System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 提高A族链球菌免疫测定特异性和灵敏度的方法技术_技高网

提高A族链球菌免疫测定特异性和灵敏度的方法技术

技术编号:40076848 阅读:6 留言:0更新日期:2024-01-17 01:32
本公开提供了用于检测生物样品中A族链球菌的方法和试剂盒。更具体地说,本公开提供了通过包括N‑丙酰基‑D‑葡糖胺、2‑N‑丁酰基‑D‑葡糖酰胺、双‑(2‑(D‑2‑脱氧‑葡糖胺基))‑PEG3‑酰胺、m‑PEG4‑葡糖胺、m‑PEG6‑葡糖胺或m‑PEG10‑葡糖胺来提高A族链球菌免疫测定的特异性和灵敏度的方法。因此,本文公开的方法和试剂盒可用于受试者链球菌感染的可靠和早期诊断。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本公开提供了用于检测生物样品中分析物的方法,具体地说,本公开提供了通过包括n-丙酰基-d-葡糖胺、2-n-丁酰基-d-葡糖酰胺、双-(2-(d-2-脱氧-葡糖胺基))-peg3-酰胺、m-peg4-葡糖胺、m-peg6-葡糖胺或m-peg10-葡糖胺来增强a族链球菌免疫测定的特异性和敏感性的方法。还提供了用于实践这些方法的试剂盒。


技术介绍

1、提供本公开的背景的以下描述仅为了帮助读者理解本公开,并且不允许用于描述或构成本公开的现有技术。

2、生物样品中微生物病原体的检测对临床决策极其重要,因为取决于致病生物,治疗可能有很大差异。与化脓性链球菌(s.pyogenes)相关的急性疾病主要发生在呼吸道、血液或皮肤。链球菌疾病通常是呼吸系统的感染(咽炎或扁桃体炎)或皮肤感染(脓皮病)。急性化脓性链球菌感染可能表现为咽炎(链球菌性咽喉炎)、猩红热(皮疹)、脓疱疮(皮肤表层感染)或蜂窝织炎(皮肤深层感染)。侵入性、产毒性感染可导致坏死性筋膜炎、关节或骨骼感染、肌炎、脑膜炎、心内膜炎和链球菌毒性休克综合征。在由化脓性链球菌引起的急性感染之后,患者还可能出现免疫介导的链球菌感染后的后遗症,例如急性风湿热和急性肾小球肾炎,其在未经治疗的感染中占1-3%。这些情况及其病理不是由于细菌本身的传播,而是由于对a族链球菌抗原的异常免疫反应。由于偶尔出现疾病迅速进展的病例,以及未经治疗的感染的严重后遗症的风险,化脓性链球菌仍然是一个主要的健康问题。

3、因此,准确和快速识别链球菌感染对于为患者提供及时和适当的治疗至关重要。


技术实现思路

1、本公开提供了在生物样品中检测a族链球菌(本文也称为“a链球菌”)的设备、方法和改进的诊断试剂盒。更具体地说,本公开提供了改进的免疫测定,其中通过向测定添加n-丙酰基-d-葡糖胺、2-n-丁酰基-d-葡糖酰胺、双-(2-(d-2-脱氧-葡糖胺基))-peg3-酰胺、m-peg4-葡糖胺、m-peg6-葡糖胺或m-peg10-葡糖胺,以降低的假阳性结果率和增加的灵敏度(即,降低的假阴性结果)检测a族链球菌感染。

2、在一个方面,本公开提供了在生物样品中检测至少一种a族链球菌种的存在的方法,其包括:(a)将生物样品与特异性靶向a族链球菌特异性抗原抗体或抗原结合片段和有效量的n-丙酰基-d-葡糖胺、2-n-丁酰基-d-葡糖酰胺、双-(2-(d-2-脱氧-葡糖胺基))-peg3-酰胺、m-peg4-葡糖胺、m-peg6-葡糖胺或m-peg10-葡糖胺接触;和(b)如果在样品中存在结合,检测抗体或抗原结合片段与a族链球菌特异性抗原的结合,其中检测到抗体或抗原结合片段与a族链球菌特异性抗原的结合表明样品中存在至少一种a族链球菌种。在一些实施方式中,抗体是多克隆抗体。在一些实施方式中,抗体是单克隆抗体。a族链球菌特异性抗原可从由荚膜多糖(“c-物质”)、细胞壁肽聚糖、脂磷壁酸(lta)、m蛋白、菌毛蛋白、纤连蛋白结合蛋白和细胞结合链激酶组成的组中选择。a族链球菌种的实例包括化脓性链球菌(streptococcus pyogenes)或停乳链球菌(streptococcus dysgalactiae)。

