一种利用ＤＮＡ序列条码矫正二代高通量测序的序列丰度偏差的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用ＤＮＡ序列条码矫正二代高通量测序的序列丰度偏差的方法，通过引进１０个或１０个以上的ＤＮＡ序列作为条码标签，对各种不同样品的ＤＮＡ通过高通量测序获得的丰度数据进行矫正。本发明专利技术通过三种不同的设计引入ＤＮＡ序列条码，这三种方法可适用于各种不同的样品条件。在描述这三个技术设计时，我们的设计以４５４高通量测序为例。但这个原理同样适用于其他的高通量测序技术平台，包括ＳＯＬｉＤ、Ｐｏｌｙｎａｔｏｒ等等。本发明专利技术有效地克服了当前二代高通量测序的几个平台建库中的ｅｍｕｌｓｉｏｎ?ＰＣＲ步骤引入的实验误差。本发明专利技术设计的技术方法和实验流程，通过引入１００万种以上（４１０＝１０４８５７６）的ＤＮＡ序列条码，来区分和纠正在ｅｍｕｌｓｉｏｎ?ＰＣＲ过程中某一模板序列由于油包水小球破裂污染产生的偏高的序列读出丰度。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用ＤＮＡ序列条码矫正二代高通量测序的序列丰度偏差的方法，其特征是采用　　方式一：将１０个核酸序列组成的序列条码（用Ｎ代表）加到４５４建库ａｄａｐｔｏｒ的下游直接与样本ＤＮＡ相连的部分（其中字体加粗的部分为序列互补部分）＊＊＊或者，方式二：将１０个核酸序列组成的序列条码（用Ｎ代表）通过２个ＰＣＲ引物加到测序样品的一端，核酸序列条码通过最后一轮ＰＣＲ引入　　５’－ＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮ－与样本序列上游互补的特异序列－３’　　５’－ＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮ－与样本序列下游互补的特异序列－３’，或者，　　方式三：将高通量测序引导序列和１０（５×２）个核酸序列条码（用Ｎ代表）通过ＰＣＲ加到测序样品的两端（每端５个核酸条码序列），核酸序列条码通过最后一轮ＰＣＲ引入　　＃ＰＡ：５’－ＣＣＡＴＣＴＣＡＴＣＣＣＴＧＣＧＴＧＴＣＴＣＣＧＡＣＴＣＡＧ－Ｎ５－与样本序列上游互补的特异序列　　＃ＰＢ：５’－ＣＣＴＡＴＣＣＣＣＴＧＴＧＴＧＣＣＴＴＧＧＣＡＧＴＣＴＣＡＧ－Ｎ５－与样本序列下游互补的特异序列，　　上述三种方式ＤＮＡ序列条码对不同样品ＤＮＡ通过测序平台高通量测序获得的丰度数据进行矫正。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李轩，熊慧，郝沛，李亦学，
申请(专利权)人：苏州众信生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]