【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及一种细菌组合物及其分离制备方法、转化积雪草总苷的方法和应用。
技术介绍
1、积雪草为伞形科积雪草属植物，性寒，味苦、辛，具有清热利湿，解毒消肿之功效，是广东、广西、江西、浙江、云南、贵州等地区常见的中草药。积雪草原料中的高活性成分积雪草酸与羟基积雪草酸的含量很低，且远低于积雪草总苷的含量，目前为了获得积雪草酸与羟基积雪草酸成分主要采用的工艺技术有化学方法和生物方法，化学方法为将积雪草苷与羟基积雪草苷进行酸水解或碱水解的方法，或采用有机溶剂从积雪草原料中进行提取分离，当采用为酸水解或碱水解的工艺技术将积雪草总苷转化为积雪草酸与羟基积雪草酸时，过程中会使用大量的酸液或碱液，且水解反应对设备和操作条件具有相应的要求，从绿色环保与安全的角度，不是理想的方式。当采用其他非积雪草来源的微生物对积雪草苷与羟基积雪草苷进行生物转化时，选择的微生物种类具有很大的偶然性，且并不能较好地阐明积雪草内生菌与积雪草总苷成分含量的相关性，目前未见报道采用积雪草内生菌是否对积雪草总苷具有转化作用。
2、目前关于积雪草内生菌的研究较少，且没有从积雪草内生菌中筛选分离得到芽孢杆菌与类芽孢杆菌的报道，在中药材活性成分的生物转化研究方面，也未见类芽孢杆菌对积雪草总苷具有转化作用的报道。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中的技术问题，本专利技术提供一种细菌组合物及其分离制备方法、转化积雪草总苷的方法和应用，从积雪草内生菌中筛选分离得到与积雪草活性成分积雪草总苷有显著相关性的内
2、为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案如下：
3、本专利技术提供一种细菌组合物，所述组合物中包括芽孢杆菌与类芽孢杆菌，所述组合物中芽孢杆菌与类芽孢杆菌丰度≥95％，所述组合物中芽孢杆菌占比为65～75％，类芽孢杆菌占比为20～30％。
4、作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的细菌组合物中，所述芽孢杆菌与类芽孢杆菌从积雪草根内生菌中分离得到。
5、本专利技术从积雪草根内生菌中分离得到包括芽孢杆菌与类芽孢杆菌两类细菌的组合物，且组合物中芽孢杆菌占比为65～75％，类芽孢杆菌占比为20～30％，上述组合物对积雪草总苷的转化率为100％。
6、基于相同的技术构思，本专利技术还提供上述细菌组合物的分离制备方法，包括以下步骤：
7、s1、采集新鲜积雪草全株，采用表面消毒法处理得到积雪草根，结合组织块法和划线法分离纯化积雪草根内生菌。
8、s2、将步骤s1中得到的积雪草根内生菌加入到含有积雪草总苷的复筛培养基中培养，检测菌株对积雪草总苷的转化情况，确定对积雪草总苷有转化作用的菌株，并对细菌菌属进行鉴定。
9、作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的分离制备方法中，步骤s1中，利用薄层色谱法初步筛选对积雪草总苷有转化作用的菌株，步骤s1中利用高效液相色谱法检测积雪草总苷的转化效率。
10、作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的分离制备方法中，步骤s1中，步骤s2中，所述复筛培养基中积雪草总苷的含量≥60％。
11、本专利技术中在复筛培养基中添加积雪草总苷的含量≥60％，当含量小于60％时，因其中含有大量的其他成分(非积雪草总苷的三萜皂苷类、黄酮类、糖类化合物等)可能会影响该专利技术中的内生菌种类的生长，从而影响内生菌对目标成分积雪草总苷的转化效果。
12、作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的分离制备方法中，步骤s1中，所述积雪草根内生菌的接种量为0.5～5％。
13、本专利技术中若接种量小于0.5％，内生菌的培养生长时间明显延长，且接种量太低可能造成内生菌接种失败，接种量大于5％，接种效果(内生菌生长与转化积雪草总苷效果)没有明显的优化，因此选择积雪草根内生菌的接种量为0.5～5％即可。
14、基于相同的技术构思，本专利技术还提供上述细菌组合物转化积雪草总苷的方法，其包括以下步骤：
15、s1、配置细菌组合物培养基，在培养基中加入含量≥60％的积雪草总苷；
16、s2、将细菌组合物接种至步骤1中的培养基中，培养后得到转化后的积雪草总苷。
17、作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的转化方法中，步骤s1中，步骤s1中，积雪草总苷中羟基积雪草苷的含量≥40％，积雪草苷的含量≥20％。
