一种漆酶基因MvLac5的同源过表达工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供的来源于疣孢漆斑菌的基因MvLac5，是一种能编码漆酶的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，并将所述基因克隆，重组得到毕赤酵母GS115‑pPICZαB‑MvLac5，测定发酵液中的漆酶活力，其活力为1.645 U/L。本发明专利技术提供的漆酶基因MvLac5的同源过表达工程菌及方法，克服了丝状真菌在导入外源基因片段时的困难。本发明专利技术的M.verrucaria野生型菌株108 h时漆酶达到最大活力为1676.97 U/L。重组菌株MvLac5‑2相较野生型提高了1.13倍；MvLac5‑7提高了1.19倍；MvLac5‑9提高了2.47倍。取漆酶活力最高的超表达菌株MvLac5‑9进行木质素降解率的分析，结果显示，野生型菌株对碱木质素降解率最高为36.73%，而过表达基因的工程菌的最大降解率高达77.60%，是野生型菌株的2.11倍，说明在M.verrucaria中过表达漆酶基因MvLac5可有效提高菌株的木质素降解能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种漆酶基因mvlac5的同源过表达工程菌及在木质素降解中的应用。

技术介绍

1、农作物秸秆是以纤维素、半纤维素和木质素为主要组成部分的一种重要生物质资源，但其综合利用水平亟待提升。木质素的降解可有效提高生物质资源在饲料、肥料、材料及生物转化领域的利用效率。相较于物理、化学法，微生物法具有环境安全，绿色友好，特异性强的优势。漆酶是木质素降解的关键酶之一。漆酶通过自由基催化反应机制催化氧化多种酚类化合物、木质素相关化合物和环境污染物。与细菌漆酶相比，真菌漆酶具有更高的氧化还原电位，可氧化多种底物。

2、研究表明，漆酶在各种微生物、昆虫和植物的基因组中通常以非等位多基因家族形式存在，在多数物种里漆酶具有多个同工酶。通过测序技术的快速发展，全基因组鉴定越来越常见，因此发现不同种属间不同来源的漆酶存在很大差异。目前多数基因组数据如褐腐真菌、动物和植物病原菌、外生菌根真菌、白腐真菌和腐食性生物得以公开，发现真菌中存在多个漆酶基因。此外，漆酶基因家族成员也被鉴定出存在于，如亚麻、甜高粱和水稻等植物中。但m.verrucaria中本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种含有疣孢漆斑菌漆酶基因MvLac5的工程菌，其特征在于：基因MvLac5的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于：其是将所述MvLac5基因与pBARGPE1-hygro连接形成pBARGPE1-hygro-MvLac5表达载体，转化至农杆菌EHA105中实现了基因MvLac5在疣孢漆斑菌中的同源过表达。

3.用于构建如权利要求1所述工程菌的表达载体，其特征在于：所述表达载体是优选将上述MvLac5基因与pBARGPE1-hygro连接，形成pBARGPE1-hygro-MvLac5表达载体。

4.如...

【技术特征摘要】

1.一种含有疣孢漆斑菌漆酶基因mvlac5的工程菌，其特征在于：基因mvlac5的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于：其是将所述mvlac5基因与pbargpe1-hygro连接形成pbargpe1-hygro-mvlac5表达载体，转化至农杆菌eha105中实现了基因mvlac5在疣孢漆斑菌中的同源过表达。

3.用于构建如...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏瑛杰，陈冰惠，唐珊珊，于潇潇，陈四季，苟泽昌，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：