【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物及对羟基苯甲酸降解，具体涉及一种荧光假单胞菌及其在生物降解对羟基苯甲酸中的应用。
技术介绍
1、对羟基苯甲酸是一种有机化合物，分子式为c7h6o3，纯品为无色的细小结晶或结晶状粉末。在研究茶树生长过程中，发现由于植物的化感作用(allelopathy)，茶树会向环境释放某些化学物质影响自身或其他植物的生长发育，一些化感物质，会对同种植物的生长产生抑制作用，因此也被称为自毒物质。而对羟基苯甲酸就是其主要的自毒物质之一。
2、在研究茶树生长过程中，土壤会趋向于酸化成为一个大问题，适宜茶树生长的土壤ph范围为4.5～6.0其中5.5是最适值。而茶树生长过程中，一些有机酸会导致土壤过度酸化不利于茶树生长，进步调查得知土壤ph受茶树聚铝及其根系吸收代谢特性(如有机酸分泌等)的影响，茶树自身生长特性一直被认为是导致茶园土壤酸化的原因之一，即自毒物质导致了土壤酸化，这就导致了土壤中盐基离子的淋失以及会降低土壤对重金属离子的吸附力，对茶树生长是不利的。而另一方面自毒物质对植物生长发育有很多负面影响，抑制根的生长，叶绿素的合成和增加活性氧的产生等，所以如今对于如何解决茶树生长过程中土壤酸化和茶树自毒物质的积累给茶树带来的生长抑制成为了一大难题。
3、长期种植茶叶会给土壤带来的宿根连作，而主要原因有五种：1、土壤营养元素不平衡，2、土壤化学性质变化，3、土壤微生物种类失衡，4、作物的自毒作用，5、土壤物理性质改变。而目前土壤宿根连作问题的解决办法有很多，比如换土法，高温消毒法、科学合理施用化肥、增施微生物
技术实现思路
1、针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的一个技术问题在于提供一种荧光假单胞菌，菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，保藏日期为2023年1月28日，保藏编号为cgmcc 1.61612。本专利技术所要解决的另一个技术问题在于提供一种荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，该菌株具有良好的对羟基苯甲酸降解性能，利用该菌株生物降解对羟基苯甲酸，在3d内对初始浓度为2000-3000mg·l-1的对羟基苯甲酸降解率可达到90％-95％。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、一种荧光假单胞菌，其分类命名为荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)zl22，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc1.61612，保藏日期为2023年1月28日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。
4、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)zl22，是从武夷山市溪边村茶山土壤中筛选获得。
5、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)zl22的生物学特征：在选择培养基平板上菌落较小，颜色荧光绿，无芽孢，不透明，革兰氏阴性菌，表面光滑，圆形，边缘整齐；透射电镜下观察该菌体的形态为短杆菌，无鞭毛。
6、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)zl22的16s rdna序列如seq id no：1所示，将所测16srdna序列与genbank数据库中的序列进行blast比对，结果表明，所得菌株菌株与假单胞菌属(pseudomonas)同源性最高。结合形态、生理生化特征及16srdna序列分析，鉴定为荧光假单胞菌pseudomonas fluorescens)。
7、上述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用。
8、所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，包括以下步骤：
9、1)将荧光假单胞菌经过液摇培养，获得种子液，即含菌悬液；
10、2)将含菌细胞悬液接种至msm培养基中，以对羟基苯甲酸为碳源进行培养，降解对羟基苯甲酸，其中，培养条件为：28～30℃、200～240rpm，ph为6.0～8.0；
11、所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，步骤2)，msm培养基中，各组分的终浓度为：(nh4)2so42.0g/l，mgso4.7h2o 0.2g/l，caci2·2h2o 0.01g/l，feso4·7h2o0.001g/l，na2hpo4·12h2o 1.5g/l，kh2po41.5g/l，溶剂为水。
12、所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，步骤2)，含菌悬液的od600值为0.6～0.8，含菌悬液的体积接种量为0.1％～0.3％。
13、所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，步骤1)，所述含菌细胞悬液的制备方法为：
14、a)富集培养
15、将从茶山采集的土壤加入荧光假单胞菌的选择培养基，在28～30℃、200～240rpm下，培养22～24h获得土壤菌悬液；
16、b)斜面培养
17、将得到的土壤菌悬液接种至斜面培养基在28～30℃，培养22～24h，获得菌体斜面；
18、c)液摇培养
19、从菌体斜面挑取菌落接种至lb培养基进行种子培养，于28～30℃，200～240rpm下培养10～12h，获得种子液。