3、另外或可选地,在一些实施方式中,抗体或抗原结合片段包括报告标记。报告标记可以是,例如,金纳米颗粒标记、化学发光标记、放射性标记、生物发光标记、荧光标记、生色标记、光谱标记、光化学标记或电化学发光标记。荧光标记的例子包括,但不限于,铕、tagbfp、azurite、ebfp2、mkalamal、sirius、sapphire、t-sapphire、ecfp、cerulean、scfp3a、mturquoise、单体midoriishi-cyan、tagcfp、mtfpl、egfp、emerald、superfoldergfp、单体azami green、taggfp2、mukg、mwasabi、eyfp、citrine、venus、syfp2、tagyfp、单体kusabira-orange、mkok、mko2、morange、morange2、mraspberry、mcherry、dsred、mstrawberry、mtangerine、tdtomato、tagrfp、tagrfp-t、mapple、mruby、mplum、hcred-tandem、mkate2、mneptune、nirfp、tagrfp657、ifpi.4、irfp、mkeima red、lss-mkatel、lss-mkate2、pa-gfp、pamcherryl、patagrfp、kaede(绿色)、kaede(红色)、kikgrl(绿色)、kikgrl(红色)、pscfp2、ps-cfp2、meos2(绿色)、meos2(红色)、psmorange和dronpa。化学发光标记的例子包括,但不限于,β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶(hrp)和碱性磷酸酶。生物发光标记的例子包括水母发光蛋白、萤火虫荧光素酶、renilla荧光素酶、红色荧光素酶、luxab或纳米荧光素酶。放射性标记的例子包括3h、14c、32p、35s、36cl、57co、131i和186re。

4、在本文公开的方法的一些实施方式中,生物样品是体液,例如尿液、唾液、痰液、粘液、咽拭子样品、血液、血液成分,例如血浆或血清、羊水、精液、伤口分泌物、阴道分泌物、泪液、脊髓液、洗涤液和其他体液。生物样品包括来自例如子宫颈、尿道、鼻孔和喉咙的拭子样品。在一些实施方式中,通过使用咽拭子收集生物样品。在一些实施方式中,生物样品通过咽、舌、脸颊、牙齿、牙龈或鼻腔通道的拭子收集。

5、另外或可选地,在本技术方法的一些实施方式中,通过酶联免疫吸附测定(elisa)或酶扩大免疫测定技术(emit)检测抗体或抗原结合片段与a族链球菌特异性抗原的结合。

6、另外或可选地,在一些实施方式中,从患有或疑似患有细菌感染的受试者获得生物样品。在特定的实施方式中,受试者是人。

7、在一个方面,本公开提供了用于检测样品中a族链球菌存在的设备,其包括:基质(matrix),所述基质具有(i)样品接收区,其用于接收含有或疑似含有a族链球菌特异性抗原的样品,(ii)标记区,其包含检测抗体或检测抗原结合片段,其用于在抗原通过时特异性标记抗原,和(iii)捕获区,其具有特异性结合其上的被标记抗原的装置(means),其中样品接收区、标记区和捕获区设置在液体流道中的基质上,并且其中样品接收区、捕获区和标记区中至少一个包括n-丙酰基-d-葡糖胺、2-n-丁酰基-d-葡糖酰胺、双-(2-(d-2-脱氧-葡糖胺基))-peg3-酰胺、m-peg4-葡糖胺、m-peg6-葡糖胺或m-peg10-葡糖胺。在一些实施方式中,检测抗体是多克隆抗体。在一些实施方式中,检测抗体是单克隆抗体。

8、在设备的一些实施方式中,检测抗体或检测抗原结合片段包括金纳米颗粒标记、化学发光标记、放射性标记、生物发光标记、荧光标记、生色标记、光谱标记、光化本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测生物样品中至少一种A族链球菌种的存在的方法,其包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述抗体是多克隆抗体。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述抗体或抗原结合片段包括:金纳米颗粒标记、化学发光标记、放射性标记、生物发光标记、荧光标记、生色标记、光谱标记、光化学标记或电化学发光标记。

4.根据权利要求3所述的方法,其中所述荧光标记选自:铕、TagBFP、Azurite、EBFP2、mKalamal、Sirius、Sapphire、T-Sapphire、ECFP、Cerulean、SCFP3A、mTurquoise、单体Midoriishi-Cyan、TagCFP、mTFPl、EGFP、Emerald、Superfolder GFP、单体Azami Green、TagGFP2、mUKG、mWasabi、EYFP、Citrine、Venus、SYFP2、TagYFP、单体Kusabira-Orange、mKOK、mKO2、mOrange、mOrange2、mRaspberry、mCherry、dsRed、mStrawberry、mTangerine、tdTomato、TagRFP、TagRFP-T、mApple、mRuby、mPlum、HcRed-Tandem、mKate2、mNeptune、NirFP、TagRFP657、IFPI.4、iRFP、mKeima Red、LSS-mKatel、LSS-mKate2、PA-GFP、PAmCherryl、PATagRFP、Kaede(绿色)、Kaede(红色)、KikGRl(绿色)、KikGRl(红色)、PSCFP2、PS-CFP2、mEos2(绿色)、mEos2(红色)、PSmOrange和Dronpa。

