包含对所述E3泛素连接酶具有特异性的一个或多个另外的VHH，和/或对所述靶蛋白具有特异性的一个或多个另外的VHH。
5.一种通过E3泛素连接酶募集实现的受体消除(REULR)构建体组合物，其中所述REULR构建体由下
6.如权利要求5所述的REULR构建体组合物，其中所述E3泛素连接酶是GRAIL、GODZILLA、GOLIATH、RNF43和/或ZNRF3。
7.如权利要求5所述的REULR构建体组合物，其中A为2或更大，B为2或更大，或者其中A为2或更大并且B为2或更大。
8.如权利要求5或6所述的REULR构建体组合物，其中W为1或更大，X为1或更大，Y为1或更大，或者Z为0或1或更大。
9.如权利要求5或6所述的REULR构建体组合物，其中W为0或更大，X为2或更大，Y为2或更大，或者Z为0或1或更大。
10.如权利要求5或6所述的REULR构建体组合物，其中W为1或更大，X为1或更大，Y为1或更大，并且Z为0或1或更大。
11.如权利要求5或6所述的REULR构建体组合物，其中W为0，X为1或更大，Y为1或更大，并且Z为0或1或更大。
12.如权利要求7所述的REULR构建体组合物，其中W为1或更大，X为1或更大，Y为1或更大，或者Z为0或1或更大。
13.如权利要求7所述的REULR构建体组合物，其中W为1或更大，X为1或更大，Y为1或更大，并且Z为0或1或更大。
14.如权利要求5或6所述的REULR构建体组合物，其中A为3或更大，B为3或更大，或者其中A为3或更大并且B为3或更大。
15.如权利要求5所述的REULR构建体组合物，其中所述接头分子适于以使得对所述E3泛素连接酶具有特异性的所述VHH和对靶蛋白具有特异性的所述VHH独立可用并且能够分别与所述E3泛素连接酶和所述靶蛋白结合的方式将对所述E3泛素连接酶具有特异性的所述VHH连接至对靶蛋白具有特异性的所述VHH。
16.如权利要求1或5所述的REULR构建体，其中所述靶蛋白是细胞表面蛋白。
17.如权利要求1或5所述的REULR构建体，其中所述靶蛋白是受体。
18.如权利要求1或5所述的REULR构建体，其中所述靶蛋白与细胞增殖性病症或疾病相关。
19.如权利要求1或5所述的REULR构建体，其中所述靶蛋白与癌症、神经病症、淋巴瘤、白血病、糖尿病、自身免疫病症、病毒感染、细菌感染或寄生虫感染、阿尔茨海默病或心脏病中的一种或多种相关。
20.如前述权利要求中任一项所述的REULR构建体，其中所述E3泛素连接酶是RING型E3泛素连接酶。
21.如权利要求1或5所述的REULR构建体，其中所述E3泛素连接酶选自下列中一种或多种：RNF133、RNF148、RNF128、RNF149、RNF130、RNF150、RNF122、RNF43、ZNRF3、ZNRF4、RNF13、RNF167、AMFR、STVN1、RNF170、RNF121、RNF175、RNF139、RNF145、MARCHF5、VFPL1、RNFT1、RNF180、RNF103、RNF182、RNF5、RNF185、RNF19A、RNF19B、RNF144A、RNF144B、RNF217、MARCHF1、MARCHF8、MARCHF2、MARCHF3、MARCHF11、MARCHF4、MARCHF9、MARCHF6、NR1H4、RNF126、DCST1、RNF152、RNF186、CGRRF1、MUL1、TRIM13、TRIM59和RNF112。
22.一种分离的核酸，其编码权利要求1或5所述的REULR构建体。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种通过e3泛素连接酶募集实现的受体消除(reulr)构建体组合物，其包含对e3泛素连接酶具有特异性的可变结构域重链抗体(vhh)和对靶蛋白具有特异性的vhh，其中所述e3泛素连接酶和所述靶蛋白不同。
