【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物。更具体地，涉及一种特异性结合反转录酶的rna适配体及其应用。
技术介绍
1、在荧光定量rcr进行分子诊断，当以rna作为模板时，需要先进行反转录生成dna序列，作为后续扩增的模板，因此，rna扩增体系中会使用反转录酶。反转录酶的活性发挥一般为50℃左右，但在低于该温度范围下活性依然存在。体系中游离的单链引物容易互搭或与模板配对，在反转录酶和taq酶的作用下配对并延伸，即形成引物二聚体或非特异性产物。这些非特异性产物又回在后续的反应里作为模板继续扩增，导致非特异性产物的不断积累。最终严重干扰目的片段的扩增，更严重的情况会导致特异性条带不能扩增出来。为避免在反应前期产生引物二聚体和非特异性产物，一般会对体系中的酶进行热启动修饰，使其在低温时与酶结合封闭酶活性，高温时释放恢复酶活性。目前使用最多的是抗体和化学修饰，以实现热启动。例如taq酶通常使用抗体修饰或化学修饰来封闭低温下的酶活，在高温下抗体变性失去封闭酶功能。而对于反转录酶通常为50℃左右的中等温度进行反应，该温度不足以破坏抗体或化学修饰的封闭作用。因此，中等温度反应的反转录酶不能使用抗体或化学修饰。
2、核酸适配体是一类具有特定结构的寡聚核苷酸，其与抗体或化学修饰作用类似，当处于低温或室温时，可形成特定的结构与酶结合，封闭酶活性；当温度升高时，核酸适配体变性，从酶上脱离，从而酶可以发挥活性。荧光定量rcr全预混体系提前将核酸扩增缓冲液、酶混合液、引物探针反应液预混，需要长时间封闭反转录酶活性，以解决扩增灵敏度下降和阴性样本中出现非特异性扩增的问
3、因此，需要提供一种可提升荧光定量rcr全预混体系的性能的rna适配体。
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的在于提供可特异性结合反转录酶的rna适配体，以解决反转录酶应用于荧光定量rcr时的热启动问题。
2、本专利技术的另一个目的在于提供上述rna适配体在抑制反转录酶活性中的应用。
3、为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：
4、本专利技术首先提供了一种可特异性结合反转录酶的rna适配体，所述rna适配体为如下1）或2）：
5、1）如seq id no.1-4任一所示的rna分子；
6、2）与1）所示的rna分子具有60%以上的同源性，且能够特异结合逆转录酶的序列。
7、优选的，所述60%以上的同源性，可以为65%、70%、80%、85%、90%、95%等及以上的同源性。
8、进一步，所述rna适配体中间互补碱基数量为16-20。
9、进一步，所述rna适配体末端非配对碱基数量为4-12。
10、进一步，所述rna适配体可连接荧光标记物和/或放射性物质和/或治疗性物质和/或非放射性标记物（如生物素或地高辛）和/或纳米发光材料和/或酶。
11、进一步，所述rna适配体的3’端碱基可被磷酸化、氧甲基化、甲基化、氨基化或巯基化。
12、本专利技术提供的rna适配体经过理性设计得到，能在常温下与反转录酶特异性结合以封闭反转录酶活性，当温度达到50℃时，rna适配体变性，从而实现了反转录酶温启动的目的，经过染料法全预混qpcr和探针法全预混qpcr测试，可在37℃条件下长时间抑制反转录酶活性且对其原本的功能不产生影响。
13、本专利技术进一步提供了上述rna适配体在如下任一中的应用：
14、1）在抑制反转录酶活性中的应用；
15、2）在反转录反应中的应用；
16、3）在荧光定量rcr中的应用。
17、本专利技术进一步还提供了一种反转录试剂盒或荧光定量rcr试剂盒，所述反转录试剂盒或荧光定量rcr试剂盒包含上述rna适配体。
18、进一步，所述试剂盒还包括用于反转录反应或荧光定量rcr的其他试剂，如反转录酶、反应缓冲液、dntp、引物和无核酸酶水中的至少一种。
19、在本专利技术具体的实施方式中，所述荧光定量rcr为染料法和探针法全预混荧光定量rcr。
20、本专利技术的有益效果如下：
21、本专利技术提供的rna适配体在37℃以下能以极高亲和力与反转录酶结合，封闭反转录酶活性；而当温度达到50℃时，rna适配体变性，从反转录酶脱离，实现了反转录酶的温启动，且对反转录酶原本的功能未产生影响，从而减少了非特异性产物的积累，尤其提升了全预混qpcr的产品性能。同时，本专利技术提供的rna适配体序列简单，为人工体外合成，所用生产技术成熟，合成序列简单、长度较短，生产周期短，适用于大规模的商业生产。
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1.一种可特异性结合反转录酶的RNA适配体，其特征在于，所述RNA适配体为如SEQ IDNO.1-4任一所示的RNA分子。
2.根据权利要求1所述的RNA适配体，其特征在于，所述RNA适配体中间互补碱基数量为16-20。
3.根据权利要求1所述的RNA适配体，其特征在于，所述RNA适配体末端非配对碱基数量为4-12。
4.根据权利要求1所述的RNA适配体，其特征在于，所述RNA适配体连接荧光标记物和/或放射性物质和/或治疗性物质和/或非放射性标记物和/或纳米发光材料和/或酶。
5.根据权利要求1所述的RNA适配体，其特征在于，所述RNA适配体的3’端碱基被磷酸化、氧甲基化、甲基化、氨基化或巯基化。
6.权利要求1-5任一所述的RNA适配体在抑制反转录酶活性中的应用。
7.权利要求1-5任一所述的RNA适配体在反转录反应中的应用。
8.权利要求1-5任一所述的RNA适配体在荧光定量RCR中的应用。
9.一种反转录试剂盒，其特征在于，所述反转录试剂盒包含权利要求1-5任一所述的RNA适配体
10.一种荧光定量RCR试剂盒，其特征在于，所述荧光定量RCR试剂盒包含权利要求1-5任一所述的RNA适配体。
...【技术特征摘要】
1.一种可特异性结合反转录酶的rna适配体，其特征在于，所述rna适配体为如seq idno.1-4任一所示的rna分子。
2.根据权利要求1所述的rna适配体，其特征在于，所述rna适配体中间互补碱基数量为16-20。
3.根据权利要求1所述的rna适配体，其特征在于，所述rna适配体末端非配对碱基数量为4-12。
4.根据权利要求1所述的rna适配体，其特征在于，所述rna适配体连接荧光标记物和/或放射性物质和/或治疗性物质和/或非放射性标记物和/或纳米发光材料和/或酶。
5.根据权利要求1所述的rna...
【专利技术属性】
技术研发人员：李倩雯，宋新文，耿亮，辛文，
申请(专利权)人：北京全式金生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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