5.根据权利要求3所述的方法,其中所述化学发光标记选自:β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶。

6.根据权利要求3所述的方法,其中所述生物发光标记选自:水母发光蛋白、萤火虫萤光素酶、Renilla萤光素酶、红色萤光素酶、luxAB或纳米萤光素酶。

7.根据权利要求3所述的方法,其中所述放射性标记选自:3H、14C、32P、35S、36Cl、57Co、131I和186Re。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述生物样品是尿液、唾液、痰、粘液、咽拭子样品、全血、血浆、血清、羊水、精液、伤口分泌物、阴道分泌物、眼泪或脊髓液。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中所述抗体或所述抗原结合片段与所述A族链球菌特异性抗原的结合通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)或酶扩大免疫测定技术(EMIT)检测。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法,其中所述A族链球菌特异性抗原选自:荚膜多糖(“C物质”)、细胞壁肽聚糖、脂磷壁酸(LTA)、M蛋白、菌毛蛋白、纤连蛋白结合蛋白和细胞结合链激酶。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法,其中所述生物样品从患有或疑似患有细菌感染的受试者获得。

12.根据权利要求11所述的方法,其中所述受试者是人。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中所述A族链球菌种是化脓性链球菌或停乳链球菌。

14.一种用于检测样品中A族链球菌存在的设备,其包括:基质,所述基质具有

15.根据权利要求14所述的设备,其中所述检测抗体是多克隆抗体。

16.根据权利要求14或15所述的设备,所述检测抗体或检测抗原结合片段包括:金纳米颗粒标记、化学发光标记、放射性标记、生物发光标记、荧光标记、生色标记、光谱标记、光化学标记或电化学发光标记。

17.根据权利要求14-16中任一项所述的设备,其中用于将所述被标记抗原特异性结合到所述捕获区的所述装置是捕获抗体或捕获抗原结合片段。

18.根据权利要求17所述的设备,其中所述捕获抗体是多克隆抗体。

19.一种用于选择患者进行抗生素治疗的方法,其包括:

20.一种用于选择患者进行抗生素治疗的方法,其包括:

21.根据权利要求19或20所述的方法,其中抗生素治疗包括以下的一种或多种:青霉素、氨苄青霉素、舒巴坦、阿莫西林、克拉维酸、克林霉素、红霉素、大环内酯类和头孢菌素。

22.一种试剂盒,其包括:靶向A族链球菌特异性抗原的检测抗体;N-丙酰基-D-葡糖胺、2-N-丁酰基-D-葡糖酰胺、双-(2-(D-2-脱氧-葡糖胺基))-PEG3-酰胺、m-PEG4-葡糖胺、m-PEG6-葡糖胺或m-PEG10-葡糖胺的至少一种;以及使用...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种用于检测生物样品中至少一种a族链球菌种的存在的方法,其包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述抗体是多克隆抗体。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述抗体或抗原结合片段包括:金纳米颗粒标记、化学发光标记、放射性标记、生物发光标记、荧光标记、生色标记、光谱标记、光化学标记或电化学发光标记。

4.根据权利要求3所述的方法,其中所述荧光标记选自:铕、tagbfp、azurite、ebfp2、mkalamal、sirius、sapphire、t-sapphire、ecfp、cerulean、scfp3a、mturquoise、单体midoriishi-cyan、tagcfp、mtfpl、egfp、emerald、superfolder gfp、单体azami green、taggfp2、mukg、mwasabi、eyfp、citrine、venus、syfp2、tagyfp、单体kusabira-orange、mkok、mko2、morange、morange2、mraspberry、mcherry、dsred、mstrawberry、mtangerine、tdtomato、tagrfp、tagrfp-t、mapple、mruby、mplum、hcred-tandem、mkate2、mneptune、nirfp、tagrfp657、ifpi.4、irfp、mkeima red、lss-mkatel、lss-mkate2、pa-gfp、pamcherryl、patagrfp、kaede(绿色)、kaede(红色)、kikgrl(绿色)、kikgrl(红色)、pscfp2、ps-cfp2、meos2(绿色)、meos2(红色)、psmorange和dronpa。

5.根据权利要求3所述的方法,其中所述化学发光标记选自:β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶(hrp)和碱性磷酸酶。

6.根据权利要求3所述的方法,其中所述生物发光标记选自:水母发光蛋白、萤火虫萤光素酶、renilla萤光素酶、红色萤光素酶、luxab或纳米萤光素酶。

7.根据权利要求3所述的方法,其中所述放射性标记选自:3h、14c、32p、35s、36cl、57co、131i和186re。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述生物样品是尿液、唾液、痰、粘液、咽拭子样品、全血、血浆、血清、羊水、精液、伤口分泌物、阴道分泌物、眼泪或脊髓液。

9.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员:M·D·费希特那任汇淼
申请(专利权)人:贝克顿·迪金森公司
类型:发明
国别省市:

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