【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测花生金属硫蛋白mRNA表达水平的方法，尤其涉及一种实时 定量PCR检测花生金属硫蛋白mRNA表达水平的方法。
技术介绍
金属硫蛋白(metallothioneins，MTs)是一类富含Cys、通过Cys残基上的-SH与 镉等重金属离子螯合形成无毒或低毒的络合物，还可以与重金属等胁迫条件诱发产生的自 由基、R0S发生氧化还原反应，从而降低氧化损伤。植物金属硫蛋白基因的表达行为具有多 样性和复杂性，其表达因不同物种、不同MT类型、不同组织器官、不同外界条件而表达特性 各异，与植物的生长发育阶段也密切相关。实时定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入 荧光基团，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加，每 经过一个循环，收集一个荧光强度信号来实时监测产物量的变化。SYBR Green I实时定量 PCR是PCR定量技术的一种，可以对基因扩增的起始模板的拷贝数进行精确的定量，还可以 通过熔解曲线判断扩增产物的特异性，是一种灵敏度高、特异性好的检测技术。花生金属硫 蛋白基因已有研究表明在花生的重金属脱毒和活性氧的清除中发...
【技术保护点】
一种实时定量ＰＣＲ检测花生金属硫蛋白ｍＲＮＡ表达水平的方法，其包括如下步骤： １）通过将从花生组织中获得金属硫蛋白基因与载体连接，构建重组质粒，作为实时定量ＰＣＲ的标准品； ２）提取含有目的基因的重组质粒，计算出分子拷贝数，将重组质粒稀释成不同倍数，即为实时定量ＰＣＲ反应的标准品模板；及 ３）提取所需组织的总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ作为实时定量ＰＣＲ模板，进行实时定量ＰＣＲ，得出起始模板的拷贝数，对其ｍＲＮＡ表达水平进行检测分析。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：单世华，万书波，杨志艺，李春娟，闫彩霞，张廷婷，
申请(专利权)人：山东省花生研究所，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]
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