一种猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株的PCR-HRM检测方法技术

技术编号:39945676 阅读:20 留言:0更新日期:2024-01-08 22:54
本发明专利技术公开了一种猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株的PCR‑HRM检测方法,属于病毒检测技术领域。本发明专利技术设计了一对新的用于猪流行性腹泻病毒疫苗株和野毒株鉴别的检测引物,其中,上游引物为:TTGCGTAAGATGGCACAAC,下游引物为:ATAACAGTAT CACCAAGCCATAG。通过该引物配合高分辨率熔解曲线技术,开发了一种特异性高、灵敏性好、准确性高的高通量检测方法,可用于猪流行性腹泻病毒不同毒株的鉴别。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株的pcr-hrm检测方法,属于病毒检测。


技术介绍

1、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,pedv)属于冠状病毒科冠状病毒属,病毒粒子的表面存在三种蛋白:膜蛋白(m)、纤突蛋白(s)、包膜蛋白(e),在病毒内部仅有核衣壳蛋白(n),这几种结构蛋白均由orf1基因阅读框编码。pedv是猪群中常流行的一种病毒,是检测阳性率较高的病毒之一。猪流行性腹泻(porcine epidemicdiarrhea,ped)是由pedv引起的以仔猪腹泻、呕吐和脱水为主要症状的一种急性、高度接触性肠道传染病,各种日龄的猪均易感,尤其是哺育仔猪,发病率高达100%,死亡率为60~100%。到目前为止,我国几乎所有的省份都报道了ped的发生和流行情况,这严重影响了我国养猪业的健康发展。对于ped的防控大多通过疫苗进行,但在实施免疫的同时,也存在免疫失败而被pedv野毒株感染的动物。鉴别pedv疫苗株和野毒株不仅可以评估养殖场是否有野毒株感染,而且对于猪场流行病学调查和疫苗免疫程序的制定具本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于猪流行性腹泻病毒的检测引物,其特征在于,核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示。

2.一种检测猪流行性腹泻病毒疫苗株和野毒株的方法,其特征在于,采用包括权利要求1所述检测引物的PCR-HRM反应体系,对含有猪流行性腹泻病毒的样本进行扩增和检测。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,采用所述PCR-HRM反应体系进行扩增的反应程序为:95℃预变性3min,95℃变性10s,52-65℃退火10s,72℃延伸10s,循环40次;95℃60s,40℃60s,65℃1s,97℃1s。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述反应程序...

【技术特征摘要】

1.一种用于猪流行性腹泻病毒的检测引物,其特征在于,核苷酸序列如seq id no.5-6所示。

2.一种检测猪流行性腹泻病毒疫苗株和野毒株的方法,其特征在于,采用包括权利要求1所述检测引物的pcr-hrm反应体系,对含有猪流行性腹泻病毒的样本进行扩增和检测。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,采用所述pcr-hrm反应体系进行扩增的反应程序为:95℃预变性3min,95℃变性10s,52-65℃退火10s,72℃延伸10s,循环40次;95℃60s,40℃60s,65℃1s,97℃1s。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述反应程序中退火温度为60℃。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述pcr-hrm反应体系为:green-2-go 2×qpcr-s mastermix体积为8-12μl,上、下游引物各0.2-0.4μl,temp 1-3μl...

【专利技术属性】
技术研发人员:贺笋李媛张盼潘晓梅曹剑杜久斌张超
申请(专利权)人:天康制药股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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