18、作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的转化方法中，步骤s2中，细菌组合物的接种量为0.5～5％。
19、作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的转化方法中，步骤s2中，培养温度为28～30℃，培养时间为7～10天。
20、基于相同的技术构思，本专利技术还提供上述细菌组合物或者上述细菌组合物转化积雪草总苷的方法在转化积雪草总苷中的应用，转化方法为生物转化。
21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
22、(1)本专利技术提供一种来源于积雪草内生菌的细菌组合物，主要包括芽孢杆菌与类芽孢杆菌，能够对积雪草总苷进行高效转化产生积雪草酸与羟基积雪草酸。本专利技术中的细菌组合物没有具体到哪种芽孢杆菌与类芽孢杆菌，从转化积雪草总苷成分的角度来说，现有技术中选择非积雪草来源的芽孢杆菌与类芽孢杆菌会有一定的盲目性，且组合物的比例关系也没法参照。
23、(2)本专利技术采用来源于积雪草内生菌的芽孢杆菌与类芽孢杆菌对积雪草总苷进行转化，与其他来源的微生物相比，选择积雪草来源的芽孢杆菌与类芽孢杆菌组合物对积雪草总苷进行转化也有助于进一步研究该菌组合物与积雪草内在品质的关系。
24、(3)本专利技术为积雪草高活性成分积雪草酸与羟基积雪草酸的高效、绿色、安全的制备提供更多的选择。
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1.一种细菌组合物，其特征在于，所述组合物中包括芽孢杆菌与类芽孢杆菌，所述组合物中芽孢杆菌与类芽孢杆菌丰度≥95％，所述组合物中芽孢杆菌占比为65～75％，类芽孢杆菌占比为20～30％。
2.根据权利要求1所述的细菌组合物，其特征在于，所述芽孢杆菌与类芽孢杆菌从积雪草根内生菌中分离得到。
3.权利要求1或2所述的细菌组合物的分离制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的细菌组合物的分离制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述复筛培养基中积雪草总苷的含量≥60％，所述积雪草根内生菌的接种量为0.5～5％。
5.根据权利要求3所述的细菌组合物的分离制备方法，其特征在于，步骤S1中，利用薄层色谱法初步筛选对积雪草总苷有转化作用的菌株，步骤S2中，利用高效液相色谱法检测积雪草总苷的转化效率。
6.权利要求1或2所述的细菌组合物转化积雪草总苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的细菌组合物转化积雪草总苷的方法，其特征在于，步骤S1中，积雪草总苷中羟基积雪草苷的含量≥40％，积雪草
8.根据权利要求6所述的细菌组合物转化积雪草总苷的方法，其特征在于，步骤S2中，细菌组合物的接种量为0.5～5％。
9.根据权利要求6所述的细菌组合物转化积雪草总苷的方法，其特征在于，步骤S2中，培养温度为28～30℃，培养时间为7～10天。
10.权利要求1～2任一所述的细菌组合物或权利要求4～9任一所述的细菌组合物转化积雪草总苷的方法在转化积雪草总苷中的应用，其特征在于，转化方法为生物转化。
...【技术特征摘要】
1.一种细菌组合物，其特征在于，所述组合物中包括芽孢杆菌与类芽孢杆菌，所述组合物中芽孢杆菌与类芽孢杆菌丰度≥95％，所述组合物中芽孢杆菌占比为65～75％，类芽孢杆菌占比为20～30％。
2.根据权利要求1所述的细菌组合物，其特征在于，所述芽孢杆菌与类芽孢杆菌从积雪草根内生菌中分离得到。
3.权利要求1或2所述的细菌组合物的分离制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的细菌组合物的分离制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述复筛培养基中积雪草总苷的含量≥60％，所述积雪草根内生菌的接种量为0.5～5％。
5.根据权利要求3所述的细菌组合物的分离制备方法，其特征在于，步骤s1中，利用薄层色谱法初步筛选对积雪草总苷有转化作用的菌株，步骤s2中，利用高效液...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄建华，王俊杰，陈聪，李潘阳，方会龙，刘青，刘芳，陈小平，刘思妤，张远芳，刘泽，彭群龙，
申请(专利权)人：湘南学院，
类型：发明
国别省市：
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