20、所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，荧光假单胞菌选择培养基组成成分为：蛋白糖蛋白胨0.5g/l，淀粉0.5g/l，酵母提取物0.5g/l，葡萄糖0.5g/l，cas-氨基酸0.5g/l，丙酮酸钠0.3g/l，k2hpo40.3g/l，mgso4·7h2o 0.05g/l，溶剂为水。
21、所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，斜面培养基组成成分为：蛋白糖蛋白胨0.5g/l，淀粉0.5g/l，酵母提取物0.5g/l，葡萄糖0.5g/l，cas-氨基酸0.5g/l，丙酮酸钠0.3g/l，k2hpo40.3g/l，mgso4·7h2o0.05g/l，溶剂为水，琼脂15.0g/l。
22、上述荧光假单胞菌在制备茶山土壤专用微生物肥料中的应用。
23、所述应用，将荧光假单胞菌种子液发酵培养，发酵结束后6000～10000rpm离心收集菌种，并干燥制备成干粉，使用时将干粉溶于水中，采用灌根法施加于茶树根部。
24、相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：
25、本专利技术在武夷山市溪边村茶山采集土样，通过宏基因组分析发现，土壤中存在一种荧光假单胞菌，将该荧光本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种荧光假单胞菌，其分类命名为荧光假单胞菌(Pseudomonas fLuorescens)ZL22，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC 1.61612，保藏日期为2023年1月28日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。
2.权利要求1所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用。
3.根据权利要求2所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，步骤2)，MSM培养基中，各组分的终浓度为：(NH4)2SO4 2.0g/L，MgSO4.7H2O 0.2g/L，CaCI2·2H2O 0.01g/L，FeSO4·7H2O 0.001g/L，Na2HPO4·12H2O 1.5g/L，KH2PO4 1.5g/L，溶剂为水。
5.根据权利要求3所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，步骤2)，含菌悬液的OD600值为0.6～0.8，含菌悬液的体积接种
6.根据权利要求3所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，步骤1)，所述含菌细胞悬液的制备方法为：
7.根据权利要求6所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，荧光假单胞菌选择培养基组成成分为：蛋白糖蛋白胨0.5g/L，淀粉0.5g/L，酵母提取物0.5g/L，葡萄糖0.5g/L，cas-氨基酸0.5g/L，丙酮酸钠0.3g/L，K2HPO4 0.3g/L，MgSO4·7H2O0.05g/L，溶剂为水。
8.根据权利要求6所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，斜面培养基组成成分为：蛋白糖蛋白胨0.5g/L，淀粉0.5g/L，酵母提取物0.5g/L，葡萄糖0.5g/L，cas-氨基酸0.5g/L，丙酮酸钠0.3g/L，K2HPO4 0.3g/L，MgSO4·7 H2O0.05g/L，溶剂为水，琼脂15.0g/L。
9.权利要求1所述在制备茶山土壤专用微生物肥料中的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，将荧光假单胞菌种子液发酵培养，发酵结束后6000～10000rpm离心收集菌种，并干燥制备成干粉，使用时将干粉溶于水中，采用灌根法施加于茶树根部。
...【技术特征摘要】
1.一种荧光假单胞菌，其分类命名为荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)zl22，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc 1.61612，保藏日期为2023年1月28日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。
2.权利要求1所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用。
3.根据权利要求2所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，步骤2)，msm培养基中，各组分的终浓度为：(nh4)2so4 2.0g/l，mgso4.7h2o 0.2g/l，caci2·2h2o 0.01g/l，feso4·7h2o 0.001g/l，na2hpo4·12h2o 1.5g/l，kh2po4 1.5g/l，溶剂为水。
5.根据权利要求3所述荧光假单胞菌在生物降解对羟基苯甲酸中的应用，其特征在于，步骤2)，含菌悬液的od600值为0.6～0.8，含菌悬液的体积接种量为0.1％～0.3％。
6.根据权利要求3所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾小丽，吴乐康，邱施卉，向玲，李换换，朱笔通，
申请(专利权)人：武夷学院，
类型：发明
国别省市：
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