【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及纳米生物医学，具体为一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法及其免疫效果。
技术介绍
1、目前，疫苗的免疫原性和耐热性依旧是影响其使用效率的关键因素。疫苗热稳定性差，储存和运输都必须保持在低温内，称为冷链运输。但疫苗冷链运输需要十分昂贵的费用，而且还增加了疫苗失效的风险。据统计，疫苗总成本的80％都用于冷链储存和运输，而每年约有50％的疫苗产品由于冷链系统的不完善而被浪费。
2、截至目前，对于hbv的治疗仍没有特效药物，而接种疫苗是预防hbv感染的有效方法。但目前市售乙肝疫苗为重组纯化的乙肝表面抗原(hbsag)附加铝佐剂的亚单位疫苗。铝佐剂虽提高了乙肝疫苗的免疫原性，但主要激发的是体液免疫应答，细胞免疫较弱。此外，铝佐剂对环境温度比较敏感且具有一定的副作用。基于上述现象，迫切需要开发研制更安全、更有效、热稳定好的新型乙肝纳米疫苗。
3、目前提高疫苗热稳定性和免疫原性的方法主要依赖于基因工程、冷冻干燥和使用稳定剂，这些方法仍达不到预期。沸石咪唑酯骨架材料-8(zif-8)是金属有机框架材料(mofs)家族中的一员，由zn2+和meim配位而成，具有易于合成、化学稳定性、热稳定性、缓释、抗菌和生物相容性好的优点等，可被用作蛋白质、寡核苷酸和活细胞的保护性骨架，改善全身免疫应答和免疫记忆。sf是一种生物来源性的蛋白质聚合物，由具有大疏水域的嵌段共聚物结构组成，周围散布着小的亲水区域，形成了通过物理交联而稳定的组织化晶体区域β-折叠。因此，zif-8和sf联合也许是一种新型安全有效的疫苗佐剂，但目前尚未有文
4、本实验室长期致力于利用纳米技术解决疫苗依赖冷链运输问题，目前国内外尚未利用该技术对乙肝疫苗进行常温化储存。为此，亟待建立一种以sf修饰的zif-8为佐剂的乙肝纳米疫苗制备方法。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法及其免疫效果，该方法制备乙肝纳米疫苗提高了hbsag的热稳定性，同时也增强了疫苗的体液免疫和细胞免疫。与铝佐剂相比，该方法具有显著的免疫反应和免疫记忆性，且在体内和体外具有良好的生物相容性。
3、(二)技术方案
4、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，将hbsag包封于zif-8中形成hbsag@zif-8(hz)，然后再使用丝素蛋白(sf)对hz表面进行修饰，最终制成乙肝纳米疫苗(hbsag/sf@zif-8，hsz)。
5、优选的，所述hbsag包封到zif-8中时，所述二甲基咪唑和醋酸锌的摩尔比为1:1-1:70，优选1:4。
6、优选的，所述hz的制备方法包括向hbsag中先加入二甲基咪唑(meim)溶液，然后加入醋酸锌(zn(oac)2)溶液混匀，反应后离心范围内优选、洗涤、干燥，即获得hz。
7、优选的，合成hz时，离心转速为5000-10000rpm，优选8000rpm；洗涤条件为使用pbs、蒸馏水或去离子水对离心沉淀，优选去离子水；干燥方式可选择室温真空干燥、冷冻干燥、高温真空干燥、喷雾干燥或泡沫干燥，优选室温真空干燥。
8、优选的，所述使用sf修饰hz时，所述sf加入质量为0.05％-2％(w/v)，优选0.1％。
9、优选的，所述hsz是将hz重悬于去离子水中，超声分散，随后加入sf后搅拌、超声、再搅拌、离心、洗涤，即获得hsz。
10、(三)有益效果
11、与现有技术相比，本专利技术提供了一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法及其免疫效果，具备以下有益效果：
12、1、该专利技术以zif-8为疫苗载体，再利用sf对其表面进行修饰，从而制备hsz，所制备得hsz在不同温度和时间处理后可提高疫苗中hbsag的免疫原活性，即可增加hsz的热稳定性。
13、2、该专利技术所制备的hsz在免疫balb/c小鼠后可产生较铝佐剂更高的hbsag特异性igg抗体水平、脾脏cd4+t和cd8+t淋巴细胞表达增加以及免疫记忆水平也有所提高。同时，hsz在25℃储存14d后免疫效果没有明显变化，且具有较好的生物安全性，该专利技术有望为打破疫苗冷链存储和运输提供新方法。
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1.一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：将HBsAg包封于ZIF-8中形成HBsAg@ZIF-8(HZ)，然后再使用丝素蛋白(SF)对HZ表面进行修饰，最终制成乙肝纳米疫苗(HBsAg/SF@ZIF-8，HSZ)。
2.根据权利要求1所述的一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：所述HBsAg包封到ZIF-8中时，所述二甲基咪唑和醋酸锌的摩尔比为1:1-1:70，优选1:4。
3.根据权利要求1所述的一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：所述HZ的制备方法包括向HBsAg中先加入二甲基咪唑(MeIM)溶液，然后加入醋酸锌(Zn(OAc)2)溶液混匀，反应后离心范围内优选、洗涤、干燥，即获得HZ。
4.根据权利要求1所述的一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：合成HZ时，离心转速为5000-10000rpm，优选8000rpm；洗涤条件为使用PBS、蒸馏水或去离子水对离心沉淀，优选去离子水；干燥方式可选择室温真空干燥、冷冻干燥、高温真空干燥、喷雾干燥或泡沫干燥，优选室温真空干燥。
5.根据权利要求1所述的一种双
6.根据权利要求1所述的一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：所述HSZ是将HZ重悬于去离子水中，超声分散，随后加入SF后搅拌、超声、再搅拌、离心、洗涤，即获得HSZ。
...【技术特征摘要】
1.一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：将hbsag包封于zif-8中形成hbsag@zif-8(hz)，然后再使用丝素蛋白(sf)对hz表面进行修饰，最终制成乙肝纳米疫苗(hbsag/sf@zif-8，hsz)。
2.根据权利要求1所述的一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：所述hbsag包封到zif-8中时，所述二甲基咪唑和醋酸锌的摩尔比为1:1-1:70，优选1:4。
3.根据权利要求1所述的一种双佐剂乙肝纳米疫苗制备方法，其特征在于：所述hz的制备方法包括向hbsag中先加入二甲基咪唑(meim)溶液，然后加入醋酸锌(zn(oac)2)溶液混匀，反应后离心范围内优选、洗涤、干燥，即获得hz。
【专利技术属性】
技术研发人员：王凯，张剑旭，李乾学，周博，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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