2.如权利要求1所述的reulr构建体组合物，其还包含接头分子，所述接头分子适于以使得对所述e3泛素连接酶具有特异性的所述vhh和对靶蛋白具有特异性的所述vhh各自独立地可用并且能够分别与所述e3泛素连接酶和所述靶蛋白结合的方式将对所述e3泛素连接酶具有特异性的所述vhh连接至对靶蛋白具有特异性的所述vhh。
3.如权利要求1或2所述的reulr构建体组合物，其中所述e3泛素连接酶是grail、godzilla、goliath、rnf43和/或znrf3。
4.如权利要求1或2中任一项所述的reulr构建体组合物，其还包含对所述e3泛素连接酶具有特异性的一个或多个另外的vhh，和/或对所述靶蛋白具有特异性的一个或多个另外的vhh。
5.一种通过e3泛素连接酶募集实现的受体消除(reulr)构建体组合物，其中所述reulr构建体由下式定义：
6.如权利要求5所述的reulr构建体组合物，其中所述e3泛素连接酶是grail、godzilla、goliath、rnf43和/或znrf3。
7.如权利要求5所述的reulr构建体组合物，其中a为2或更大，b为2或更大，或者其中a为2或更大并且b为2或更大。
8.如权利要求5或6所述的reulr构建体组合物，其中w为1或更大，x为1或更大，y为1或更大，或者z为0或1或更大。
9.如权利要求5或6所述的reulr构建体组合物，其中w为0或更大，x为2或更大，y为2或更大，或者z为0或1或更大。
10.如权利要求5或6所述的reulr构建体组合物，其中w为1或更大，x为1或更大，y为1或更大，并且z为0或1或更大。
11.如权利要求5或6所述的reulr构建体组合物，其中w为0，x为1或更大，y为1或更大，并且z为0或1或更大。
12.如权利要求7所述的reulr构建体组合物，其中w为1或更大，x为1或更大，y为1或更大，或者z为0或1或更大。
13.如权利要求7所述的reulr构建体组合物，其中w为1或更大，x为1或更大，y为1或更大，并且z为0或1或更大。
14.如权利要求5或6所述的reulr构建体组合物，其中a为3或更大，b为3或更大，或者其中a为3或更大并且b为3或更大。
15.如权利要求5所述的reulr构建体组合物，其中所述接头分子适于以使得对所述e3泛素连接酶具有特异性的所述vhh和对靶蛋白具有特异性的所述vhh独立可用并且能够分别与所述e3泛素连接酶和所述靶蛋白结合的方式将对所述e3泛素连接酶具有特异性的所述vhh连接至对靶蛋白具有特异性的所述vhh。
16.如权利要求1或5所述的reulr构建体，其中所述靶蛋白是细胞表面蛋白。
17.如权利要求1或5所述的reulr构建体，其中所述靶蛋白是受体。
18.如权利要求1或5所述的reulr构建体，其中所述靶蛋白与细胞增殖性病症或疾病相关。
19.如权利要求1或5所述的reulr构建体，其中所述靶蛋白与癌症、神经病症、淋巴瘤、白血病、糖尿病、自身免疫病症、病毒感染、细菌感染或寄生虫感染、阿尔茨海默病或心脏病中的一种或多种相关。
20.如前述权利要求中任一项所述的reulr构建体，其中所述e3泛素连接酶是ring型e3泛素连接酶。
21.如权利要求1或5所述的reulr构建体，其中所述e3泛素连接酶选自下列中一种或多种：rnf133、rnf148、rnf128、rnf149、rnf130、rnf150、rnf122、rnf43、znrf3、znrf4、rnf13、rnf167、amfr、stvn1、rnf170、rnf121、rnf175、rnf139、rnf145、marchf5、vfpl1、rnft1、rnf180、rnf103、rnf182、rnf5、rnf185、rnf19a、rnf19b、rnf144a、rnf144b、rnf217、marchf1、marchf8、marchf2、marchf3、m...
【专利技术属性】
技术研发人员：凯南·克里斯托夫·加西亚，德克·胡贝特·西佩，
申请(专利权)人：里兰斯坦福初级大学理事会，
类型：发明
国别省市：
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