【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术与家畜育种，具体涉及检测竞争性等位基因特异性pcr(kasp)分型引物及其应用，更具体的涉及一种牛非编码rna(adncr)基因突变的kasp分型方法及其应用。
技术介绍
1、脂肪细胞分化相关长链非编码rna(adncr)在脂肪细胞分化过程中显着下调，adncr全长1730nt，位于牛13号染色体上，具有两个外显子。关于adncr基因的报道表明，adncr主要在细胞质中表达，过表达adncr能抑制牛脂肪生成，下调脂肪细胞分化标志性基因pparα、c/ebpβ和fabp4表达。之前的研究表明adncr基因多态性与牛的生长特性有关。作为牛生长分子标记辅助选择(mas)的重要候选基因，牛adncr基因单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，snp)的检测具有重要意义。
2、常见的snp检测方法有：测序法、酶切法、基因芯片法、snpshot、kasp法等。然而测序法、酶切法、基因芯片法、snpshot等方法存在阳性率低、设备要求高、成本偏高等问题，近年来，kasp(kompetitive allele specific polymerase chain reaction，竞争性等位基因特异性pcr)因其经济灵活的特点，作为国际上主流snp检测方法之一，替代传统的高通量测序，在snp分型研究中发挥重要作用。竞争性等位基因特异性pcr(kompetitive allele-specific pcr,kasp)是近年来新出现的一种dna变异分型技术，基于竞争性等位基因特异性
3、通过检索，尚未发现与本专利申请相关的公开专利文献。
技术实现思路
1、本专利技术目的在于克服现有技术中的不足之处，本专利技术的目的在于检测牛lncrnaadncr基因nm_037340:g.1263t>a位点的kasp分型引物，通过对lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a位点单核苷酸多态性进行准确的检测，可简单、快速、成本低、通量高、结果准确的检测g.1263t>a位点单核苷酸多态性信息。
2、本专利技术通过以下技术方案实现的：
3、本专利技术提供一种牛非编码rna(adncr)基因突变的kasp分型方法，其特征在于：检测牛lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a多态位点，使用lncrna adncr基因snp位点kasp分型引物进行检测。所述kasp分型引物由引物a、引物b和引物c组成。
4、优选的，所述引物a的核苷酸序列如seq id no.1所示，5’末端连接荧光基团fam：引物b的核苷酸序列如seq id no.2所示，5’末端连接荧光基团vic；引物c的核苷酸序列如
5、seq id n0.3所示。
6、而且，所述引物对为：
7、seq id no.1：gaaggtgaccaagttcatgctactcctatttccttgtgttcgtaa(引物a)
8、seq id no.2：gaaggtcggagtcaacggattactcctatttccttgtgttcgtat(引物b)
9、seq id n0.3：caataactatttaagtgaactgggtggtt(引物c)
10、所述引物a、引物b和引物c用于使用kasp分型进行lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a位点单核苷酸多态性检测。
11、同时，本专利技术还提供一种检测lncrna adncr基因snp位点kasp分型试剂组合物。
12、所述的kasp分型试剂组合物由引物预混液、pcr master mix和rnase-free水组成。
13、同时，本专利技术还提供了一种用于检测lncrna adncr基因snp位点kasp分型试剂组合物在制备检测试剂盒中的应用。
14、所述检测lncrna adncr基因snp位点kasp分型试剂中还包括qrt-pcr反应常用试剂和其它一些辅助试剂，这些试剂的特性以及它们的配制方法均是本领城技术人员所熟知的，在本专利技术的具体实施方案中，使用了qrt-pcr的方法。
15、本专利技术提供用于检测lncrna adncr基因snp位点kasp分型试剂。
16、通过实施本专利技术具体的
技术实现思路
,可以达到以下有益效果：
17、(1)本专利技术提供了检测lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a多态位点的kasp分型检测引物及其试剂盒及其应用，涉及生物工程
，该引物包括与g.1263t>a单核苷酸多态位点相匹配的引物组。该引物实现了lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a单核苷酸多态位点kasp分型的准确检测。该方法对于牛lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a位点单核苷酸多态性相关研究具有重要意义及价值。
18、(2)本专利技术提供的用于检测lncrna adncr基因snp位点kasp分型试剂对于nm_037340:g.1263t>a位点的检测具有灵敏度高、特异性好、准确率高等优点,实现了lncrnaadncr基因nm_037340:g.1263t>a位点单核苷酸多态性的简单、快速、成本低、通量高、结果准确的检测。该方法对于牛lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a位点单核苷酸多态性相关研究具有重要意义及价值.
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1.一种牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法，其特征在于：检测牛lncRNAADNCR基因NM_037340:g.1263T>A多态位点，使用LncRNA ADNCR基因SNP位点KASP分型引物进行检测。
2.根据权利要求1所述一种牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法，其特征在于：所述KASP分型引物由引物A、引物B和引物C组成，具体如下，
3.根据权利要求2所述一种牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法，其特征在于，所述分型方法包括以下步骤：根据与KASP引物带有的接头序列匹配的不同类型荧光的强度对牛lncRNA ADNCR基因NM_037340:g.1263T>A突变位点的TT、TA、AA三种基因型进行分型。
4.一种如权利要求1所述的牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法在牛分子标记辅助选择育种中的应用。
5.根据权利要求4所述的牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法在牛分子标记辅助选择育种中的应用，其特征在于：所述lncRNA
6.根据权利要求4或5所述的牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法在牛分子标记辅助选择育种中的应用，其特征在于：所述定位于牛参考序列NM_037340:g.1263T>A位点可以作为牛肉质性状的分子标记。
7.根据权利要求6所述的牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法在牛分子标记辅助选择育种中的应用，其特征在于：对通过鉴定具有所述分子标记的牛个体进行肉质性状早期选择。
8.一种使用权利要求1所述的牛非编码RNA(ADNCR)基因突变的KASP分型方法的试剂盒，其特征在于，检测牛lncRNA ADNCR基因NM_037340:g.1263T>A多态位点，使用LncRNAADNCR基因SNP位点KASP分型引物组进行检测，所述引物组由引物A、引物B和引物C组成；
...【技术特征摘要】
1.一种牛非编码rna(adncr)基因突变的kasp分型方法，其特征在于：检测牛lncrnaadncr基因nm_037340:g.1263t>a多态位点，使用lncrna adncr基因snp位点kasp分型引物进行检测。
2.根据权利要求1所述一种牛非编码rna(adncr)基因突变的kasp分型方法，其特征在于：所述kasp分型引物由引物a、引物b和引物c组成，具体如下，
3.根据权利要求2所述一种牛非编码rna(adncr)基因突变的kasp分型方法，其特征在于，所述分型方法包括以下步骤：根据与kasp引物带有的接头序列匹配的不同类型荧光的强度对牛lncrna adncr基因nm_037340:g.1263t>a突变位点的tt、ta、aa三种基因型进行分型。
4.一种如权利要求1所述的牛非编码rna(adncr)基因突变的kasp分型方法在牛分子标记辅助选择育种中的应用。
5.根据权利要求4所述的牛非编码rna(adncr)基因突变的...
【专利技术属性】
技术研发人员：蓝贤勇，杨钰塔，蒋恩惠，刘悦，毛翠，宋恩亮，姜富贵，潘传英，顾洪烨，杜书增，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：
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